Agente de lavado y limpieza que contiene proteasas de Bacillus pumilus.

Agente de lavado o limpieza que comprende una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº:

3 de al menos el 97,5 % y, cada vez más preferentemente, al menos el 98 %, 98,1 %, 98,2 %, 98,3 %, 98,4 %, 98,5 %, 98,6 %, 98,7 %, 98,8 %, 98,9 %, 99 %, 99,1 %, 99,2 %, 99,3 %, 99,4 %, 99,5 %, 99,6 %, 99,7 %, 99,8 %, 99,9 % y, de forma muy particularmente preferente, el 100 %, así como al menos otro ingrediente de agente de lavado.

Agente de lavado y limpieza que contiene proteasas de Bacillus pumilus La presente solicitud de patente se refiere a agentes de lavado y limpieza que contienen una proteasa de Bacillus pumilus. Además, la solicitud se refiere a procedimientos de limpieza en los que se emplean estos agentes así como a usos de estos agentes. Además, la solicitud se refiere a procedimientos de limpieza mediante aplicación de estas proteasas, así como al uso de estas proteasas con fines de lavado y limpieza.

Para agentes de lavado y limpieza hasta ahora se emplean, preferentemente, proteasas del tipo subtilisina. Las proteasas empleadas en los agentes de lavado o limpieza conocidos por el estado de la técnica proceden originalmente de microorganismos, por ejemplo, de los géneros Bacillus, Streptomyces, Humicola o Pseudomonas y/o se producen según procedimientos biotecnológicos en sí conocidos por microorganismos adecuados, por ejemplo, por hospedadores transgénicos de expresión de los géneros Bacillus o por hongos filamentosos.

Son ejemplos de esto las subtilisinas BPN' y Carlsberg, la proteasa PB92, las subtilisinas 147 y 309, la proteasa de Bacillus lentus, en particular de Bacillus lentus DSM 5483, la subtilisina DY y las enzimas a asignar a las subtilasas, sin embargo, ya no a las subtilisinas en el sentido más estricto termitasa, proteinasa K y las proteasas TW3 y TW7. Otras proteasas que se pueden usar son, por ejemplo, las enzimas que se pueden obtener con el nombre comercial Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym, Natalase®, Kannase® y Ovozyme® de la empresa Novozymes, con el nombre comercial Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime y Properase® de la empresa Genencor, con el nombre comercial Protosol® de la empresa Advanced Biochemicals Ltd., Thane, India, con el nombre comercial Wuxi® de la empresa Wuxi Sny der Bioproducts Ltd., China, con el nombre comercial Proleather® y Protease P® de la empresa Amano Pharmaceuticals Ltd., Nagoya, Japón y con la denominación proteinasa K-16 de la empresa Kao Corp., Tokio, Japón.

Además, por el estado de la técnica son conocidas proteasas de Bacillus pumilus. En la solicitud internacional WO2007/131656 está desvelada, por ejemplo, una proteasa de Bacillus pumilus y también está propuesta como ingrediente para agentes de lavado y limpieza.

Sin embargo, ni mucho menos cualquier proteasa aporta en efecto un rendimiento de limpieza satisfactorio en un agente de lavado. Más bien ocurre el caso de que incluso proteasas que proceden de organismos filogenéticamente muy relacionados tales como, por ejemplo, diferentes cepas de Bacillus pumilus, en agentes de lavado o limpieza presentan rendimientos de limpieza muy diferentes. Por tanto, muchas proteasas no son adecuadas para el empleo en agentes de lavado o limpieza.

Una desventaja de agentes de lavado y limpieza que contienen proteasa con proteasas del estado de la técnica es que las proteasas contenidas no presentan una actividad proteolítica satisfactoria, en particular a temperaturas bajas, por ejemplo entre 10 ºC y 50 ºC, en particular entre 10 ºC y 40 ºC o entre 20 ºC y 40 ºC y, por tanto, el agente de lavado o limpieza no muestra un rendimiento óptimo de limpieza, en particular no en el respectivo intervalo de temperaturas y en particular no con ensuciamientos sensibles a proteasa. Por tanto, existe la necesidad de hallar nuevas proteasas, en particular nuevas proteasas microbianas, para el empleo en agentes de lavado y limpieza y facilitar nuevos agentes de lavado y limpieza correspondientes que contengan tales proteasas.

