Ensayos para la detección de autoanticuerpos contra fármacos anti-TNF.

Mëtodo para detectar la presencia o el nivel de un autoanticuerpo contra un fármaco anti-TNF-α

en una muestra sin interferencia del fármaco anti-TNF-α en la muestra, comprendiendo el método:

(a) poner en contacto la muestra con un ácido para disociar los complejos preformados del autoanticuerpo y el fármaco anti-TNF-α, en el que la muestra presenta o se sospecha que presenta un autoanticuerpo contra el fármaco anti-TNF-α,

(b) poner en contacto la muestra con un fármaco anti-TNF-α marcado tras la disociación de los complejos preformados, en el que opcionalmente la etapa (b) comprende además poner en contacto un control interno marcado con la muestra,

(c) neutralizar el ácido en la muestra para formar complejos marcados del fármaco anti-TNF-α marcado y el autoanticuerpo,

(d) someter los complejos marcados a cromatografía de exclusión por tamaño para separar los complejos marcados, y

(e) detectar los complejos marcados, detectando de esta manera la presencia o el nivel del autoanticuerpo sin interferencia del fármaco anti-TNF-α en la muestra.

Ensayos para la detección de autoanticuerpos contra fármacos anti-TNF ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los trastornos autoinmunológicos son un problema médico significativo y muy extendido. Por ejemplo, la artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmunológica afecta a más de dos millones de personas en los Estados Unidos. La AR provoca una inflamación crónica de las articulaciones y típicamente es una enfermedad progresiva que presenta el potencial de causar la destrucción articular y discapacidad funcional. La causa de la artritis reumatoide es desconocida, aunque se han implicado en la etiología de la enfermedad la predisposición genética, agentes infecciosos y factores medioambientales. En la AR activa, entre los síntomas pueden incluirse la fatiga, la falta de apetito, la fiebre moderada, dolores musculares y articulares y la rigidez. Además, durante los brotes de la enfermedad, las articulaciones con frecuencia se enrojecen, se hinchan, y están dolorosas y sensibles, debido a la inflamación del sinovio. Además, debido a que la AR es una enfermedad sistémlca, la Inflamación puede afectar a órganos y áreas del cuerpo diferentes de las articulaciones, incluyendo glándulas de los ojos y la boca, el revestimiento pulmonar, el pericardio y los vasos sanguíneos.

Aarden et al. describen la inmunogenlcldad de los anticuerpos anti-factor de necrosis tumoral y proporcionan métodos de medición de anti-anticuerpos (Current Opinión in Immunology, Elsevler, Oxford, GB, vol. 2, n° 4, 1 de agosto de 28, páginas 431 a 435).

El documento n° US 29/35216 da a conocer un método para determinar la concentración y biodisponibilidad in vivo de biofarmacéuticos.

Sickert et al. comentan la mejora de la tolerancia farmacológica en los ensayos de Inmunogenlcldad mediante el tratamiento con ácido en Biacore (Journal of Immunological Methods, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, NL, vol. 334, n° 1-2, 2 de mayo de 28, páginas 29 a 36).

Lofgren et al. describen la detección de anticuerpos neutralizadores anti-proteína terapéutica en muestras de suero o plasma que contienen niveles elevados de la proteína terapéutica (Journal of Immunological Methods, Elsevier, Science Publishers B.V., Amsterdam, NL, vol. 38, n° 1-2, 2 de enero de 26, páginas 11 a 18).

Bourdage et al. dan a conocer un ensayo de captura por afinidad y elución (CAE) para la detección de anticuerpos antifármaco contra terapéuticos de anticuerpo monoclonal en presencia de niveles elevados de fármaco (Journal of Immunological Methods, Elsevier, Science Publishers B.V., Amsterdam, NL, vol. 327, n° 1-2, 25 de septiembre de 27, páginas 1 a 17).

Smith et al. describen la detección de anticuerpos contra proteínas terapéuticas en presencia de proteína terapéutica residual utilizando una extracción en fase sólida con tratamiento de las muestras mediante disociación ácida (SPEAD) previamente al ELISA (Regulatory Toxicology and Pharmacology, Academic Press, New York, NY, US, vol. 49, n° 3, 13 de noviembre de 27, páginas 23 a 237).

Patton et al. informan de un ELISA de puente con disociación ácida para la detección de anticuerpos dirigidos contra proteína terapéuticas en presencia del antígeno, Journal of Immunological Methods, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam, NL, vol. 34, n° 1-2, 1 de septiembre de 25, páginas 189 a 195).

Canan Abay et al. informan de la demostración de anticuerpos específicos contra infliximab inducidos durante el tratamiento de un paciente con espondilitis anquilosante (Rheumatology International; Clinical and Experimental Investigations, Springer, Berlín, DE, vol. 26, n° 5, 1 de marzo de 26, páginas 473 a 48).

