Dispositivo de preparación de muestras de análisis, soporte, sistema de preparación de muestras de análisis, método de preparación de muestras y método de análisis de una muestra.

Dispositivo de preparación de muestras de análisis, soporte, sistema de preparación de muestras de análisis,

método de preparación de muestras y método de análisis de una muestra.

La presente invención está dirigida a un dispositivo adaptado para la dosificación y preparación de muestras de análisis y adaptado para alojar al menos unos reactivos y partículas magnetizables, caracterizado porque comprende al menos una primera cámara adaptada para almacenar de forma estanca unos primeros reactivos, y las partículas magnetizables y que a su vez comprende unos primeros medios de sellado para el sellado hermético de dicha primera cámara y unos medios de apertura de los primeros medios de sellado, al menos una segunda cámara adaptada para almacenar de forma estanca unos segundos reactivos que a su vez comprende unos segundos medios de sellado para el sellado hermético de dicha segunda cámara y unos medios de apertura de los segundos medios de sellado, al menos una cámara principal adaptada para alojar matrices y para permitir la reacción de los reactivos y en la que desembocan al menos la primera cámara y la segunda cámara respectivamente a través de los medios sellado, medios de succión de muestra, y al menos un orificio de entrada-salida. La invención también se refiere a un soporte adaptado para alojar al dispositivo, un sistema que comprende el dispositivo y el soporte, un método de preparación de muestras que hace uso del dispositivo y un método de análisis que comprende una etapa de preparación de muestras como la indicada en dicho método de preparación de muestras.

OBJETO DE LA INVENCIÓN

La presente invención está dirigida a un dispositivo adaptado para la preparación de muestras de análisis que permite la dosificación de reactivos en un cuerpo monocameral de reacción permitiendo la manipulación de muestras y reactivos desde el exterior del mismo; el dispositivo garantiza el mantenimiento de las condiciones de esterilidad de los reactivos hasta su exposición a la muestra y minimiza el riesgo de manipulación de la muestra por el usuario. La invención también se refiere a un soporte para el dispositivo, un sistema que comprende el dispositivo y el soporte, un método de preparación de muestras que hace uso del sistema y un método de análisis que comprende una etapa de preparación de muestras como la indicada.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

En el estado de la técnica existen dispositivos que permiten de forma fácil y segura el manejo de muestras biológicas, la extracción y concentración de sus fracciones moleculares (ADN y ARN) , proteínas, anticuerpos, péptidos, etc, así como la adi

ción de los reactivos de amplificación.

Sin embargo, el principal problema técnico que presentan estos dispositivos del estado de la técnica es que no es posible una preparación que evite totalmente el contacto del usuario analizador con alguno de los reactivos, con el consiguiente ries

go de contaminación de éstos durante el proceso analítico, e incluso con la propia muestra, que puede constituir un riesgo biológico intrínseco, sin la utilización de equipos auxiliares como por ejemplo sistemas electrónicos, bombas, etc., que permitan el movimiento y/o dosificación de las distintas muestras o reactivos. Además existe el problema adicional de que al trasvasar muestras o reactivos de una pipeta a otra o a distintos recipientes existen pérdidas que en el caso que nos ocupa, manejando volúmenes de micro-litros (µL) , resultan costosas, pudiendo afectar al rendimiento de la/s reacción/es, a la repetitividad y, en general, a la robustez del método analítico.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención resuelve los problemas anteriormente descritos me

diante un dispositivo según la reivindicación 1, un soporte según la reivindicación 11, un sistema según la reivindicación 13, un método de preparación de muestras según la reivindicación 14 y un método de análisis según la reivindicación 15. Las reivindicaciones dependientes definen realizaciones preferidas de la invención.

En un primer aspecto inventivo se presenta un dispositivo adaptado para la dosificación y preparación de muestras de análisis y adaptado para alojar al menos unos reactivos y partículas magnetizables.

Este dispositivo podrá ser utilizado para el envasado o dosificación de, por

ejemplo, reactivos moleculares, para el alicuotado, extracción y preparación de muestras para su análisis mediante procedimientos de análisis molecular entre los que se incluyen PCR (Polymerase Chain Reaction) , Q-PCR/RT-PCR, inmuno-PCR, pirosecuenciación, amplificación isoterma de ácidos nucleicos, etc,

caracterizado porque comprende: 20  al menos una primera cámara adaptada para almacenar de forma estanca unos primeros reactivos, y las partículas magnetizables que a su vez comprende

o unos primeros medios de sellado para el sellado hermético de dicha primera cámara,

