Detección de péptidos solubles del receptor de adiponectina y uso en diagnóstico y en terapéutica.

Un método para predecir una condición, determinar el avance de una condición,

el inicio de una condición, o la eficacia del tratamiento de una condición, estando dicha condición caracterizada por un desequilibrio de adipocitos y siendo seleccionada del grupo que consiste de obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo II, síndrome metabólico, dislipidemia, enfermedad cardiovascular, hipertensión, obstrucción vascular, diabetes tipo I, inflamación y arteriosclerosis por medio de la detección de la fragmentación de un receptor de adiponectina en un sujeto que comprende la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C del receptor de adiponectina en una muestra de fluido biológico obtenida del sujeto,

en donde la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C comprende la determinación del nivel total de los fragmentos solubles del terminal C y en donde dicho método es para predecir dicha condición y un incremento del nivel total de fragmentos solubles del terminal C con relación a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativa de que dicho sujeto tiene una condición; o

en donde la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C comprende la determinación del nivel total de los fragmentos solubles del terminal C y en donde dicho método es para determinar el avance de una condición y un incremento en relación con una medición anterior es indicativa de un empeoramiento de dicha condición; o

en donde dicho al menos un fragmento soluble del terminal C tiene de 25 a 34 aminoácidos de longitud y comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo de secuencias que consiste de las SEQ ID NOs: 1, 2, 4 a 10, 23, 24 y 26 a 33 o una secuencia con una identidad del 80% o mayor con el mismo y en donde una menor cantidad de dicho al menos un fragmento soluble del terminal C con 25 a 34 aminoácidos de longitud con respecto a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativo de que dicho sujeto que tiene una condición o un incremento con respecto a una medición anterior es indicativa de un empeoramiento de dicha condición; o

en donde dicho al menos un fragmento soluble del terminal C tiene de 13 a 24 aminoácidos de longitud y comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo de secuencias que consiste de las SEQ ID NOs: 3, 12 a 22, 25 y 34 a 44 o una secuencia con una identidad del 80% o mayor con el mismo y en donde una mayor cantidad de dicho al menos un fragmento soluble del terminal C con 13 a 24 aminoácidos de longitud con respecto a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativo de que dicho sujeto que tiene una condición

Detección de péptidos solubles del receptor de adiponectina y uso en diagnóstico y en terapéutica.

Referencia cruzada con la solicitud relacionada Esta solicitud reivindica los beneficios de la Solicitud Provisional de los Estados Unidos No. 60/748.305 presentada el 7 de diciembre de 2005.

Campo de la invención La presente invención se refiere a fragmentos solubles del terminal C del receptor de adiponectina y su uso en el diagnóstico y tratamiento de trastornos.

Antecedentes de la invención La obesidad con inflamación crónica tiene una población grande y creciente. Esta población tiene claramente un alto riesgo cardiovascular y de diabetes, y con frecuencia se desarrolla el síndrome metabólico con resistencia a la insulina. Recientemente se han descubierto la adiponectina y otras adipoquinas como hormonas de células grasas que controlan el metabolismo de la glucosa. Tanto el tipo y como la ubicación de las células grasas son importantes. La obesidad produce adipocitos adicionales que secretan adiponectina en Ia sangre ayudando al metabolismo de las células del músculo de grasas y glucosa. Algunos pacientes con sobrepeso se vuelvan resistentes a la insulina. En este caso, los adipocitos dejan de producir adiponectina. Los niveles de adiponectina en la sangre se reducen en condiciones de obesidad, resistencia a la insulina y diabetes tipo 2. Existen métodos para la medición de los niveles de adiponectina en los sujetos para el pronóstico de estos y otros estados de enfermedad. La medición de los niveles de adiponectina, sin embargo, ha demostrado ser un indicador débil de la enfermedad. Existe la necesidad de mejores métodos para controlar los estados de enfermedad asociados con la actividad anormal de los adipocitos. La presente invención satisface esta y otras necesidades.

Resumen Los presentes inventores han descubierto, que fragmentos del terminal C del receptor de adiponectina son solubles y pueden ser detectados en los fluidos corporales. La presente invención proporciona el método de la reivindicación 1.