Por lo tanto, la presente invención se basa en el objetivo de facilitar agentes de lavado o limpieza que presenten un rendimiento de limpieza mejorado, en particular en relación con ensuciamientos que sean sensibles a la degradación por proteasas. Otro objetivo de la invención es facilitar agentes de lavado o limpieza que presenten un rendimiento mejorado de limpieza a temperaturas menores, en particular entre 10 ºC y 50 ºC y preferentemente entre 10 ºC y 40 ºC, en particular en relación con ensuciamientos que sean sensibles a la degradación por proteasas. Estos agentes de lavado o limpieza, en particular en un intervalo de temperaturas entre 10 ºC y 50 ºC y preferentemente entre 10 ºC y 40 ºC, deberían mostrar una eliminación mejorada de al menos un ensuciamiento que sea sensible a la degradación por una proteasa. Preferentemente, los agentes de lavado o limpieza de acuerdo con la invención muestran una eliminación mejorada de varios ensuciamientos. En particular, estos agentes de lavado o limpieza deberían contener proteasas y, de forma particularmente preferente, proteasas de origen natural que se caracterizan 55 por que su aportación al rendimiento de limpieza de un agente que contiene la proteasa al menos se aproxima y, de forma ideal, supera a la aportación al rendimiento de limpieza del agente de una enzima proteolítica establecida para este fin.

Por tanto, un objeto de la invención es un agente de lavado o limpieza que comprende una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº: 3 de al menos el 97, 5 % y, cada vez más preferentemente, de al menos el 98 %, 98, 1 %, 98, 2 %, 98, 3 %, 98, 4 %, 98, 5 %, 98, 6 %, 98, 7 %, 98, 8 %, 98, 9 %, 99 %, 99, 1 %, 99, 2 %, 99, 3 %, 99, 4 %, 99, 5 %, 99, 6 %, 99, 7 %, 99, 8 %, 99, 9 % y, de forma muy particularmente preferente, el 100 %, así como al menos otro ingrediente de agente de lavado. Sorprendentemente, se ha comprobado que una proteasa de este tipo se puede emplear ventajosamente en un 65 agente de lavado o limpieza y confiere al mismo un rendimiento de limpieza ventajoso, sobre todo también a temperaturas bajas, por ejemplo entre 10 ºC y 50 ºC, en particular entre 10 ºC y 40 ºC o entre 20 ºC y 40 ºC. Por

tanto, un agente de este tipo posibilita una eliminación mejorada de al menos un, preferentemente de varios ensuciamientos sensibles a proteasa sobre materiales textiles y/o superficies duras, por ejemplo vajilla.

La proteasa contenida en un agente de lavado o limpieza de acuerdo con la invención, tal como se puede comprender con ayuda de los ejemplos, se puede obtener del sobrenadante de cultivo de una cepa de Bacillus que está identificada por la DSMZ (DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstraße 7 B, 38124 Braunschweig, Alemania) como una cepa de Bacillus pumilus. La cepa o la muestra de suelo que contiene la misma procede de Minneapolis, EE.UU. Con el fin de la reproducibilidad se depositó, de acuerdo con el Tratado de Budapest, un plásmido que contiene la secuencia de ácido nucleico de esta proteasa en la DSMZ con el número de depósito DSM 21890.

Una proteasa contenida en un agente de lavado o limpieza de acuerdo con la invención presenta una actividad proteolítica, es decir, tiene capacidad para la hidrólisis de enlaces peptídicos de un polipéptido o una proteína. Por tanto, es una enzima que cataliza la hidrólisis de enlaces peptídicos y, por ello, está en disposición de escindir

péptidos o proteínas, en particular una subtilisina. En el sentido de la presente invención, las enzimas, proteínas, fragmentos y derivados, a menos que se tengan que mencionar explícitamente como tales, se compilan en el concepto general proteínas o polipéptidos, ya que una proteína es un polipéptido.

La proteasa contenida en un agente de lavado o limpieza de acuerdo con la invención, a causa de su actividad proteolítica y sus demás propiedades, en particular en relación con su estabilidad frente a tensioactivos y/o blanqueadores y/o su perfil de temperatura y/o su perfil de pH, es adecuada para la aplicación en agentes de lavado y limpieza. Sorprendentemente, de este modo ya en su forma de tipo natural realiza una buena aportación al rendimiento de limpieza de un agente de lavado o limpieza que contiene la proteasa, que se aproxima a la aportación al rendimiento de limpieza del agente de una enzima proteolítica establecida para este fin y que, incluso, 25 supera la misma en diferentes ensuciamientos. Esto es tanto más sorprendente en cuanto que en bacterias de cepas bacterianas filogenéticamente relacionadas, en particular distintas cepas de Bacillus pumilus, están presentes proteasas diferentes en relación con su capacidad de empleo en agentes de lavado o limpieza, es decir, ni mucho menos todas las proteasas de Bacillus pumilus son aptas para esto. Las proteasas empleadas en agentes de acuerdo con la invención son adecuadas para esto y, en particular con aplicación de un agente de lavado y limpieza que contiene las mismas, causan una eliminación satisfactoria de uno o varios ensuciamientos que contienen proteína, en particular en los intervalos... [Seguir leyendo]

