Protección antiviral con virus que contienen segmentos de genoma defectuoso.

Un virus de influenza A de interferencia defectuoso (DI), humano 244/PR8 clonado para su uso en la prevención oel tratamiento de una infección o enfermedad causadas por un virus distinto de influenza A,

en donde que lainfección o enfermedad es causada por un virus respiratorio.

Protección antiviral con virus que contienen segmentos de genoma defectuoso

Campo de la invención La invención se refiere a la virología y la prevención y/o tratamiento de infecciones y enfermedades virales en animales, incluyendo aves y seres humanos. La invención se refiere al campo de los tratamientos antivirales. La invención se refiere adicionalmente a métodos para estimular la inmunidad innata y la producción de interferón natural en seres humanos o animales y en partes componentes de seres humanos o animales, incluyendo células y tejidos. La invención se refiere específicamente al campo de los virus de interferencia defectuosos (DI) , incluyendo virus DI clonados y composiciones que incluyen los mismos.

Antecedentes de la invención Los Orthomyxoviridae son una familia de virus de ARN que infectan a vertebrados. La familia incluye los virus que causan la influenza.

La influenza es una infección viral del sistema respiratorio caracterizada por fiebre, tos y dolores musculares intensos. Hay tres géneros de virus de la influenza, que se identifican por las diferencias antigénicas en su nucleoproteína y su proteína de la matriz: virus de la Influenza A, virus de la Influenza B y virus de la Influenza C.

Los virus de la Influenza A y B contienen cada uno ocho segmentos de ARN de hebra sencilla (ARNhs) . Los virus comprenden las principales proteínas externas del virión, hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) . El género del virus de la Influenza A comprende 16 subtipos de HA y 9 subtipos de NA que probablemente forman las 144 permutaciones posibles. Sin embargo, la influenza B es un solo subtipo, y es significativamente distinta de la influenza A.

El virus de la influenza C contiene siete segmentos de ARNhs, debido a que el virus carece de un gen de la neuraminidasa separado (véase Lamb, R y Krug, R.M. (1996) Capítulo 45; Orthomyxoviridae: The viruses and their replication - Fields Virology, 3a edición, Raven Publishers, Filadelfia) .

Los miembros de la familia Paramyxoviridae son virus con una gama de anfitriones específicos de carácter limitado, pero en células cultivadas muestran una amplia gama de anfitriones. Las características de la infección in vivo incluyen la formación de cuerpos de inclusión y sincitios. La infección por paramixovirus comienza típicamente en el tracto respiratorio y puede permanecer en ese sitio (p. ej., virus sincitial respiratorio humano, HRSV) o puede extenderse a sitios secundarios (p. ej., tejidos linfoides y endoteliales para el virus del sarampión (MeV) ) . En general, las infecciones por paramixovirus están limitadas, y son eliminadas por la inmunidad del anfitrión. Sin embargo, a veces el virus se puede eliminar durante períodos de semanas o meses en condiciones normales y, sobre todo, en los individuos inmunocomprometidos.

Un género dentro de Paramyxoviridae es Pneumovirus. Este género incluye el virus sincitial respiratorio bovino (BRSV) y el virus sincitial respiratorio humano (HRSV) de los cuales hay dos subtipos denominados A y B y varias cepas de virus p. ej. cepa A2 de HRSV, cepa RS-S2 de HRSV y cepa Snook de BRSV. También hay un virus de la neumonía murina (también conocido como el virus de la neumonía de ratones: PVM) .

Los medicamentos antivirales son una clase de medicación que se utiliza específicamente para el tratamiento de infecciones virales. Los antivirales específicos se utilizan con frecuencia en busca de virus específicos. La mayor parte de los antivirales disponibles en la actualidad están diseñados para ayudar a enfrentarse con el VIH, los virus del herpes (más conocidos por causar el herpes labial y el herpes genital, pero que en realidad causan una amplia gama de enfermedades) , los virus de la hepatitis B y C (que pueden causar cáncer de hígado) , y los virus de la influenza A y B. Los investigadores están trabajando en la actualidad para extender el rango de antivirales a otras familias de patógenos.

Por ejemplo, la amantadina y la rimantadina son eficaces contra todos los virus de la influenza tipo A, pero no contra los virus de la influenza tipo B. Los virus que son resistentes a estos compuestos son conocidos comúnmente. Otros anti-virus de la influenza A y B incluyen Zanamivir (Relenza®) y oseltamivir (Tamiflu®) . Sin embargo, la eficacia de estas terapias es algo limitada. El tratamiento se tiene que iniciar pronto después de la infección y necesita ser administrado dos veces al día. El tratamiento antiviral solo es capaz de acortar la duración de los síntomas en uno a tres días. Se están encontrando cada vez más virus que son resistentes a Tamiflu en pacientes con influenza.

Se utilizan vacunas para generar una respuesta inmunológica para atacar a los virus. Las vacunas tradicionalmente consisten en una versión del patógeno debilitada o muerta. Más recientemente, se han ideado vacunas de "subunidades" que consisten estrictamente en las dianas proteicas del patógeno. Las vacunas estimulan el sistema inmunitario sin causar daño grave al anfitrión, y por tanto el patógeno real ataca al sujeto, el sistema inmunitario responde a él rápidamente y lo bloquea.

Las vacunas pueden ser eficaces en la lucha contra la infección por virus estables, pero tienen uso limitado en el tratamiento de un paciente que, ya ha sido, o está persistentemente, infectado. Las vacunas contra los virus de mutación rápida, como la influenza, son problemáticos. La vacuna de la influenza tiene que ser actualizada cada año. Una vacuna contra el VIH, por ejemplo, sigue siendo difícil de alcanzar.

