Anticuerpo contra CD22 para el tratamiento de tumores de origen hematopoyético.

Anticuerpo aislado que se une a un polipéptido de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:

51, con o sin su péptido señal asociado, en el que dicho anticuerpo está conjugado a un agente inhibidor del crecimiento o a un agente citotóxico y está internalizado por una célula de linfoma difuso de célula grande, una célula de linfoma folicular o una célula de linfoma de células del manto que expresan dicho polipéptido, e inhibe el crecimiento de las mismas, para utilizar en un método de tratamiento del linfoma difuso de célula grande, linfoma folicular o linfoma de células del manto en un sujeto.

Anticuerpo contra CD22 para el tratamiento de tumores de origen hematopoyïtico CAMPO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn se refiere a composiciones de materia para utilizar en el tratamiento de tumores hematopoyïticos en mamïferos y a procedimientos de utilizaciïn de estas composiciones de materia para los mismos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

Los tumores malignos (cïncer) son la segunda causa de muerte en los Estados Unidos, despuïs de las enfermedades del corazïn (Boring et al., CA Cancer J Clin., 43:7 [ (1993]) . El cïncer se caracteriza por el incremento en el nïmero de cïlulas anormales, o neoplïsicas, derivadas de un tejido normal que proliferan para formar una masa tumoral, la invasiïn de tejidos adyacentes por estas cïlulas tumorales neoplïsicas, y la generaciïn de cïlulas malignas que finalmente se extienden a travïs de la sangre o el sistema linfïtico hasta nïdulos linfïticos regionales y hasta puntos distantes a travïs de un proceso denominado metïstasis. En un estado canceroso, una cïlula prolifera bajo condiciones en las que no crecerïan cïlulas normales. El cïncer se manifiesta en una gran variedad de formas, caracterizadas por diferentes grados de invasiïn y agresividad.

Los cïnceres que implican cïlulas generadas durante la hematopoyesis, un proceso mediante el cual se generan elementos celulares de la sangre, tales como linfocitos, leucocitos, plaquetas, eritrocitos y cïlulas asesinas (“killers”) naturales, se refieren como cïnceres hematopoyïticos. Los linfocitos que se pueden encontrar en la sangre y el tejido linfïtico y que son crïticos para la respuesta inmune se clasifican en dos clases principales de linfocitos: linfocitos B (cïlulas B) y linfocitos T (cïlulas T) , que median en la inmunidad humoral y medida por cïlulas, respectivamente.

Las cïlulas B maduran en la mïdula ïsea y dejan que la mïdula exprese un anticuerpo de uniïn a antïgeno en su superficie celular. Cuando una cïlula B intacta encuentra primero el antïgeno para el que su anticuerpo unido a membrana es especïfico, la cïlula empieza a dividirse rïpidamente y su progenie a diferenciarse en cïlulas B de memoria y cïlulas efectoras denominadas “cïlulas plasmïticas”. Las cïlulas B de memoria tienen una esperanza de vida mïs larga y continïan expresando el anticuerpo unido a membrana con la misma especificidad que la cïlula parenteral original. Las cïlulas plasmïticas no producen el anticuerpo unido a membrana, pero en cambio producen el anticuerpo en una forma que se puede secretar. Los anticuerpos secretados son la molïcula efectora principal de la inmunidad humoral.

Las cïlulas T maduran en el timo que proporciona un ambiente para la proliferaciïn y diferenciaciïn de cïlulas T inmaduras. Durante la maduraciïn de cïlulas T, las cïlulas T realizan el reajuste de genes que producen el receptor de cïlulas T y la selecciïn positiva y negativa que ayuda a determinar el fenotipo de la superficie celular de la cïlula T madura. Los marcadores caracterïsticos de la superficie celular de cïlulas T maduras son el complejo CD3:receptor de cïlula T y uno de sus correceptores, CD4 o CD8.

En los intentos por descubrir dianas celulares eficaces para la terapia contra el cïncer, los investigadores han 45 buscado identificar polipïptidos transmembrana u otros polipïptidos asociados a membranas que se expresan especïficamente en la superficie de uno o mïs tipos particulares de cïlulas cancerosas en comparaciïn con una o mïs cïlulas no cancerosas normales. A menudo, dichos polipïptidos asociados a membrana se expresan de manera mïs abundante en la superficie de las cïlulas cancerosas en comparaciïn con la superficie de las cïlulas no cancerosas. La identificaciïn de polipïptidos antïgenos de la superficie celular asociados a tumores ha proporcionado la capacidad de reconocer especïficamente cïlulas cancerosas para la destrucciïn a travïs de terapias basadas en anticuerpos. En este aspecto, cabe indicar que la terapia basada en anticuerpos se ha demostrado muy eficaz en el tratamiento de ciertos tumores. Por ejemplo, HERCEPTINï y RITUXANï (ambas de Genentech Inc, South San Francisco, California) son anticuerpos que se han utilizado satisfactoriamente para tratar el cïncer de mama y el linfoma de no Hodgkin, respectivamente. Mïs especïficamente, HERCEPTINï es un 55 anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente al dominio extracelular del protooncogïn del receptor 2 del factor de crecimiento epidïrmico humano (HER2) . Se observa la sobreexpresiïn de la proteïna HER2 en el 25-30% de cïnceres de mama primarios. RITUXANï es un anticuerpo monoclonal murino/humano quimïrico modificado genïticamente dirigido contra el antïgeno CD20 hallado en la superficie de linfocitos B normales u malignos. Estos anticuerpos se producen recombinantemente en cïlulas CHO.

