Compuestos inmunogénicos que comprenden péptido gp41 de VIH acoplado a proteína portadora CRM197.

Compuesto inmunogénico que comprende un péptido seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas (VIa) y (VIb):

NH2-(A1)m-SEQ ID No. 2-(A2)n-COOH (VIa),

NH2-(A1)m-SEQ ID No. 6-(A2)n-COOH (VIb),

en las que:

- m es un número entero que significa 0 ó 1,

- n es un número entero que significa 0 ó 1,

- A1 es un residuo de aminoácido, y

- A2 es un residuo de aminoácido,

péptido de fórmula (VIa) o (VIb) que está unido covalentemente a una proteína portadora que consiste en una proteína CRM197.

Compuestos inmunogénicos que comprenden péptido gp41 de VIH acoplado a proteína portadora CRM197

Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de vacunas dirigidas contra virus de la familia de VIH.

Antecedentes Aproximadamente el 90% de las infecciones por VIH en seres humanos están provocadas por un virus VIH-1. El virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) se caracteriza por una variabilidad genética sorprendente provocada por la acumulación de mutaciones, que surgen durante la replicación viral, y también provocada por los acontecimientos de recombinación. El fracaso a largo plazo de los métodos quimioterapéuticos de tratamiento de VIH se explica particularmente por la alta actividad mutagénica de cepas virales de VIH-1. Se mostró anteriormente que han surgido rápidamente variantes virales resistentes en pacientes tras diferentes ciclos de terapia antirretroviral e incluso tras terapia con múltiples fármacos (TARGA) . Estos virus resistentes llevan alteraciones específicas en la conformación y estructura de sus proteínas. Habitualmente, tales mutaciones responsables del escape de VIH-1 de los tratamientos actuales se mantienen a través de sucesivas generaciones de virus y se acumulan, como resultado de selección en las condiciones de tratamiento.

El tratamiento con medicamentos anti-VIH-1 no bloquea totalmente la replicación del virus, lo que permite una selección y acumulación de mutaciones de resistencia preexistentes, así como de mutaciones recién producidas, proporcionando así nuevas oportunidades para que el virus continúe diseminándose. Los medicamentos antirretrovirales existentes (NRTI, NNRTI, inhibidores de la proteasa, inhibidores de la fusión y mezclas de los mismos, como TARGA) sólo pueden ralentizar la replicación de VIH-1 durante un periodo de tiempo más o menos prolongado, hasta el surgimiento y la propagación de cepas virales resistentes. La amplia diseminación de variantes de VIH-1 resistentes genera graves problemas y requiere la disponibilidad de herramientas terapéuticas anti-VIH-1 adicionales.

Además, a pesar de los claros beneficios de la TARGA, sigue habiendo inconvenientes: muchos efectos secundarios (lipodistrofia, acidosis láctica, resistencia a la insulina, enfermedad renal crónica, hiperlipidemia...) , tratamiento durante toda la vida, alto cumplimiento requerido, resistencias virales, persistencia de efectos patógenos de la infección por VIH, como déficits cognitivos y motores, y activación inmunitaria. Además, con la extensión de la esperanza de vida, los pacientes deben enfrentarse a la aparición de efectos secundarios, resistencias farmacológicas, trastornos metabólicos y cánceres asociados con la infección por VIH-1.

Además, del 20% al 30% de los pacientes tratados experimentan una insuficiencia inmunológica algunas veces a pesar de la supresión viral. Es decir, sus recuentos de células T CD4+ disminuyen a pesar de la inhibición de la replicación viral. Esto muestra que todavía existen acontecimientos patógenos de la infección por VIH-1 sobre células T CD4+ a pesar de la inhibición de la replicación viral. Por tanto, se necesita un enfoque terapéutico seguro y asequible que pueda ser complementario a los tratamientos antirretrovirales, que proteja las células T CD4+, y representa una necesidad médica no satisfecha.

Se han considerado diversas estrategias terapéuticas anti-VIH, distintas de las que hacen uso de sustancias químicas antirretrovirales, que incluyen (i) el uso de anticuerpos anti-VIH, (ii) vacunas basadas en la alteración de las partículas de VIH, (iii) vacunas basadas en péptidos de VIH y (iv) vacunas basadas en vector viral o plásmido de ADN, teniendo cada una sus inconvenientes específicos.