Los métodos para la detección de la fragmentación de un receptor de adiponectina en una muestra de fluido biológico obtenida de un sujeto puede comprender las etapas de analizar la presencia o ausencia de al menos un fragmento soluble del terminal C del receptor de adiponectina. En ciertas formas de realización, se determina la concentración total de fragmentos del terminal C en una muestra biológica.

Los métodos para la detección del nivel de expresión de un receptor de adiponectina en un sujeto se divulgan en la presente invención. Estos métodos pueden comprender las etapas de determinar el nivel de al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina en una muestra de fluido bilógico y correlacionar el nivel del fragmento del terminal C con el nivel de expresión del receptor de adiponectina. En ciertas formas de realización, se determina la concentración total de fragmentos del terminal C en una muestra biológica.

Los métodos para detectar el nivel de expresión de adiponectina en un sujeto se divulgan en la presente invención. Estos métodos pueden componer las etapas de determinar el nivel de al menos un fragmento de terminal C del receptor de adiponectina en una muestra de fluido biológico y correlacionar el nivel del fragmento del terminal C con el nivel de expresión de adiponectina. En ciertas formas de realización, se determina la concentración total de fragmentos del terminal C en una muestra biológica.

Los métodos para determinar el avance de una condición, el inicio de una condición, es decir, el diagnóstico, o la eficacia del tratamiento, es decir, la sensibilidad de un individuo a la terapia con un fármaco particular, están abarcados por la presente invención. Preferiblemente, la condición estará asociada con patrones de fragmentación anormales de un receptor de adiponectina. Estos métodos pueden comprender las etapas de determinar el nivel de al menos un fragmento de terminal C del receptor adiponectina en una muestra de fluido biológico y correlacionar el nivel del fragmento de terminal C con el avance de la condición, el inicio de la condición, o eficacia del tratamiento. En ciertas formas de realización, se determina la concentración total de fragmentos del terminal C en una muestra biológica.

En los métodos de la presente invención, se puede detectar uno o más (es decir, al menos un) fragmento soluble de terminal C del receptor adiponectina. Por ejemplo, se puede detectar cualquier combinación de fragmentos 1 a 22 de AdipoR1 y/o AdipoR2. En ciertas formas de realización, se pueden detectar los fragmentos 1 a 22 de AdipoR1 y/o AdipoR2 y diferenciarlos por sus masas. Por lo tanto la presente invención proporciona métodos para la determinación del nivel de fragmentos que tienen, por ejemplo, masas aproximadamente desde 1 kDa hasta aproximadamente 3 kDa, incluyendo, por ejemplo, una masa de aproximadamente 2 kDa (por ejemplo, fragmentos representados por las SEQ ID NOs: 3, 12 - 22, 25, y 34 - 44) o fragmentos que tienen masas desde aproximadamente 3, 5 hasta aproximadamente 4, 2 kDa, incluyendo por ejemplo una masa de aproximadamente 3, 9 kDa (por ejemplo, fragmentos representadas por las SEQ ID NOs: 1, 2, 4 - 11, 23, 24 y 26 - 33) . Estos tamaños de fragmentos están típicamente presentes como monómeros. La presente invención también proporciona métodos para determinar el nivel de fragmentos que tienen, por ejemplo, masas de aproximadamente 2 kDa hasta aproximadamente 6 kDa, incluyendo por ejemplo una masa de aproximadamente 4 kDa o masas de aproximadamente 7 kDa hasta aproximadamente 8, 4 kDa, incluyendo, por ejemplo, una masa de aproximadamente 7, 8 kDa. Estos tamaños de fragmentos están típicamente presentes como dímeros.

En los métodos de la presente invención, uno o más fragmentos solubles de terminal C del receptor de adiponectina (por ejemplo, las SEQ ID NOs: 1 - 44) pueden ser detectados cuando se enlazan a una proteína portadora. Por ejemplo, se puede detectar cualquier combinación de fragmentos de 1 a 22 de AdipoR1 y / o AdipoR2 cuando se une a una proteína portadora. Por consiguiente, en ciertas formas de realización, la presente invención proporciona métodos para determinar el nivel de fragmentos que tienen masas de aproximadamente 4.5 - 6.9, 7 - 8.2, 9 - 11, 13 15, 17 - 19, 27 - 29, o 30 - 34 kDa. En ciertas formas de realización, la proteína portadora es adiponectina, incluyendo fragmentos de adiponectina. En ciertas formas de realización, el receptor de adiponectina combinado con adiponectina enlazada tiene una masa de aproximadamente 3 - 5, 4 - 8, 7 - 11, 13 - 17, 22 - 26 o 28 - 32 kDa. La presente invención proporciona métodos de detección de estos fragmentos.

