Ensayo pronóstico de supervivencia.

Método de examen de salud general, que comprende detectar una cantidad de cadenas ligeras libres (CLL) en una muestra de un sujeto y compararla con un valor predeterminado,

en el que una cantidad más baja de CLL se asocia a una supervivencia incrementada y/o una salud general mejor del sujeto, y un nivel más alto de CLL indica la posible presencia de un problema médico no detectado.

Ensayo pronóstico de supervivencia

La invención se refiere a un ensayo pronóstico para la determinación de la supervivencia probable de un 5 sujeto o individuo según se define en las reivindicaciones.

Existen varios factores previamente identificados que, medidos en un sujeto, tal como un individuo humano, son indicativos de la probable supervivencia a largo plazo de ese individuo. Entre ellos se incluyen, por ejemplo, el colesterol, la proteína C reactiva (CRP) y la cistatina C. Los niveles elevados de estos compuestos se asocian a 10 diabetes, hipertensión y enfermedades cardiovasculares y alteraciones renales.

Los solicitantes han estudiado durante muchos años las cadenas ligeras libres como medio de someter a ensayo un amplio abanico de gammapatías monoclonales en pacientes. La utilización de dichas cadenas ligeras libres en el diagnóstico se revisa en detalle en la obra "Serum Free Light Chain Analysis, quinta edición, 2008, A.R. 15 Bradwell et al., ISBN 0704427028".

Los anticuerpos comprenden cadenas pesadas y cadenas ligeras. Habitualmente presentan una simetría binaria y están compuestos de dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas, conteniendo cada una dominios de región variable y constante. Los dominios variables de cada pareja de cadena ligera/cadena 20 pesada se combinan formando un sitio de unión a antígeno, de manera que ambas cadenas contribuyen a la especificidad de unión a antígeno de la molécula de anticuerpo. Las cadenas ligeras son de dos tipos, κ y λ, y se produce cualquier molécula de anticuerpo dada con uno de los dos tipos de cadena ligera pero nunca con ambos. Existen aproximadamente dos veces más moléculas κ que λ en el ser humano, aunque este dato es diferente en algunos mamíferos. Habitualmente las cadenas ligeras se encuentran unidas a las cadenas pesadas. Sin embargo, 25 pueden detectarse algunas "cadenas ligeras libres" no unidas en el suero o la orina de los individuos. Las cadenas ligeras libres pueden identificarse específicamente cultivando anticuerpos contra la superficie de la cadena ligera libre que normalmente se encuentra oculta por la unión de la cadena ligera a la cadena pesada. En las cadenas ligeras libres (CLL) , esta superficie se encuentra expuesta, permitiendo que sea detectada inmunológicamente. Entre los kits disponibles comercialmente para la detección de cadenas ligeras libres κ o λ se incluyen, por ejemplo, 30 "FreeliteTM", fabricado por The Binding Site Limited, Birmingham, Reino Unido. Los solicitantes han identificado previamente que la medición de la cantidad de κ libre, de λ libre y/o de la proporción de κ libre/λ libre, permite la detección de gammapatías monoclonales en los pacientes. Se ha utilizado, por ejemplo, como ayuda en el diagnóstico de mieloma múltiple de inmunoglobulinas intactas (MM) , MM de cadenas ligeras, MM no secretorio, amiloidosis AL, enfermedad de deposición de cadenas ligeras, MM indolente, plasmacitoma y GMSI (gammapatías 35 monoclonales de significado incierto) . La detección de CLL también ha sido utilizada, por ejemplo, como ayuda en el diagnóstico de otras discrasias de las células B y en efecto, como alternativa al análisis de las proteínas urinarias de Bence Jones para el diagnóstico de gammapatías monoclonales en general.

Convencionalmente, se busca un incremento de una de las cadenas ligeras, λ o κ. Por ejemplo, los mielomas 40 múltiples resultan de la multiplicación monoclonal de una célula plasmática maligna, resultando en un incremento en un único tipo de célula que produce un único tipo de inmunoglobulina. Esto resulta en un incremento de la cantidad de cadenas ligeras libres, λ o κ, observado en un individuo. Este incremento de la concentración puede determinarse, y habitualmente se determina la proporción entre κ libre y λ libre y se compara con el intervalo normal. Esto ayuda en el diagnóstico de las enfermedades monoclonales. Además, los ensayos de cadenas ligeras libres 45 también pueden utilizarse para el seguimiento del tratamiento de la enfermedad en los pacientes. Puede llevarse a cabo el pronóstico de los pacientes, por ejemplo tras el tratamiento de la amiloidosis AL.

Katzman et al. (Clin. Chem. 48 (9) :1437-1944, 2002) comentan los intervalos de referencia en suero y los intervalos diagnósticos para las inmunoglobulinas κ y λ libres en el diagnóstico de las gammapatías monoclonales. 50 Se estudiaron los individuos entre 21 y 90 años mediante inmunoensayo y se compararon con los resultados obtenidos mediante inmunofijación para optimizar el inmunoensayo para la detección de cadenas ligeras libres (CLL) monoclonales en individuos con discrasia de células B.