En otros intentos por descubrir dianas celulares eficaces para la terapia contra el cïncer, los investigadores han buscado identificar (1) polipïptidos no asociados a membrana que son producidos especïficamente por uno o mïs tipos particulares de cïlulas cancerosas en comparaciïn a por uno o mïs tipos particulares de cïlulas normales no cancerosas, (2) polipïptidos que son producidos por cïlulas cancerosas en un nivel de expresiïn que es 65 significativamente mïs elevado que el de una o mïs cïlulas normales no cancerosas, o (3) polipïptidos cuya expresiïn estï limitada especïficamente a sïlo un tipo de tejido (o a un nïmero muy limitado de diferentes tejidos)

tanto en estado canceroso como no canceroso (por ejemplo, tejido de prïstata normal y de tumor de prïstata) . Dichos polipïptidos pueden permanecer localizadas intracelularmente o se puede secretar por la cïlula cancerosa. Ademïs, dichos polipïptidos pueden expresarse no por la propia cïlula cancerosa, sino por cïlulas que producen y/o secretan polipïptidos que tienen un efecto potenciador o un efecto de aumento del crecimiento en cïlulas cancerosas. Dichos polipïptidos secretados son a menudo proteïnas que proporcionan cïlulas cancerosas con una ventaja de crecimiento sobre las cïlulas normales e incluyen cosas, tales como factores angiogïnicos, factores de adhesiïn celular, factores de crecimiento, y similares. Se esperarïa que la identificaciïn de antagonistas de dichos polipïptidos no asociados a membrana sirviera como agentes terapïuticos eficaces para el tratamiento de dichos cïnceres. Ademïs, la identificaciïn del patrïn de expresiïn de dichos polipïptidos serïa ïtil para el diagnïstico de cïnceres particulares en mamïferos.

A pesar de los avances identificados anteriormente en la terapia contra el cïncer en mamïferos, existe una gran necesidad de agentes terapïuticos adicionales capaces de detectar la presencia de tumores en un mamïfero y para inhibir de manera eficaz el crecimiento de cïlulas neoplïsicas, respectivamente. Por consiguiente, un objetivo de la presente solicitud es identificar polipïptidos, polipïptidos asociados a membrana, secretados o intracelulares, cuya expresiïn estï limitada especïficamente a un ïnico tipo de tejido (o un nïmero muy limitado de diferentes tipos de tejido) , tejidos hematopoyïticos, tanto en estado canceroso o no canceroso, y utilizar estos polipïptidos, y sus ïcidos nucleicos codificantes, para producir composiciones de materia ïtiles en el tratamiento terapïutico para la detecciïn de cïncer hematopoyïtico en mamïferos.

DESCRIPCIïN RESUMIDA DE LA INVENCIïN

A. Realizaciones [0009] En la presente memoria, los solicitantes describen por primera vez la identificaciïn de varios polipïptidos celulares (y sus ïcidos codificantes o fragmentos de los mismos) que son expresados especïficamente tanto por cïlulas tumorales como normales de un tipo de cïlula especïfico, por ejemplo, cïlulas generadas durante la hematopoyesis, es decir, linfocitos, leucocitos, eritrocitos y plaquetas. Todos los polipïptidos anteriores se refieren aquï como polipïptidos Antïgenos tumorales de Origen Hematopoyïtico (polipïptidos “TAHO”) y se espera que sirvan como dianas eficaces para la terapia contra el cïncer en mamïferos.

Por consiguiente, el presente documento describe una molïcula de ïcido nucleico aislada que tiene una secuencia de nucleïtidos que codifica un polipïptido antïgeno tumoral de origen hematopoyïtico (un polipïptido “TAHO”) o un fragmento del mismo.

En ciertos aspectos, la molïcula de ïcido nucleico aislada comprende una secuencia de nucleïtidos que tiene por lo menos aproximadamente un 80% de identidad en la secuencia de ïcidos nucleicos, alternativamente por lo menos aproximadamente un 81%, 82%,... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo aislado que se une a un polipïptido de la secuencia de aminoïcidos SEQ ID NO: 51, con o sin su pïptido seïal asociado, en el que dicho anticuerpo estï conjugado a un agente inhibidor del crecimiento o a un agente citotïxico y estï internalizado por una cïlula de linfoma difuso de cïlula grande, una cïlula de linfoma folicular o una cïlula de linfoma de cïlulas del manto que expresan dicho polipïptido, e inhibe el crecimiento de las mismas, para utilizar en un mïtodo de tratamiento del linfoma difuso de cïlula grande, linfoma folicular o linfoma de cïlulas del manto en un sujeto.