Los virus de interferencia defectuosos (DI) tienen una larga historia. Fueron descubiertos como elementos de autointerferencia en preparaciones de virus de influenza A por von Magnus quien los estudió a finales de 1940 y principios de 1950 (p. ej., von Magnus, P (1947) Ark. Kemi. Mineral. Geol, 24b: 1) . Durante muchos años estos elementos de interferencia fueron nombrados después de él. Más tarde, cuando se dieron cuenta de que estos elementos se encontraban casi universalmente entre los virus, se les denominó virus DI (véase, p. ej. Huang y Baltimore (1970) Nature 226: 325 -327) . El interés por los virus DI alcanzó su punto máximo en la década de 1970, pero luego disminuyó debido a una expectativa exorbitante de su actividad antiviral in vivo.

Todos los virus de influenza A tiene un aparato de replicación que permite el intercambio de segmentos del genoma (recombinación) en las células infectadas dualmente, proporcionando a estos virus gran flexibilidad genética. Tal acontecimiento dio origen a los virus de la influenza pandémica de 1957 y 1968. Además del proceso de replicación normal, se producen errores en la replicación que dan lugar a pequeños ARN de 400-500 nucleótidos (nt) que carecen de alrededor de 80% de la secuencia central del molde, lo que parece ser el resultado de la función de copiado de la parte inicial del molde, separación del molde y a continuación reintegración y copiado del otro extremo por la polimerasa. Estos pequeños ARN conservan sus señales de replicación y encapsidación terminales. Su pequeño tamaño sugiere que se pueden elaborar más copias por unidad de tiempo en comparación con el segmento de ARN completo. La encapsidación de los ARN genómicos parece ser un proceso organizado de manera que un virión contiene solo una copia de cada uno de los 8 segmentos. Un virión parece no discriminar entre un ARN defectuoso y uno completo, de manera que cuando los ARN defectuosos se encuentran en exceso, estos se encapsidan con mayor frecuencia que el segmento de genoma intacto que sustituyen. Una partícula que contiene el segmento de genoma suprimido no puede sintetizar la proteína o las proteínas virales codificadas normalmente por ese ARN, y no es infecciosa, aunque pueda replicar en trans cuando esa célula sea infectada por un virus de la influenza A. La incorporación de los ARN defectuosos a los viriones da como resultado una reducción en la cantidad de virus infeccioso producido. De este modo los viriones que llevan un genoma suprimido fueron conocidos como virus de interferencia o de interferencia defectuosos (DI) .

Los virus de la familia Orthomyxoviridae dan lugar espontáneamente a segmentos de ARN defectuoso como resultado de una deleción interna (75-80% de los nucleótidos) en uno o más segmentos genómicos. Por consiguiente, el genoma del virus DI es una forma suprimida del genoma del virus infeccioso que dio lugar a la misma y tiene varias propiedades únicas que lo distinguen de otros tipos de moléculas defectuosas de ácidos nucleicos virales (véase Dimmock, N. J. (1996) "Antiviral activity of defective interfering influenza virus in vivo" - Viral and other infections of the human respirator y tract; S. Myint y... [Seguir leyendo]

1. Un virus de influenza A de interferencia defectuoso (DI) , humano 244/PR8 clonado para su uso en la prevención o el tratamiento de una infección o enfermedad causadas por un virus distinto de influenza A, en donde que la infección o enfermedad es causada por un virus respiratorio.

2. El virus reivindicado en la reivindicación 1, en el que la infección o la enfermedad es causada por un virus de la familia Paramyxoviridae.

3. El virus reivindicado en la reivindicación 2, en donde la infección o la enfermedad están causadas por un

Pneumovirus.

4. El virus reivindicado en la reivindicación 3, en donde la infección o la enfermedad están causadas por un virus sincitial respiratorio humano 10 (HRSV) .

5. El virus reivindicado en la reivindicación 2, en donde la infección o la enfermedad están causadas por un Metapneumovirus, p. ej., metapneumovirus humano (hMPV) .

6. El virus reivindicado en la reivindicación 1, en donde el virus es un virus de la familia Orthomyxoviridae.

7. El virus reivindicado en la reivindicación 6, en donde la infección o la enfermedad están causadas por un virus de influenza B o un virus de influenza C.

8. El virus reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el virus causante de la infección o enfermedad es un virus humano.

9. El virus reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el virus DI clonado es para su administración en la mucosa.

10. El virus reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el virus DI clonado no es un virus de ARN con una estructura de ARN de copia de respaldo "copyback" o de reversión "snapback".

11. Una composición para uso en la prevención o tratamiento de una infección viral en un individuo humano o animal, que comprende una cantidad inductora de interferón de influenza A de interferencia defectuoso (DI) humano 244/PR8 clonado, en donde la infección viral es por un virus respiratorio en donde dicho virus respiratorio no es de influenza A.

12. Una composición como se reivindica en la reivindicación 11, en donde la composición se formula para administración en la mucosa.

13. Una composición como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12, en donde la infección viral se selecciona entre uno o más de:

(a) un virus de Paramyxoviridae;

(b) un Pneumovirus, p. ej., el virus respiratorio sincitial humano (HRSV) ;

(c) un Metapenumovirus p. ej., metapneumovirus humano (HMPRV) ;

(d) un virus de Orthomyxoviridae, p. ej., un virus de influenza B o virus de influenza C.

14. Una composición como se reivindica en la reivindicación 13, en donde la infección viral está causada por el virus sincitial respiratorio humano (HRSV) .

15. Una composición como se reivindica en la reivindicación 13, en donde la infección viral está causada por un virus de influenza B.