Se divulgan además polipéptidos que son sustancialmente idénticos a fragmentos que tienen las secuencias de las SEQ ID NOs: 1 a 44 y las secuencias de ácidos nucleicos que corresponden a estos fragmentos. También se incluyen anticuerpos que se unen específicamente a al menos uno de los fragmentos del terminal C del receptor de adiponectina proporcionado en lal presente invención.

Se divulga además un kit para su uso en la determinación de la estrategia de tratamiento para un individuo con cualquiera de los trastornos descritos en el presente documento que comprende un medio para detectar al menos uno de los fragmentos descritos en el presente documento; y opcionalmente instrucciones para el uso y la interpretación de los resultados del kit. El kit también puede comprender, por ejemplo, un medio para obtener una muestra biológica de un individuo.

Descripción detallada de formas de realización ilustrativas I. Introducción Los presentes inventores han descubierto, que los fragmentos del terminal C del receptor de adiponectina son solubles y se pueden detectar en fluidos corporales. Además, los presentes inventores han observado que la presencia o ausencia de ciertos fragmentos solubles del receptor adiponectina en los fluidos corporales es predictivo de la enfermedad y que el nivel, es decir, la concentración de fragmentos solubles totales del receptor de adiponectina en el fluido corporal es predictivo de la enfermedad.

Se debe entender que la invención descrita en el presente documento no se limita a métodos, reactivos, compuestos, composiciones o sistemas biológicos particulares, que pueden, por supuesto, variar. También se debe entender que la terminología utilizada aquí tiene el propósito de describir formas de realización particulares solamente, y no se pretende que se constituya en limitante. Tal como se utiliza en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una, uno" y "el, la" incluyen los respectivos plurales a menos... [Seguir leyendo]

1. Un método para predecir una condición, determinar el avance de una condición, el inicio de una condición, o la eficacia del tratamiento de una condición, estando dicha condición caracterizada por un desequilibrio de adipocitos y siendo seleccionada del grupo que consiste de obesidad, resistencia a la insulina, diabetes tipo II, síndrome metabólico, dislipidemia, enfermedad cardiovascular, hipertensión, obstrucción vascular, diabetes tipo I, inflamación y arteriosclerosis por medio de la detección de la fragmentación de un receptor de adiponectina en un sujeto que comprende la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C del receptor de adiponectina en una muestra de fluido biológico obtenida del sujeto,

en donde la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C comprende la determinación del nivel total de los fragmentos solubles del terminal C y en donde dicho método es para predecir dicha condición y un incremento del nivel total de fragmentos solubles del terminal C con relación a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativa de que dicho sujeto tiene una condición; o en donde la etapa de determinar el nivel de al menos un fragmento soluble del terminal C comprende la determinación del nivel total de los fragmentos solubles del terminal C y en donde dicho método es para determinar el avance de una condición y un incremento en relación con una medición anterior es indicativa de un empeoramiento de dicha condición; o en donde dicho al menos un fragmento soluble del terminal C tiene de 25 a 34 aminoácidos de longitud y comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo de secuencias que consiste de las SEQ ID NOs: 1, 2, 4 a 10, 23, 24 y 26 a 33 o una secuencia con una identidad del 80% o mayor con el mismo y en donde una menor cantidad de dicho al menos un fragmento soluble del terminal C con 25 a 34 aminoácidos de longitud con respecto a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativo de que dicho sujeto que tiene una condición o un incremento con respecto a una medición anterior es indicativa de un empeoramiento de dicha condición; o en donde dicho al menos un fragmento soluble del terminal C tiene de 13 a 24 aminoácidos de longitud y comprende un péptido con una secuencia seleccionada del grupo de secuencias que consiste de las SEQ ID NOs: 3, 12 a 22, 25 y 34 a 44 o una secuencia con una identidad del 80% o mayor con el mismo y en donde una mayor cantidad de dicho al menos un fragmento soluble del terminal C con 13 a 24 aminoácidos de longitud con respecto a un sujeto no enfermo del receptor de adiponectina es indicativo de que dicho sujeto que tiene una condición o un incremento con respecto a una medición anterior es indicativa de un empeoramiento de dicha condición.