Se registraron las cantidades de CLL κ y λ y las proporciones κ/λ, permitiendo determinar un intervalo de referencia para la detección de las discrasias de células B. 55

El documento nº EP 0336472A da a conocer un método para determinar la presencia de cadenas ligeras libres en muestras de orina. Éste se utiliza para examinar las cadenas ligeras en la orina en enfermedades inmunoproliferativas tales como el mieloma múltiple y en enfermedades hiperproliferativas tales como la artritis reumatoide aguda. 60

El documento nº DE 20 2004 012479U da a conocer un sistema semicuantitativo destinado a buscar cadenas ligeras libres (proteínas de Bence Jones) en orina y en plasma.

Los solicitantes ahora han identificado que el ensayo para CLL y especialmente las CLL totales puede utilizarse para predecir la supervivencia a largo plazo de los individuos, incluso en el caso de que el individuo sea un sujeto aparentemente sano. Se ha encontrado que la concentración de CLL está asociada de manera estadísticamente significativa a la supervivencia a largo plazo. Además, esta asociación aparentemente es similar o mejor que la asociación para marcadores pronósticos de supervivencia a largo plazo ya existentes, tales como el 5 colesterol, la creatinina, la cistatina C y la proteína C reactiva.

La concentración de CLL en suero de individuos que son aparentemente sanos se ve influida en cierto grado por la capacidad de los riñones del individuo de filtrar y excretar las CLL. En individuos en los que se encuentra limitada la eliminación de las CLL, se produce un incremento de los niveles de CLL observados en el suero. Como 10 consecuencia, ahora se cree que las CLL son un buen marcador de la función renal. Debido a que las moléculas de CLL kappa monoméricas (25 kDa) son de tamaño diferente a las moléculas lambda diméricas (50 kDa) , conjuntamente son mejores marcadores de la filtración glomerular que, por ejemplo, la cistatina C (10 kDa) . Sin embargo, en contraste con la cistatina C, la producción de las CLL durante la proliferación de las células B es una consecuencia de muchas enfermedades, de manera que las CLL séricas típicamente no se utilizan de manera 15 aislada como marcador de la función renal. Los datos indican que incluso en pacientes con enfermedad renal crónica (ERC) , las CLL proporcionan la probabilidad de supervivencia, con independencia de la función renal.

Sin embargo, los marcadores de la proliferación/actividad de las células B son importantes y debido a que las células B son responsables de producir las CLL, ello resulta clínicamente útil. La producción de CLL es un indicador 20 temprano de regulación positiva de las células B. A este respecto, puede complementar la utilización de CRP, que es un marcador mediado por las células T de las respuestas inflamatorias

Las concentraciones elevadas de CLL pueden ser perfectamente una indicación de problemas renales crónicas, de activación de las células B o de proliferación de las células B. Por lo tanto, un resultado de ensayo 25 anormal de las CLL puede ser un marcador de una diversidad de trastornos que actualmente requieren varios ensayos en combinación. La inversa de lo anterior, cuando los resultados de ensayo de las CLL son normales, indica una buena función renal y la ausencia de activación o proliferación de las células B. Por lo tanto, ahora se ha reconocido la concentración de las CLL como un buen indicador de la salud general de un individuo.

La invención proporciona un método de cribado general de la salud que comprende detectar una cantidad de cadenas ligeras libres (CLL) en una muestra de un sujeto y compararla con un valor predeterminado, en el que una cantidad más baja se asocia a una supervivencia incrementada y/o una salud general mejor, y un nivel más alto de CLL indica la posible presencia de un problema médico no detectado. El ensayo puede utilizarse, por ejemplo, como parte de una revisión médica general. Alternativamente, podría utilizarse en pacientes que... [Seguir leyendo]

1. Método de examen de salud general, que comprende detectar una cantidad de cadenas ligeras libres (CLL) en una muestra de un sujeto y compararla con un valor predeterminado, en el que una cantidad más baja de CLL se asocia a una supervivencia incrementada y/o una salud general mejor del sujeto, y un nivel más alto de CLL indica la 5 posible presencia de un problema médico no detectado.

2. Método según la reivindicación 1, en el que el sujeto no manifiesta síntomas evidentes de una enfermedad potencialmente mortal, tal como una enfermedad o discrasia de las células B.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la cantidad de cadenas ligeras libres es la cantidad de cadenas ligeras libres totales en la muestra.

4. Método según las reivindicaciones 1 a 3, en el que las CLL se determinan en una muestra de suero del sujeto. 15

5. Método según las reivindicaciones 1 a 4, en el que las CLL se determinan mediante inmunoensayo utilizando los anticuerpos anti-cadena ligera libre.

6. Método según la reivindicación 5, en el que los anticuerpos son una mezcla de anticuerpos anti-cadena 20 ligera libre κ y anti-cadena ligera libre λ.

7. Método según las reivindicaciones 1 a 6, en el que el método comprende detectar la cantidad de CLL mediante nefelometría o turbidimetría.

8. Método según las reivindicaciones 1 a 7, que comprende detectar las CLL con un ensayo diagnóstico capaz de detectar niveles de CLL inferiores a 3 mg/l.

9. Método según la reivindicación 8, en el que el ensayo es capaz de detectar niveles de CLL de entre 1 mg/l y 80 mg/l. 30

10. Método según las reivindicaciones 1 a 9, en el que la muestra es una muestra de suero y una cantidad inferior a 25 mg/l de CLL totales indica una probabilidad incrementada de supervivencia global del sujeto.

11. Método según las reivindicaciones 1 a 10, que comprende adicionalmente la etapa de determinar una 35 cantidad de colesterol, creatinina, cistatina C o proteína C reactiva (CRP) en una muestra del sujeto.