cMyBP-C y MLC2 como marcadores de diagnóstico de lesión cardiaca.

Un procedimiento de diagnóstico de lesión cardiaca que comprende identificar una concentración elevada de proteína C de unión a la miosina cardíaca (cMyBP-C) o un fragmento de la misma en una muestra obtenida de un sujeto.

cMyBP-C y MLC2 como marcadores de diagnóstico de lesión cardiaca Campo de la invención

La invención se refiere a marcadores para infarto agudo de miocardio (IAM), en particular a marcadores que se pueden usar en el diagnóstico rápido y preciso de AMI o recidiva de infarcto.

Antecedentes de la invención

El infarto agudo de miocardio (IAM) es una causa común de muerte para la que existen tratamientos efectivos disponibles siempre que la afección se diagnostique rápidamente. El diagnóstico de módem del IAM se basa en el ascenso y calda de un biomarcador especifico de suero acompañado por una circunstancia apropiada, tal como dolor en el pecho o revascularización. En este paradigma aceptado, el diagnóstico no se puede admitir o descartar sin la presencia definitiva o ausencia definitiva de un biomarcador de suero. El biomarcador ideal de lesión cardiaca debe ser específico del corazón y liberarse rápidamente después de la lesión miocárdica en proporción directa a la magnitud de los daños. Además, el biomarcador debe tener una alta sensibilidad y especificidad. (1) Se han descrito varios biomarcadores de IAM en la bibliografía, pero sólo unos pocos han encontrado su camino en la práctica clínica habitual de los cuales ninguno es ideal. Por ejemplo, la CK-MB comienza a aumentar de 4 a 8 horas después de la oclusión de la arteria coronaria y vuelve a los valores básales en 2 - 3 días. (2) Sin embargo, su uso está limitado por su presencia en el músculo esquelético y el suero normal y por la sensibilidad del ensayo a la Interferencia que produce que se cuestione su utilidad. (3) La mioglobina es otra proteína citoplasmática que se encuentra en el músculo cardíaco y esquelético, pero no en el liso. Se libera incluso antes, en 1 - 2 horas del IAM y picos en 5 a 6 horas. (2) Por desgracia, cualquier lesión en el músculo esquelético también hace que los niveles elevados de mioglobina reduzcan la especificidad. Las proteínas de unión a ácidos grasos (FABP) son pequeñas proteínas citoplasmáticas (15 kDa) expresadas en todos los tejidos con metabolismo activo de los ácidos grasos. Entre las nueve proteínas, la FABP específica del corazón (H-FABP) se encuentra en el corazón, pero también en el riñón, en el cerebro, en el músculo esquelético y en la placenta. (4) Después del IM agudo se puede detectar la H-FABP en 2 minutos y picos a las 4 horas considerablemente más rápido incluso que la CK / CK-MB en la misma cohorte de pacientes. Aunque las concentraciones de H-FABP en plasma normal son bajas se sabe que aumentan de forma no específica durante el esfuerzo físico (sin un aumento de troponina), lesión renal y accidente cerebrovascular. (5)

Las proteínas cardíacas más específicas y sensibles liberadas después del infarto agudo de miocardio son la troponina cardíaca I y T. Tanto la troponina I como la T se liberan lentamente, alcanzando un máximo aproximadamente 18 horas después de un IM, y siguen siendo elevadas durante 7 a 1 días. (2) Es probable que esta liberación lenta sea el resultado de su localización celular relativamente inaccesible en comparación con la CK-MB, mioglobina y H-FABP. Las troponinas regulan la interacción física de la actina y la miosina y por lo tanto se encuentran casi totalmente asociadas dentro de la estructura cristalina del sarcómero de las células del músculo estriado. (6) El complejo troponina está compuesto por 3 formas: I, T y C. Las troponinas I y T existen como isoformas específicas cardiacas con epítopes que difieren de las isoformas esqueléticas correspondientes. Además, los niveles circulantes normales, ausentes o extremadamente bajos, de la troponina proporcionan el mayor intervalo dinámico de cualquiera de los biomarcadores disponibles en la actualidad. (7) Aunque no hay duda de que las troponinas han revolucionado la detección y el tratamiento de los pacientes con IAM (8), tienen desventajas. La liberación lenta de la troponina retrasa el diagnóstico y la iniciación de los tratamientos específicos que podrían salvar el tejido del corazón en aquellos en los que se eleva. Del mismo modo, los pacientes en los que está ausente, y que en última instancia se reasegura y descarga, son admitidos en el hospital innecesariamente. Además, la persistencia de las troponinas limita su utilidad en el diagnóstico de recidiva de infarto. Por lo tanto, es ampliamente aceptado que existe una necesidad de nuevos biomarcadores que puedan diagnosticar el IAM más temprano durante su historia natural y / o que tengan una vida media plasmática corta que permita el uso en el diagnóstico y la cuantificación de recidiva de infarto. El propósito de este estudio fue usar la plataforma de los corazones de ratón perfundidos con cristaloides para realizar un análisis proteómico sistemático del efluente coronario después de un AIM mínimo con el fin de identificar nuevos biomarcadores potenciales.