2. Utilizaciïn de un anticuerpo aislado que se une a un polipïptido de la secuencia de aminoïcidos SEQ ID NO: 51, con o sin su pïptido seïal asociado, para la fabricaciïn de un medicamento para el tratamiento del linfoma difuso de cïlula grande, linfoma folicular o linfoma de cïlulas del manto, en la que dicho anticuerpo estï conjugado a un agente inhibidor del crecimiento o a un agente citotïxico y estï internalizado por una cïlula de linfoma difuso de cïlula grande, una cïlula de linfoma folicular o una cïlula de linfoma de cïlulas del manto que expresan dicho polipïptido, e inhibe el crecimiento de las mismas.

3. Anticuerpo para utilizar, segïn la reivindicaciïn 1, o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 2, en el que el anticuerpo estï conjugado al agente inhibidor del crecimiento o al agente citotïxico a travïs de un enlazador.

4. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 3, en el que dicho anticuerpo estï conjugado a travïs de un enlazador sensible a peptidasa.

5. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 4, en el que el agente citotïxico es monometil auristatina (MMAE) y/o en el que el enlazador sensible a peptidasa comprende un reactivo enlazador dipïptido valina-citrulina (vc) que tiene un componente maleimida y un componente auto-inmolador paraaminobencilcarbamoïlo (PAB) (MC-vc-PAB) .

6. Anticuerpo para utilizar, segïn la reivindicaciïn 1, o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 2, en el que el agente citotïxico se selecciona del grupo que consiste en toxinas, antibiïticos, isïtopos radioactivos y enzimas nucleolïticas.

7. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 6, en el que la toxina se selecciona del grupo que consiste en monometil auristatina (MMAE) , maitansinoide y caliqueamicina.

8. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 7, en el que el maitansinoide o la caliqueamicina estïn conjugados al anticuerpo a travïs de un enlazador seleccionado del grupo que consiste en sulfosuccinimidil maleimidometil ciclohexano carboxilato (SMCC) y N-succinimidil-4- (2-piridiltio) pentanoato (SPP) .

9. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn la reivindicaciïn 7, en el que la MMAE estï conjugada al anticuerpo a travïs de un enlazador sensible a peptidasa.

10. Anticuerpo para utilizar o la utilizaciïn, segïn cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, o es un fragmento de anticuerpo, o es un anticuerpo quimïrico o un anticuerpo humanizado.

11. Utilizaciïn o anticuerpo para utilizar, segïn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el anticuerpo se produce en bacterias o se produce en cïlulas CHO.

12. Utilizaciïn o anticuerpo para utilizar, segïn cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho tratamiento comprende ademïs exponer dicha cïlula a un tratamiento con radiaciïn o a un agente quimioterapïutico.

13. Utilizaciïn o anticuerpo para utilizar, segïn cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que provoca la muerte de dicha cïlula.

Figura 50A Figura 50B Figura 51A

Secuencia seïal

Aminoïcidos 1-19

Dominio transmembrana Aminoïcido.

68. 705

Dominio de inmunoglobulina Aminoïcido.

15. 221.

25. 311.

34. 398.

43. 486.

52. 573.

60. 611

Sitio de N-glicosilaciïn Aminoïcido.

6. 7.

10. 104.

11. 115.

13. 138.

16. 167.

23. 234.

36. 366.

44. 448.

47. 482.

57. 577.

63. 637.

72. 727

Sitio de fosforilaciïn de la proteïna quinasa dependiente de AMPc y GMPc

Aminoïcido.

42. 423

Sitio de fosforilaciïn de la proteïna quinasa C

Aminoïcido.

2. 23.

4. 47.

6. 70.

7. 81.

12. 127.

13. 139.

19. 196.

24. 243.

28. 287.

30. 306.

64. 643, 764766

Figura 51B

Sitio de fosforilaciïn de caseïna quinasa II

Aminoïcido.

6. 72.

7. 82.

12. 126.

20. 2503.

24. 252.

27. 273.

34. 350.

45. 455.

56. 565.

60. 604.

62. 631.

78. 792

Sitio de fosforilaciïn de tirosina quinasa Aminoïcido.

78. 796

Sitio de N-miristoilaciïn Aminoïcido.

39. 397.

52. 527.

56. 572.

57. 583.

65. 660.

69. 696.

69. 698.

72. 725.

75. 764.

81. 824

Sitio de amidaciïn Aminoïcido.

68. 687

Sitio de uniïn a lïpido de lipoproteïna de membrana procariota Aminoïcido.

38. 396

Figura 91A Figura 91B Figura 91C Figura 91D