Desde que se identificó el VIH como la causa del SIDA en 1983, se han sometido a prueba múltiples candidatos para una vacuna para prevenir la infección por VIH y el SIDA en ensayos en seres humanos con un éxito muy limitado. La iniciativa internacional por una vacuna contra el SIDA, IAVI, mantiene una base de datos de estas vacunas y ensayos (www.IAVI.org) . Casi todos de estos ensayos han sido pruebas muy tempranas (fase I) de seguridad de la vacuna y respuesta inmunitaria preliminar. Sólo una vacuna (dos formulaciones de la misma vacuna 55 contra gp120 básica) se ha sometido a prueba en estudios de fase III a gran escala. Se encontró que la proteína gp120 subtipo B de VaxGen era ineficaz en un ensayo de fase III que se completó en 2003 en EE.UU., Canadá y Países Bajos. Posteriormente en 2003, se completó un segundo ensayo de AIDSVAX en Tailandia. Ambos ensayos encontraros que los candidatos eran ineficaces. Anteriormente ha sido difícil preparar vacunas de proteína contra VIH, lo que puede deberse a la alta diversidad en la proteína de la envuelta, las diferencias entre la envuelta de la cepa adaptada al laboratorio y los aislados clínicos, la naturaleza monomérica de la gp120 en la vacuna y la organización trimérica en el virus, y en particular debido a que sólo se indicen anticuerpos y no inmunidad celular. Una combinación de proteína AIDSVAX (de VAXGene) con genes suministrados en viruela del canario (ALVAC de Aventis Pasteur) también está en fase III para información adicional, y se espera que comience un cuarto ensayo a gran escala que someta a prueba el candidato basado en adenovirus de Merck. Se considera que los linfocitos T

citotóxicos (CTL) son un componente crítico del control inmunitario de virus incluyendo VIH-1 y se tienen en cuenta inmunógenos de CTL relevantes para vacunas terapéuticas.

Ya que la pandemia de VIH continúa infectando a millones de personas cada año, la necesidad de una vacuna eficaz aumenta. El desarrollo de vacunas anti-VIH se ha visto profundamente perjudicado, debido a la dificultad en el desarrollo de un producto inmunogénico que pueda de producir anticuerpos anti-VIH ampliamente neutralizantes.

La inducción de anticuerpos ampliamente neutralizantes (AcNt) contra aislados primarios de virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) sigue siendo un objetivo principal y no cumplido para la investigación de vacunas contra el SIDA. Los primero intentos de usar vacunas basadas en la envuelta han producido anticuerpos que sólo son eficaces contra aislados adaptados en laboratorio. En estos casos, la protección se ha correlacionado con altos títulos de AcNt dirigidos contra la región hipervariable V3 de gp120. Sin embargo, las actividades neutralizantes generadas son en gran medida específicas del aislado y son mínimamente eficaces contra la mayoría de los aislados primarios de VIH-1. El fracaso de las vacunas contra la subunidad gp120 para proteger frente a la adquisición de VIH-1 en ensayos clínicos de fase III resalta la dificultad de la tarea.

Sin embargo, a menudo pueden encontrarse AcNt en individuos infectados con VIH. Las respuestas generadas temprano en la infección son habitualmente de especificidad estrecha, neutralizando los virus transmitidos en el huésped, pero no los contemporáneos. Tales respuestas se amplían durante el transcurso de la infección en algunos supervivientes de largo plazo que pueden controlar su infección en ausencia de tratamiento antiviral. Sin embargo, no se entienden la naturaleza de la respuesta de anticuerpos de neutralización cruzada ni los mecanismos que conducen a su génesis.

