Principios activos antiinflamatorios en el barro termal Euganeo.

Uso de glicolípidos elegidos entre el grupo que consiste en

a) monogalactosildiglicéridos que contienen una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14y 18 átomos de carbono caracterizados por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturadoC16 y al menos el 25% de un ácido tetrainsaturado C18.

b) digalactosildiglicérido que contiene una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14 y 18átomos de carbono, caracterizado por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturado C16y al menos el 20% de un ácido tetrainsaturado C18, y

c) una mezcla de (a) y (b).

para la preparación de un medicamento que tenga actividad antiinflamatoria, conteniéndolos dicho medicamentocomo principios activos.

Principios activos antiinflamatorios en el barro termal Euganeo

Campo de la invención [0001] El barro termal se ha utilizado desde tiempos ancestrales para el tratamiento de las patologías inflamatorias y en particular para las enfermedades osteoarticulares.

Los complejos termales de Terma Abano, Terma Montegrotto y Terma Battaglia son particularmente famosos por las propiedades terapéuticas de su barro termal y se encuentran al pie de las colinas Euganeas cerca de Padua. El barro se acumula en el fondo de dos lagos termales, (Arqua y Lispida) , desde donde se extrae y vierte en depósitos donde experimenta el llamado proceso de “maduración”, durante el que se incuba durante 2 meses en presencia de un flujo continuo de agua de manantial a una temperatura de 85-87º C. Durante este proceso el barro se coloniza de forma abundante por cianobacterias y microalgas que transmiten valiosas propiedades físicoquímicas y terapéuticas.

Shirahashi H. y col (Chem. Pharm. Bull (Tokyo) Sep 1993; 41 (9) : 1664-6) identificaron tres clases de glicolípidos extraídos de la cianobacteria P. tenue. Se descubrió que estos glicolípidos, a saber: monogalactosil

diacilglicerol (MGDG) , digalactosil diacilglicerol (DGDG) y sulfoquinovosil diacilglicerol (SQDG) tenían un efecto promotor antitumoral. Tolomio C. y col., (Cell biochemistr y and function, vol. 17, Nº 1, Marzo 1999, páginas 29-33) identificaron diatomeas entre otros microorganismos termófilos como agentes principales de la colonización del barro termal dando como resultado una “maduración” que da lugar a un barro adecuado para usarse en el tratamiento de la osteoartrosis. La diatomea produce un sulfoglicolípido que tiene una acción antiinflamatoria.

Gustafson K.R. y col., (JNCI J Natl. Cancer Inst (1989) 81 (16) : 1254-1258) analizaron extractos de cianobacterias cultivadas (algas verdeazules) y en particular los glicolípidos que contenían ácido sulfónico, para la inhibición de los efectos citopáticos del virus de inmunodeficiencia humana (VIH-1) , que está implicado como agente causante del SIDA.

Se ha demostrado recientemente que la eficacia terapéutica del tratamiento con baños de barro no está asociada únicamente a los efectos beneficiosos del calor y los electrolitos sino que es debido a la presencia de sustancias que poseen una alta actividad antiinflamatoria, sintetizadas por microorganismos que colonizan el barro durante el proceso de maduración. Los microorganismos principales presentes en el barro termal Euganeo son cianobacterias y microalgas. Entre éstas, una de las más abundantes es una cianobacteria que pertenece al orden de las Oscillatoriales.

Sumario de la invención [0006] Los presentes inventores han estudiado una de las cianobacterias más abundantes presentes en el barro termal Euganeo y han encontrado sorprendentemente que dicho microorganismo, que pertenece al género Phormidium y que se ha denominado ETS-05, es diferente de las cianobacterias conocidas presentes en otros barros termales.

Los inventores también han observado que dicha cianobacteria produce sustancias glicolipídicas que poseen actividades antiinflamatorias mayores que o equivalentes a los antiinflamatorios tradicionales pero que se caracterizan por la ausencia de efectos tóxicos.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a los glicolípidos de la cianobacteria ETS-05 con actividad 50 antiinflamatoria y a los medicamentos que comprenden dichos glicolípidos.

