Preparaciones liofilizadas de HGF.

Una preparación liofilizada que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos,

un agente estabilizante seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico y una de sus sales farmacológicamente aceptable para prevenir la formación de un cúmulo del factor de crecimiento de hepatocitos, cloruro sódico y un agente tampón, caracterizada porque la preparación liofilizada se prepara a partir de una solución acuosa que contiene el factor de crecimiento de hepatocitos en una concentración inferior a 5 mg/mL y/o la preparación liofilizada se utiliza para preparar una solución acuosa que contiene el factor de crecimiento de hepatocitos en una concentración inferior a 5 mg/mL mediante redisolución

Campo de la técnica La presente invención se refiere a una preparación liofilizada que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos.

Antecedentes de la técnica

El factor de crecimiento del hepatocito (abreviado ocasionalmente en lo que sigue de esta descripción como quot;HGFquot;) es una proteína que presenta una actividad prolífica de hepatocitos y su existencia es conocida en varias especies animales. Se ha informado de HGFs que presentan diferentes secuencias de aminoácidos. El factor de crecimiento del hepatocito humano (abreviado ocasionalmente en lo que sigue de esta descripción como quot;hHGFquot;) fue hallado a partir de plasma de un paciente de hepatitis fulminante por Daikuhara et al. (publicación de la patente japonesa sin examinar (Kokai) nº 63-22526) . La secuencia aminoácida de la proteína hHGF y la secuencia genética (cDNA) que codifica dicha proteína: fueron halladas por Kitamura et al. (publicación de la patente japonesa sin examinar nº 3-72883) . Se ha informado de un procedimiento para producir la proteína hHGF y un transformante que utiliza dicho cDNA (publicación de la patente japonesa sin examinar nº 3-285693) . Bajo tales circunstancias, resulta posible la producción masiva de la proteína hHGF y es de esperar su aplicación como medicamento.

El hHGF es una clase de glicoproteína, que es un heterodímero que consta de una subunidad que presenta un peso molecular de aproximadamente 80-90 kDa en un estado no reducido o aproximadamente 52-56 kDa en un estado reducido, y una subunidad que posee un peso molecular de aproximadamente 30-36 kDa. Además de la actividad como factor de crecimiento celular hepático, el hHGF posee varias actividades biológicas tales como actividad de factor de dispersión (SF) , actividad como factor de crecimiento celular epitelial tubular renal, factor reparador de tejido dañado y actividad como factor de crecimiento celular endotelial vascular, y se espera que la proteína sea desarrollada como medicamento para el tratamiento terapéutico de enfermedades hepáticas, enfermedades renales, trastornos nerviosos craneales, promotores de crecimiento capilar, agentes curativos de heridas, agentes terapéuticos antitumorales y similares.

Preparaciones farmacéuticas de HGF están descritas en WO90/10651 y la publicación de las patentes japonesas sin examinar nº 6-247872 y 9-25241. La antes mencionada WO90/10651 describe una preparación acuosa de HGF de tipo supresor (TCF) en la cual cinco residuos aminoácidos son suprimidos del HGF, y la publicación muestra que la albúmina, suero humano, gelatina, sorbitol, manitol, xilitol y similares estabilizan el TCF en una solución acuosa. La publicación de la patente japonesa sin examinar nº 6-247872 describe una inyección que contiene TCF en una elevada concentración de 5-10 mg/mL, en la cual coexiste un aminoácido básico o similar con TCF. Esta publicación se refiere a la solubilidad del TCF en una solución acuosa y describe una solución acuosa que contiene TCF en una concentración elevada. El aminoácido básico (lisina, arginina) se utiliza en la inyección como un quot;auxiliar de solubilizaciónquot;.

Sin embargo, la preparación acuosa de HGF reduce rápidamente la solubilidad del HGF bajo pH neutro y presenta un problema de incremento de acumulación, turbidez y gelación cuando se almacena a baja temperatura o temperatura ambiente durante varios días. Además, la preparación posee baja estabilidad fisicoquímica, por ejemplo formación de productos de degradación y cúmulos, y también presenta escasa estabilidad como preparación farmacéutica, por ejemplo reducción de la actividad biológica. Por tanto, la preparación no es adecuada para un almacenamiento prolongado desde el punto de vista de la actividad biológica. Además, la' preparación acuosa de HGF puede causar acumulación, turbidez y gelación debido a la formación de espuma o similares después de batido y agitación, lo que lleva a reducir la calidad de una preparación farmacéutica y la eficacia del medicamento durante el almacenamiento prolongado, distribución y transporte. Por tanto, una preparación liofilizada es preferible como preparación de HGF.