El documento WO 28/14289 desvela el uso de MYBPC3 en forma de biomarcador de la actividad PPARa en mamíferos. Sin embargo, este documento no desvela el uso de MYBPC3 para el diagnóstico de la lesión cardiaca.

Sumario de la invención

De acuerdo con la invención, se proporciona un procedimiento para diagnosticar la lesión cardiaca, en especial el infarto agudo de miocardio (IAM) que comprende identificar una elevada concentración de proteína C de unión a miosina cardíaca (cMyBP-C) o un fragmento de la misma en una muestra obtenida de un sujeto.

El procedimiento de la invención se puede usar para diagnosticar el IAM u otras lesiones cardíacas tales como insuficiencia cardíaca, miocarditis, embolia pulmonar y sepsis. Preferentemente, el procedimiento se usa para diagnosticar el IAM.

El término IAM es bien conocido en el corazón y se produce cuando se interrumpe el suministro de sangre a una parte del corazón.

La cMyBP-C es una proteína bien conocida. La secuencia de la proteína se puede encontrar en la base de datos UniProt (http: // www.uniprot.org/uniprot)/ con el número de acceso Q14896 ó MYPC3JHUMAN.

La muestra contiene preferentemente cMyBP-C o un fragmento de la misma. El fragmento es preferiblemente de la parte N terminal de la proteína. El fragmento preferiblemente tiene una masa inferior a 5 kDa, más preferiblemente inferior a 45 kDa, más preferiblemente alrededor de 4 kDa. El fragmento comprende preferiblemente una secuencia de aminoácidos que tiene una homología sustancial a la secuencia de aminoácidos 1 a 362 de cMyBP-C. Homología sustancial se refiere preferiblemente a una homología de al menos el 75%, más preferiblemente al menos el 8%, más preferiblemente al menos el 85%, más preferiblemente al menos el 9%. Más preferiblemente, el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos 1 a 362 de cMyBP-C.

La muestra es preferiblemente una muestra de sangre obtenida del paciente. La muestra puede ser sangre venosa o arterial, pero es preferiblemente sangre venosa periférica. La muestra es preferiblemente una muestra que ha sido obtenida dentro de las 36 horas desde la aparición de los síntomas de la lesión cardiaca, especialmente el dolor, más preferiblemente dentro de las 24 horas, incluso más preferiblemente dentro de las 12 horas, más preferiblemente dentro de las 6 horas de la aparición de los síntomas.

El término concentración elevada significa preferiblemente que el marcador en cuestión está presente a una concentración mayor en la muestra de lo que se espera que se encuentre en una muestra de un sujeto que no ha padecido un infarto de miocardio o de una muestra previamente obtenida de ese individuo. Los niveles esperados se pueden predecir por muestreo de la sangre de un número de individuos y la identificación de un intervalo convencional de concentraciones de cMyBP-C o un fragmento de la misma.

Cuando el marcador es cMyBP-C, la concentración de cMyBP-C puede ser elevada, o la concentración de un fragmento de cMyBP-C puede ser elevada. Las concentraciones pueden ser elevadas en comparación con concentraciones convencionales previstas, o la concentración de fragmento en relación con la proteína entera puede ser elevada. Por ejemplo, se pueden comparar las concentraciones de la proteína entera y el fragmento y se puede usar un cambio en la relación esperada para indicar el IAM.

Cuando el marcador es cMyBP-C, la concentración de cMyBP-C requerida para diagnosticar que un paciente ha sufrido un infarto es preferiblemente al menos la concentración convencional de cMyBP-C, más preferiblemente al menos cinco veces la concentración convencional, incluso más preferiblemente al menos diez veces la concentración convencional, más preferiblemente al menos quince, especialmente alrededor de diecinueve veces la concentración... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de diagnóstico de lesión cardiaca que comprende identificar una concentración elevada de proteína C de unión a la miosina cardíaca (cMyBP-C) o un fragmento de la misma en una muestra obtenida de un sujeto.

2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la lesión cardiaca es infarto agudo de miocardio

o recidiva de infarto.

3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende la identificación de una concentración elevada de cMyBP-C.

4. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende la identificación de 1 una concentración elevada de un fragmento de cMyBP-C.

5. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el fragmento tiene una masa de alrededor de 4 kDa.

6. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5, en el que el fragmento comprende una secuencia de aminoácidos que tiene homología sustancial con la región CO-C1 de cMyBP-C.

7. Un procedimiento de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en el que la muestra es una muestra de

sangre.

8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la muestra es una muestra de sangre venosa periférica.

9. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en el que la muestra es una muestra que se obtuvo 2 dentro de las 24 horas de la aparición de síntomas de la lesión cardiaca.

1. Un kit para el diagnóstico de la lesión cardiaca, que comprende una molécula de unión marcada que se une específicamente a la cMyBP-C y una molécula de unión marcada que se une específicamente a un fragmento de cMyBP-C.