Una primera realización de la presente invención considera el uso de glicolípidos seleccionados entre el grupo que consiste en 55 a) monogalactosildiglicéridos que contienen una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14 y 18 átomos de carbono caracterizada por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturado C16 y al menos el 25% de un ácido tetrainsaturado C18. b) digalactosildiglicérido que contiene una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14 y 18 átomos de carbono, caracterizada por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturado C16 y

al menos el 20% de un ácido tetrainsaturado C18, y c) una mezcla de (a) y (b) .

para la preparación de un medicamento que tiene actividad antiinflamatoria, conteniéndolos dicho medicamento como los principios activos. 65

Descripción de las figuras [0010]

La Figura 1 es una imagen del microscopio óptico de la cianobacteria ETS-05 que muestra la presencia de tricomas solitarios envueltos por una cubierta delgada, sin heterocistos. La Figura 2 es una imagen del microscopio óptico de la cianobacteria ETS-05 que muestra la formación de hormogonia (flecha) a continuación de la fragmentación por necridia. La Figura 3 es una imagen del microscopio electrónico de la cianobacteria ETS-05 que muestra un corte longitudinal de un filamento. Los tilacoides ocupan la mayoría del volumen celular. Es visible la división celular

por fisión. El nucleoplasma (flecha) y los carboxisomas (flechas dobles) son visibles. La Figura 4 es una imagen del microscopio electrónico de la cianobacteria ETS-05 que muestra un corte transversal de la célula. Se pueden ver los Tilacoides (flecha) , organizados en líneas desde la periferia hacia el centro de la célula. Se pueden observar algunos carboxisomas (flecha doble) en el centro de la célula. La Figura 5 muestra el árbol filogenético basado en la secuencia de ADN de los genes que codifican el ARNr

16S. Los números de acceso en el GenBank y los números de orden de las cepas de cianobacterias se indican con comas invertidas. Las figuras 6A y 6B muestran el espectro de NMR de los glicolípidos extraídos de la cianobacteria ETS-05. Las posiciones marcadas corresponden a las que se muestran en la Figura 7. La Figura 7 muestra la estructura de los glicolípidos producidos por la cianobacteria ETS-05.

La Figura 8 muestra el efecto antiinflamatorio de los monogalactosildiglicéridos a una concentración del 0, 5% (CTS01 0, 5) , 1% (CTS01 1) y 2% (CTS01 2) , en el modelo de edema de la oreja por el aceite de crotón, en comparación con el de betametasona 17, 21 dipropionato al 0, 05% (BETA 0, 05) . Los resultados se dan como el promedio de cambio en mm del espesor de la oreja en comparación con el valor de base a las 24, 48 y 72 horas.

La Figura 9 muestra el efecto antiinflamatorio de los digalactosildiglicéridos a una concentración del 0, 5% (CTS02 0, 5) , 1% (CTS02 1) y 2% (CTS02 2) , en el modelo de edema de la oreja por el aceite de crotón, en comparación con el de betametasona 17, 21 dipropionato (BETA) al 0, 05%. Los datos se dan como el promedio de cambio en mm del espesor de la oreja en comparación con el valor de base a las 24, 48 y 72 horas. La Figura 10 muestra el efecto preventivo de los monogalactosildiglicéridos a una concentración del 0, 5%