La publicación de la patente japonesa sin examinar nº 9-25241 describe una preparación liofilizada de HGF (TCF) . Sin embargo, a diferencia de la presente invención, la publicación de la patente muestra que una preparación liofilizada que comprende HGF (TCF) en una elevada concentración que es estable durante un largo periodo, puede obtenerse utilizando un citrato como agente tampón y glicina, alanina, sorbitol, manitol o similares como agente estabilizante. Sin embargo, debido al uso de ácido cítrico como agente tampón en la preparación liofilizada, el pH de una preparación redisuelta se encontrará en condición ácida. Además, la solución resultante posee una elevada presión osmótica, que causa problemas de dolor en la administración mediante inyección, o reacción inflamatoria y hemólisis en el punto de administración y similares.

El HGF es una sustancia que presenta actividades fisiológicas extremadamente potentes y, cuando se utiliza como medicamento, la sustancia debe suministrarse en el campo clínico como una preparación farmacéutica que presenta una concentración muy baja. los estudios de los inventores de la presente invención revelaron que, en cuanto a la preparación liofilizada de HGF (TCF) que comprende glicina o alanina descrita en la publicación de la patente

japonesa sin examinar nº 9-25241, solamente se observó una reducida formación de cúmulos durante el almacenamiento, cuando la preparación liofilizada se producía a partir de una solución acuosa que contiene HGF en una concentración elevada, mientras que se observó la formación de cúmulos durante el almacenamiento cuando la preparación se producía en presencia de glicina o alanina al liofilizar una solución acuosa que contiene HGF en una concentración baja, lo cual es deseable para la aplicación clínica (generalmente, el HGF se presenta en una concentración inferior a 5 mg/mL, por ejemplo aproximadamente 2 mg/mL) . Por lo tanto, la glicina o alanina descrita en la publicación de la patente japonesa sin examinar nº 9-25241 es útil como agente estabilizante cuando el HGF está liofilizado en una concentración elevada, sin embargo, el aminoácido no es suficiente como agente estabilizante cuando el HGF es liofilizado a una concentración baja. Resultaba por tanto deseable desarrollar un procedimiento para producir una preparación liofilizada que difícilmente forme cúmulos y presente excelente estabilidad en el almacenamiento prolongado, utilizando una solución acuosa que contiene HGF en una concentración baja.

Descripción de la invención

Un objetivo de la presente invención es proporcionar una preparación liofilizada de HGF que puede producir una solución acuosa que contiene HGF en una concentración baja. Más específicamente, el objetivo de la presente invención es proporcionar una preparación liofilizada de HGF que presenta excelente estabilidad de almacenamiento y está libre de. acumulación, turbidez y gelación o similares al ser redisuelta. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una preparación liofilizada que presenta una propiedad favorable de formar aglutinados durante la liofilización y una excelente redisolubilidad. Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar la preparación que presenta, como inyección, una relación de pH y presión osmótica deseable.

Los inventores de la presente invención siguieron diversos estudios para alcanzar los objetivos anteriores. Como resultado hallaron que cuando una solución que contiene HGF en una concentración inferior a 5 mg/mL fue liofilizada en presencia de un agente estabilizante cloruro sódico y un agente tampón, se obtuvo con éxito una preparación liofilizada que posee una propiedad favorable de formar aglutinados, solubilidad y estabilidad en almacenamiento prolongado, y que no se formaron cúmulos en la producción de la preparación liofilizada, así como durante el almacenamiento de dicha preparación, y la preparación liofilizada presentaba una estabilidad extremadamente elevada. Además, también hallaron que una solución acuosa preparada a partir de la preparación liofilizada estaba libre de acumulación, turbidez, gelación o similares, y la solución acuosa que contiene la concentración baja de HGF proporciona con éxito suficiente efectividad clínica. La presente invención se logró con base en los hallazgos anteriores.