Bendtzen et al. describen el seguimiento individualizado de la biodisponibilidad e inmunogenicidad farmacológicas en pacientes de artritis reumatoide tratados con el inhibidor del factor alfa de necrosis tumoral infliximab (Arthritis & Rheumatism, John Wiley & Sons, Inc., US, vol. 54, n° 12, 1 de diciembre de 26, páginas 3782 a 3789).

Rojas J.R. et al. informan de la formación, distribución y eliminación de complejos inmunológicos de infliximab y anti- infliximab en monos Cynomolgus (Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, American Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics, US, vol. 313, n° 2, 1 de mayo de 25, páginas 578 a 585).

Entre los tratamientos tradicionales para el control de la AR y otros trastornos autoinmunológicos se incluyen "fármacos de primera línea" de acción rápida y "fármacos de segunda línea", de acción más lenta. Los fármacos de primera línea reducen el dolor y la inflamación. Entre los ejemplos de dichos fármacos de primera línea se incluyen la aspirina, el naproxeno, el ibuprofeno, el etodolac y otros fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), así

como corticoesteroides, administrados por vía oral o inyectados directamente en los tejidos y articulaciones. Los fármacos de segunda línea inducen la remisión de la enfermedad y previenen la progresiva destrucción articular y también se denominan fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad o FAME. Entre los ejemplos de fármacos de segunda línea se incluyen el oro, la hidrocloroquina, la azulfidina y los agentes inmunosupresores, tal como el metotrexato, la azatloprina, la clclofosfamida, el clorambucilo y la clclosporlna. Sin embargo, muchos de estos fármacos presentan efectos secundarlos perjudiciales. D eesta manera, se han buscado terapias adicionales para la artritis reumatoide y otros trastornos autoinmunológicos.

El factor alfa de necrosis tumoral (TNF-a) es una citoquina producida por numerosos tipos celulares, incluyendo los monocitos y macrófagos, que originalmente se Identificó basándose en su capacidad de Inducir la necrosis de determinados tumores de ratón. Posteriormente, se demostró que un factor denominado caquectina, asociado a la caquexia, era idéntico al TNF-a. Se ha implicado el TNF-a en la fisiopatología de una diversidad de otras enfermedades y trastornos humanos, incluyendo el choque, la sepsis, infecciones, enfermedades autoinmunológicas, AR, enfermedad de Crohn, rechazo del trasplante y la enfermedad del injerto contra el huésped.

Debido al papel perjudicial del TNF-a humano (hTNF-a) en una diversidad de trastornos humanos, se han diseñado estrategias terapéuticas para inhibir o contrarrestar la actividad del TNF-a humano. En particular, se han buscado anticuerpos que se unen a hTNF-a y lo neutralizan como medio para inhibir la actividad de hTNF-a. Algunos de los primeros de dichos anticuerpos eran anticuerpos monoclonales (mAb) de ratón, secretados por hibridomas preparados a partir de linfocitos de ratones inmunizados con hTNF-a (ver, por ejemplo, la patente US n° 5.231.24, de Moeller et al.). Aunque dichos anticuerpos anti-hTNF-a de ratón con frecuencia muestran una elevada afinidad para hTNF-a y son capaces de neutralizar la actividad de hTNF-a, su utilización in vivo se ha limitado a los problemas asociados a la administración de anticuerpos de ratón en seres humanos, tales como una semivida en suero corta, una incapacidad de inducir determinadas funciones efectoras humanas y la inducción de una respuesta inmunológica no deseada contra anticuerpos de ratón en un ser humano (la reacción "anticuerpo humano antiratón" (HAMA)).

Más recientemente, se han aplicado terapias biológicas al tratamiento de trastornos autoinmunológicos tales como la artritis reumatoide. Por ejemplo, la FDA ha aprobado para el tratamiento de la artritis reumatoide cuatro inhibidores de TNF-a: REMICADE (infliximab), un mAb quimérico anti-TNF-a, ENBREL TM (etanercept), una proteína de fusión TNFR-Fc de Ig, HUMIRA (adalimumab), un mAb humano anti-TNF-a y CIMZIA® (certolizumab pegol), un fragmento Fab PEGilado. También se utiliza CIMZIA® para el tratamiento de enfermedad de Crohn (EC) moderada a grave. Aunque dichas terapias biológicas han demostrado tener éxito en el tratamiento de la artritis reumatoide y otros trastornos autoinmunológicos tales como la EC, no todos los sujetos tratados responde, o responden bien, a dicha terapia. Además, la administración de inhibidores de TNF-a puede inducir una respuesta inmunológica al fármaco y conducir a la producción de autoanticuerpos, tales como anticuerpos humanos antiquiméricos (HACA), anticuerpos humanos antihumanizados (HAHA) y anticuerpos humanos antiratón (HAMA). Dichas respuestas inmunológicas HACA, HAHA o HAMA pueden asociarse a reacciones de hipersensibilidad y cambios drásticos en la farmacocinética y distribución biológica del inhibidor inmunoterapéutico de TNF-a que impiden el tratamiento posterior con el fármaco. De esta manera, existe una necesidad en la técnica de ensayos para detectar la presencia... [Seguir leyendo]