(CTS01 0, 5%) , 1% (CTS01 1%) y 2% (CTS01 2%) sobre la necrosis inducida por el aceite de crotón en comparación con la de betametasona 17, 21 dipropionato al 0, 05% (BETA 0, 05%.) . Los datos se expresan como un porcentaje del número de orejas que muestran el fenómeno en cada valor evaluado. La Figura 11 muestra el efecto antiinflamatorio de los monogalactosildiglicéridos a dosis de 10 mg/kg (CST01 10) y 20 mg/kg (CST01 20) en el modelo de edema agudo de la pata inducido por la carragenina cuando se compara con el de la indometacina a una dosis de 10 mg/kg (INDO 10) . Los datos se expresan como el promedio de cambio en el volumen de la pata (en ml) en comparación con el valor de base en diferentes intervalos de tiempo. La Figura 12 muestra el efecto antiinflamatorio de los digalactosildiglicéridos a dosis de 5 mg/kg (CST02 5) , 10 mg/kg (CST02 10) y 20 mg/kg (CST02 20) en el modelo de edema agudo de la pata inducido por la carragenina cuando se compara con el de la indometacina a 20 mg/kg (INDO 10) . Los datos se expresan como el promedio de cambio en el volumen de la pata (en ml) en comparación con el valor de base en diferentes intervalos de tiempo. La Figura 13 muestra el efecto antiinflamatorio de los sulfoquinovosildiglicéridos a la dosis de 10 mg/kg (CST03 10) , 20 mg/kg (CST03 20) y 40 mg/kg (CST03 40) en el modelo de edema agudo de la pata inducido por la 45 carragenina en comparación con el de la indometacina a dosis de 10 mg/kg (INDO 10) . Los datos se expresan como el promedio de cambio en el volumen de la pata (en ml) en comparación con el valor de base en diferentes intervalos de tiempo. La Figura 14 muestra el efecto antiinflamatorio de los monogalactosildiglicéridos a una dosis de 5 mg/kg (CST01 5) , 10 mg/kg (CST01 10) y 20 mg/kg (CST01 20) en el modelo de edema crónico de la pata inducido 50 por la carragenina en comparación con el de la indometacina a dosis de 0,... [Seguir leyendo]

1. Uso de glicolípidos elegidos entre el grupo que consiste en a) monogalactosildiglicéridos que contienen una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14 y 18 átomos de carbono caracterizados por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturado C16 y al menos el 25% de un ácido tetrainsaturado C18. b) digalactosildiglicérido que contiene una mezcla de ácidos grasos saturados e insaturados de entre 14 y 18 átomos de carbono, caracterizado por que dicha mezcla contiene al menos el 45% de un ácido saturado C16

y al menos el 20% de un ácido tetrainsaturado C18, y c) una mezcla de (a) y (b) .

para la preparación de un medicamento que tenga actividad antiinflamatoria, conteniéndolos dicho medicamento como principios activos. 15

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que las mezclas (a) tienen la siguiente composición de ácidos grasos (a’) :

entre el 1, 5% y el 2, 5% de un ácido saturado C14;

entre el 45% y el 55% de un ácido saturado C16; entre el 1, 5% y el 2, 5% de un ácido monoinsaturado C16; entre el 3% y el 4, 5% de un ácido monoinsaturado C18; entre el 1, 5% y el 2, 5% de un ácido di-insaturado C18; entre el 8% y el 9% de un ácido tri-insaturado C18;

entre el 25% y el 35% de un ácido tetrainsaturado C18.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que las mezclas (b) tienen la siguiente composición de ácidos grasos (b’) :

entre el 0% y el 1% de un ácido saturado C14; entre el 45% y el 55% de un ácido saturado C16; entre el 2, 5% y el 3, 5% de un ácido monoinsaturado C16; entre el 0% y el 1% de un ácido di-insaturado C16; entre el 0% y el 1% de un ácido tri-insaturado C16;

entre el 1% y el 2% de un ácido saturado C18; entre el 1, 5% y el 2, 5% de un ácido monoinsaturado C18. entre el 3, 5% y el 4, 5% de un ácido di-insaturado C18; entre el 10% y el 12% de un ácido tri-insaturado C18; entre el 20% y el 30% de un ácido tetrainsaturado C18.

4. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que dicho medicamento que tiene actividad antiinflamatoria se utiliza en el tratamiento de patologías inflamatorias.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que dichas patologías inflamatorias son patologías 45 osteoarticulares.

6. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que dicho medicamento es adecuado para administración tópica.