Así, la presente invención proporciona:

una preparación liofilizada que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos, un agente estabilizante seleccionado dentro del grupo formado por... [Seguir leyendo]

1. Una preparación liofilizada que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos, un agente estabilizante seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico y una de sus sales farmacológicamente aceptable para prevenir la formación de un cúmulo del factor de crecimiento de hepatocitos, cloruro sódico y un agente tampón, caracterizada porque la preparación liofilizada se prepara a partir de una solución acuosa que contiene el factor de crecimiento de hepatocitos en una concentración inferior a 5 mg/mL y/o la preparación liofilizada se utiliza para preparar una solución acuosa que contiene el factor de crecimiento de hepatocitos en una concentración inferior a 5 mg/mL mediante redisolución.

2. La preparación liofilizada según la reivindicación 1, en la que el agente estabilizante está seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina y una de sus sales farmacológicamente aceptable.

3. La preparación liofilizada según la reivindicación 1 o 2, en la que el agente tampón es una sal del ácido fosfórico.

4. La preparación liofilizada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el pH de la solución acuosa antes de liofilización se encuentra en el intervalo de 5 a 6, 5.

5. La preparación liofilizada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el pH de la solución acuosa antes de redisolución se encuentra en el intervalo de 5 a 6, 5.

6. La preparación liofilizada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que contiene además un agente tensioactivo.

7. La preparación liofilizada según la reivindicación 6, en la que el agente tensioactivo es un agente tensioactivo no iónico.

8. La preparación liofilizada según la reivindicación 7, en la que el agente tensioactivo no iónico es un agente tensioactivo a base de éter de polioxietileno.

9. La preparación liofilizada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que está preparada en un vial o una ampolla.

10. La preparación liofilizada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que contiene el agente estabilizante en una cantidad de 0, 1 a 30 veces en peso con relación al peso de HGF.

11. El uso de un agente estabilizante del HGF para liofilizar una solución acuosa que contiene HGF en una concentración inferior a 5 mg/mL, con un pH en el intervalo de 5 a 6, 5, el cual está seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico y una de sus sales farmacológicamente aceptable.

12. El uso de un agente estabilizante según la reivindicación 11, para prevenir la formación de cúmulos de HGF durante la liofilización y/o almacenamiento después de liofilización.

13. El uso de un agente estabilizante según la reivindicación 11, en una cantidad de 0, 1 a 30 veces en peso con relación al peso de HGF.

14. El uso de un agente estabilizante de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que el agente está seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico y una de sus sales farmacológicamente aceptable.

15. Un procedimiento para preparar una preparación liofilizada que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos, sometiendo a liofilización una solución acuosa con un pH en el intervalo de 5, 0 a 6, 5 y que comprende un factor de crecimiento de hepatocitos, un agente estabilizante para prevenir la formación de un cúmulo del factor de crecimiento de hepatocitos, cloruro sódico y un agente tampón, caracterizado porque la solución acuosa comprende el factor de crecimiento de hepatocitos en una concentración inferior a 5 mg/mL.

16. El procedimiento según la reivindicación 15, en el que el agente estabilizante está seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico y una de sus sales farmacológicamente aceptable.

17. El procedimiento según la reivindicación 15 o 16, en el que el agente estabilizante está seleccionado dentro del grupo formado por arginina, lisina, histidina y una de sus sales farmacológicamente aceptable.

18. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en el que el agente tampón es una sal del ácido fosfórico.

19. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18, en el que la solución acuosa 5 contiene además un agente tensioactivo.

20. El procedimiento según la reivindicación 19, en el que el agente tensioactivo es un agente tensioactivo no iónico.

21. El procedimiento según la reivindicación 20, en el que el agente tensioactivo no iónico es un agente tensioactivo 10 a base de éter de polioxietileno.

22. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, que está preparado en un vial o una ampolla.

23. El procedimiento según las reivindicaciones 15 a 22, en el que la preparación comprende el agente estabilizante en una cantidad de 0, 1 a 30 veces en peso con relación al peso de HGF.