2. El método de la reivindicación 1 en donde al menos un fragmento del terminal C está enlazado a adiponectina.

3. El método de la reivindicación 1 en donde al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina se detecta por medio de un anticuerpo.

4. El método de la reivindicación 1 en donde al menos un fragmento del terminal C enlazado a adiponectina se detecta por medio de un anticuerpo.

5. El método de la reivindicación 1 en donde la etapa de analizar la presencia de al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina en el fluido biológico comprende poner en contacto la muestra con un agente de enlazamiento específico para al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina.

6. El método de la reivindicación 5 en donde el agente de enlazamiento comprende un anticuerpo.

7. El método de la reivindicación 6 en donde el anticuerpo está marcado con una molécula reportera.

8. El método de la reivindicación 5 en donde la etapa de analizar la presencia de al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina en los fluidos biológicos comprende además poner en contacto la muestra con un segundo agente de enlazamiento específico para el primer agente de enlazamiento.

9. El método de la reivindicación 8 en donde el segundo agente de enlazamiento es un anticuerpo.

10. El método de la reivindicación 9 en donde el segundo agente de enlazamiento se marca con una molécula reportera.

11. El método de la reivindicación 1 en donde la etapa de analizar la presencia de al menos un fragmento del terminal C del receptor de adiponectina en el fluido biológico comprende poner en contacto la muestra con un agente de enlazamiento específico para la adiponectina enlazada a al menos un fragmento del receptor de adiponectina y el método comprende además la etapa de determinar si la adiponectina se enlaza a al menos un fragmento del

receptor de adiponectina.

12. El método de la reivindicación 1 en donde el fluido corporal es plasma sanguíneo o sangre entera.

13. El método de la reivindicación 1 en donde el fluido corporal es orina.

14. El método de la reivindicación 1 que comprende además determinar el nivel de adiponectina en una muestra biológica obtenida del sujeto y correlacionar el nivel de adiponectina con el avance de la condición, el inicio de la condición, o la eficacia del tratamiento de la condición.

15. El método de la reivindicación 1 que comprende además determinar el nivel de bikunina en una muestra biológica obtenida del sujeto y correlacionar el nivel de bikunina con el avance de la condición, el inicio de la condición, o la eficacia del tratamiento de la condición.

16. El método de la reivindicación 1 que comprende además determinar el nivel de proteína reactiva C en una muestra biológica obtenida del sujeto y correlacionar el nivel de proteína reactiva C con el avance de la condición, el inicio de la condición, o la eficacia del tratamiento de la condición.

17. El método de la reivindicación 1 que comprende determinar el nivel de glóbulos blancos en una muestra biológica obtenida del sujeto y correlacionar el nivel de glóbulos blancos con el avance de la condición, el inicio de la condición, o la eficacia del tratamiento de la condición.

18. El método de la reivindicación 1 que comprende además determinar el nivel del péptido C en una muestra biológica obtenida del sujeto y correlacionar el nivel del péptido C con el avance de la condición, el inicio de la enfermedad, o la eficacia de tratamiento de la condición.

19. El método de la reivindicación 18 en donde el tratamiento es la administración de un agonista de PPAR gamma.

20. El método de la reivindicación 1 en donde la enfermedad cardiovascular es insuficiencia cardíaca congestiva, infarto agudo de miocardio, enfermedad de la arteria coronaria, aterosclerosis, o isquemia.

21. El método de la reivindicación 1 para determinar si un sujeto que tiene arteriosclerosis es propenso a desarrollar enfermedad cardiovascular.

22. El método de la reivindicación 21 en donde la enfermedad cardiovascular es insuficiencia cardíaca congestiva, infarto agudo de miocardio, o isquemia.