1. Método para detectar la presencia o el nivel de un autoanticuerpo contra un fármaco anti-TNF-a en una muestra sin interferencia del fármaco anti-TNF-a en la muestra, comprendiendo el método:

(a) poner en contacto la muestra con un ácido para disociar los complejos preformados del autoanticuerpo y el fármaco anti-TNF-a, en el que la muestra presenta o se sospecha que presenta un autoanticuerpo contra el fármaco anti-TNF-a,

(b) poner en contacto la muestra con un fármaco anti-TNF-a marcado tras la disociación de los complejos preformados, en el que opcionalmente la etapa (b) comprende además poner en contacto un control interno marcado con la muestra,

(c) neutralizar el ácido en la muestra para formar complejos marcados del fármaco anti-TNF-a marcado y el autoanticuerpo,

(d) someter los complejos marcados a cromatografía de exclusión por tamaño para separar los complejos marcados, y

(e) detectar los complejos marcados, detectando de esta manera la presencia o el nivel del autoanticuerpo sin interferencia del fármaco anti-TNF-a en la muestra.

2. Método según la reivindicación 2, en el que la muestra se pone en contacto con un ácido a una concentración de entre ,1 M y 5 M.

3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el ácido se neutraliza mediante la adición de uno o más agentes neutrallzadores a la muestra.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la muestra se obtiene de un sujeto que recibe terapia con un fármaco antl-TNF-a.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que los complejos se eluyen en primer lugar, seguido de fármaco antl-TNF-a marcado libre.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el fármaco anti-TNF-a se marca con un fluorofóro o un pigmento fluorescente.

7. Método para optimizar la terapia y/o reducir la toxicidad de un fármaco anti-TNF-a en un sujeto que recibe un curso de terapia con el fármaco anti-TNF-a, comprendiendo el método:

(a) detectar la presencia o el nivel de un autoanticuerpo contra el fármaco anti-TNF-a en una muestra del sujeto sin interferencia del fármaco antl-TNF-a en la muestra, comprendiendo el método:

(i) poner en contacto la muestra con un ácido para disociar los complejos preformados del autoanticuerpo y el fármaco anti-TNF-a, en el que la muestra presenta o se sospecha que presenta un autoanticuerpo contra el fármaco anti-TNF-a,

(¡i) poner en contacto la muestra con un fármaco anti-TNF-a marcado tras la disociación de los complejos preformados,

(i¡¡) neutralizar el ácido en la muestra para formar complejos marcados del fármaco anti-TNF-a marcado y

el autoanticuerpo,

(iv) someter los complejos marcados a cromatografía de exclusión por tamaño para separar los complejos

marcados, y

(v) detectar los complejos marcados, detectando de esta manera la presencia o el nivel del autoanticuerpo sin interferencia del fármaco anti-TNF-a en la muestra, y

(b) determinar una dosis posterior del curso de terapia para el sujeto o si debería administrarse un curso de terapia diferente en el sujeto basándose en la presencia o el nivel del autoanticuerpo, optimizando de esta manera la terapia y/o reduciendo la toxicidad del fármaco anti-TNF-a.

8. Método según la reivindicación 7, en el que la dosis posterior del curso de terapia se incrementa, se reduce o se mantiene basándose en la presencia o el nivel del autoanticuerpo.

9. Método según la reivindicación 7 ó 8, en el que el diferente curso de terapia puede comprender un fármaco antl-TNF-a diferente, o en el que el diferente curso de terapia comprende el curso de terapia actual conjuntamente con un agente inmunosupresor, o en el que el diferente curso de terapia comprende cambiar a un curso de terapia que no sea de un fármaco anti-TNF-a.

1. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el fármaco anti-TNF-a se selecciona de entre el grupo que consiste de ¡nfliximab, etanercept, adalimumab, certolizumab pegol, golimumab, CNTO 148 y combinaciones de los mismos.

11. Método según cualqueira de las reivindicaciones 1 a 1, en el que el autoanticuerpo contra el fármaco anti- TNF-a puede seleccionarse de entre el grupo que consiste de un anticuerpo humano antiquimérico (HACA), un anticuerpo humano antihumanizado (HAHA), un anticuerpo humano antiratón (HAMA) y combinaciones de los mismos.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el ácido puede comprender un ácido orgánico, un ácido inorgánico, o mezclas de los mismos, en el que opcionalmente el ácido orgánico comprende ácido cítrico.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la presencia o el nivel del autoanticuerpo

se detecta en presencia de un nivel elevado del fármaco anti-TNF-a, en el que opcionalmente el nivel elevado del fármaco anti-TNF-a corresponde a un nivel de fármaco anti-TNF-a de entre 1 y 1 pg/ml.

14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que la cromatografía de exclusión por 15 tamaño es cromatografía líquida de alto rendimiento de exclusión por tamaño (HPLC-ET).

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la muestra es suero.