Naturalmente, AcNt contra la Env se generan en el plazo de semanas tras la infección, pero esta respuesta temprana sólo es eficaz contra un subtipo viral específico; sin embargo, pueden desarrollarse bAcNt (Ac neutralizantes de reacción cruzada) durante el transcurso de VIH. Recientemente varios estudios principales han mostrado que aproximadamente el 25% de los sujetos infectados con VIH (infectados durante al menos 1 año) tienen respuesta de bAcNt, y el 1% de “neutralizadores de élite” con una actividad muy robusta contra una gran mayoría de clados. De manera importante, estos resultados demuestran la capacidad del sistema inmunitario de las personas infectadas para generar in vivo AcNt contra VIH-1, durante el transcurso de la enfermedad. También sugieren que las actividades de AcNt ampliamente reactivos parecen desarrollarse a lo largo del tiempo y están fomentadas por exposición crónica a antígeno, en ausencia de conocimiento sobre el título de bAcNt que será protector.

La replicación viral persistente, con bajo ruido, conduce a una evolución continua de la Env para evadir AcNt. Tal evolución antigénica puede centrar la nueva estrategia de vacunas en la región más conservada de la proteína Env,

y sugiere que los inmunógenos de vacuna podrían diseñarse para imitar epítopos clave altamente conservados.

Uno de los obstáculos... [Seguir leyendo]

1. Compuesto inmunogénico que comprende un péptido seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas (VIa) y (VIb) :

NH2- (A1) m-SEQ ID No. 2- (A2) n-COOH (VIa) ,

NH2- (A1) m-SEQ ID No. 6- (A2) n-COOH (VIb) ,

en las que:

-m es un número entero que significa 0 ó 1,

-n es un número entero que significa 0 ó 1.

15. A1 es un residuo de aminoácido, y

-A2 es un residuo de aminoácido,

péptido de fórmula (VIa) o (VIb) que está unido covalentemente a una proteína portadora que consiste en una proteína CRM197.

2. Compuesto inmunogénico según la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID

No. 5 y SEQ ID No. 7. 25

3. Compuesto inmunogénico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, que está unido covalentemente a la proteína CRM197 por su residuo de aminoácido en el extremo N-terminal.

4. Compuesto inmunogénico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que está unido covalentemente a la proteína CRM197 a través de un resto de unión.

5. Compuesto inmunogénico según la reivindicación 4, en el que dicho resto de unión es el producto de reacción de un agente de unión que tiene dos grupos reactivos tanto con CRM197 como con un péptido de fórmula (VIa) o (VIb) .

6. Compuesto inmunogénico según la reivindicación 5, en el que dicho resto de unión consiste en 4-[pmaleimidofenil]butirato de succimidilo (SMPB) y sulfo-SMPB.

7. Composición que comprende un compuesto inmunogénico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en combinación con una o más sustancias inmunoadyuvantes.

8. Composición según la reivindicación 7, que está adaptada para formar una composición de vacuna lista para usarse que comprende una cantidad de dicho compuesto inmunogénico que oscila entre 0, 01 μgy 200 μg por unidad de dosificación expresada en equivalente de péptido antigénico, preferiblemente entre

0, 05 μg y 50 μg por unidad de dosificación, y lo más preferiblemente entre 0, 1 μg y 20 μg por unidad de dosificación.

9. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 7 y 8, en la que dicha sustancia inmunoadyuvante consiste en hidróxido de aluminio (Al (OH) 3) .

10. Composición según la reivindicación 9, que está adaptada para formar una composición de vacuna lista para usarse que comprende una concentración final de hidróxido de aluminio que oscila entre 0, 1 mg/ml y 5 mg/ml, preferiblemente entre 0, 05 mg/ml y 2 mg/ml, y lo más preferiblemente es de 1 mg/ml, expresada como contenido en iones Al3+ .

11. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, que está adaptada para formar una composición de vacuna lista para usarse que comprende una concentración final de fosfato de sodio de 0, 1 mM a 50 mM, preferiblemente fosfato de sodio de 0, 5 mM a 15 mM, y lo más preferiblemente fosfato de sodio 1 mM.

12. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, que está en una forma líquida o en una forma sólida, incluyendo en una forma liofilizada.

13. Composición de vacuna que comprende un compuesto inmunogénico según una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 6, o una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.

14. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o composición según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, o composición de vacuna según la reivindicación 13, para su uso como medicamento.

15. Compuesto inmunogénico según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o composición según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, o composición de vacuna según la reivindicación 13, para su uso para prevenir y/o tratar un estado provocado por la infección de un individuo con un virus VIH.