1. Agente de lavado o limpieza que comprende una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº: 3 de al menos el 97, 5 % y, cada vez

más preferentemente, al menos el 98 %, 98, 1 %, 98, 2 %, 98, 3 %, 98, 4 %, 98, 5 %, 98, 6 %, 98, 7 %, 98, 8 %, 98, 9 %, 99 %, 99, 1 %, 99, 2 %, 99, 3 %, 99, 4 %, 99, 5 %, 99, 6 %, 99, 7 %, 99, 8 %, 99, 9 % y, de forma muy particularmente preferente, el 100 %, así como al menos otro ingrediente de agente de lavado.

2. Agente de lavado o limpieza de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que el otro ingrediente de agente de lavado está seleccionado del grupo compuesto de sustancias soporte, tensioactivos con actividad superficial, blanqueadores a base de compuestos de peroxígeno orgánicos y/o inorgánicos, activadores de blanqueo, disolventes orgánicos miscibles con agua, enzimas, secuestrantes, electrolitos, reguladores del pH y otros coadyuvantes, tales como agentes de aclaramiento óptico, inhibidores de agrisado, reguladores de espuma así como colorantes y fragancias así como combinaciones de los mismos.

3. Agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado por que está presente en forma sólida, en particular como polvo suelto con un peso aparente de 300 g/l a 1200 g/l, en particular de 500 g/l a 900 g/l.

4. Agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado por que está presente en forma líquida, en forma de gel o pastosa.

5. Agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que la proteasa está envuelta con una sustancia impermeable para la proteasa a temperatura ambiente y/o en ausencia de agua. 25

6. Agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que comprende al menos otra enzima, en particular una proteasa, amilasa, celulasa, hemicelulasa, mananasa, tanasa, xilanasa, xantanasa, l-glucosidasa, carragenasa, perhidrolasa, oxidasa, oxidorreductasa o una lipasa, así como preferentemente sus mezclas.

7. Uso de un agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6 para la eliminación de ensuciamientos sensibles a proteasa sobre materiales textiles o superficies duras.

8. Procedimiento para la limpieza de materiales textiles o superficies duras, caracterizado por que en al menos una 35 etapa del procedimiento se aplica un agente de lavado o limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6.

9. Procedimiento para la limpieza de materiales textiles o superficies duras, caracterizado por que en al menos una etapa del procedimiento es catalíticamente activa una proteasa, que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº: 3 de al menos el 97, 5 % y, cada vez

más preferentemente, de al menos el 98 %, 98, 1 %, 98, 2 %, 98, 3 %, 98, 4 %, 98, 5 %, 98, 6 %, 98, 7 %, 98, 8 %, 98, 9 %, 99 %, 99, 1 %, 99, 2 %, 99, 3 %, 99, 4 %, 99, 5 %, 99, 6 %, 99, 7 %, 99, 8 %, 99, 9 % y, de forma muy particularmente preferente, el 100 %, en particular de tal manera que la proteasa se emplea en una cantidad de 40 !g a 4 g, preferentemente de 50 !g a 3 g, de forma particularmente preferente de 100 !g a 2 g y de forma muy particularmente preferente de 200 !g a 1 g por aplicación.

10. Uso de una proteasa que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEC ID Nº: 3 de al menos el 97, 5 % y, cada vez más preferentemente, de al menos el 98 %, 98, 1 %, 98, 2 %, 98, 3 %, 98, 4 %, 98, 5 %, 98, 6 %, 98, 7 %, 98, 8 %, 98, 9 %, 99 %, 99, 1 %, 99, 2 %, 99, 3 %, 99, 4 %, 99, 5 %, 99, 6 %, 99, 7 %, 99, 8 %, 99, 9 % y, de forma muy particularmente preferente, el 100 % para la limpieza de 50 materiales textiles o de superficies duras, en particular de tal manera que la proteasa se emplea en una cantidad de 40 !g a 4 g, preferentemente de 50 !g a 3 g, de forma particularmente preferente de 100 !g a 2 g y de forma muy particularmente preferente de 200 !g a 1 g por aplicación.