o unos medios de apertura de los primeros medios de sellado

El dispositivo cuenta con una primera cámara independiente y cerrada de manera estanca, de almacenado de los reactivos de uno o varios de los siguientes componentes: buffer de lisis, captura, re suspensión, lavado y amplificación. Esta cámara puede almacenar, además, unas partículas magnetizables si se va a realizar un proceso de concentración/captura de los analitos objetivo: ácidos nucleicos, proteínas, anticuerpos, péptidos etc. Las partículas magnetizables están constituidas por polímeros sintéticos, que incorporan un núcleo de material magnetizable y modificadas químicamente para permitir su enlace con una sustancia determinada. ej.: sileno, péptidos, anticuerpos, proteínas, ácidos nucleicos etc. Tales partículas pueden ser concen

tradas a partir de una suspensión, mediante su exposición a un campo magnético, constituyéndose así en una alternativa a la centrifugación. Las partículas magnetizables en la presente invención, dependiendo de su funcionalización con secuencias específi

cas, permiten la captura de ácidos nucleicos, proteínas, anticuerpos, péptidos, etc de la matriz de análisis. Para magnetizar estas partículas es necesario el uso de unos medios capaces de generar un campo magnético que pueden ser incorporados por el usuario.

Además, la cámara está cerrada de manera estanca mediante medios de sellado que impiden la pérdida de reactivos o la caída de reactivos sin control, o bien su contacto con el exterior, evitando así el riesgo de contaminaciones indeseadas o cambios en los parámetros físicos y químicos de los reactivos que alojan: deshidratación, humectación, oxidación, etc, entrada de partículas contaminantes biológicas,

orgánicas e inorgánicas, etc, que darían lugar a su alteración, afectando a su funcionalidad, pudiendo llegar a comprometer total o parcialmente la fiabilidad del método. Para posibilitar la salida de los reactivos de la cámara se utilizan los medios de apertura.

 al menos una segunda cámara adaptada para almacenar de forma estanca unos segundos reactivos que a su vez comprende

o unos segundos medios de sellado para el sellado hermético de dicha segunda cámara,

o unos medios de apertura de los segundos medios de sellado

De la misma manera que en la primera cámara, la segunda cámara es independiente y cerrada de manera estanca y es una cámara de almacenado de los reactivos de uno o varios de los siguientes componentes: buffer de lisis, captura, re suspensión, lavado y amplificación. Opcionalmente también puede alojar unas partículas magnetizables.

 al menos una cámara principal adaptada para alojar matrices y para permitir la reacción de los reactivos y en la que desembocan al menos la primera cámara y la segunda cámara respectivamente a través de los medios sellado,

La cámara principal del dispositivo, o cámara de reacción, es de un material esterilizado y permite la retención de la muestra líquida. El material con el que está conformada la cámara principal corresponde a los materiales habituales para este tipo de dispositivos de dosificación y preparación de muestras, comprendiendo, cualquier material polimérico, preferentemente termoplástico. A modo de ejemplo se citan los siguientes materiales: polietileno (PE) , polietileno de alta densidad (HDPE) , polietileno de baja densidad (LDPE) , poliestireno (PS) , politetrafluoroetileno (PTFE) , perfluoroalkoxy PTFE (PFA) , polipropileno (PP) , polimetilpenteno (PMP) , neopreno, perbunano,

etc.

En dicha cámara de reacción se añaden bien simultáneamente, o bien secuencialmente los reactivos, según la práctica para la que se utilice el dispositivo. 5

En esta cámara de reacción se ponen en contacto los reactivos alojados en al menos una de las cámaras de almacenado, dependiendo de la práctica a realizar, con la muestra de análisis. También puede usarse como alojamiento individual.

Las cámaras adaptadas para el almacenado de reactivos se ponen en contacto con la cámara de reacción al actuarse sobre los medios de apertura, evitándose el contacto directo del manipulador con la muestra, minimizándose drásticamente la exposición a un eventual riesgo biológico y los reactivos, evitándose el riesgo de contaminación del ensayo.

 medios de succión de muestra La muestra que se prepara con el dispositivo es introducida en la cámara principal o cámara de reacción utilizando estos medios de succión. 20

 y al menos un orificio de entrada-salida Para introducir la muestra se utilizan los medios de succión de manera que al comprimirlos el volumen de aire de dentro del cuerpo se expulsa. Después el orificio 25 de entrada-salida se sumerge en la muestra líquida. Finalmente se liberan los medios de succión y la muestra es introducida a través de los medios de entrada-salida.

La muestra de análisis, una vez que ha hecho reacción con los reactivos, se coloca en el tubo de destino para su análisis, que en caso de realizar una práctica PCR,

Q-PCR/RT-PCR o Inmuno-PCR, está dentro de un termociclador para la reacción en cadena de la polimerasa y amplificación de secuencias específicas de ácidos nucleicos en función de los reactivos añadidos... [Seguir leyendo]

1. Dispositivo adaptado para la dosificación y preparación de muestras de análisis y adaptado para alojar al menos unos reactivos y partículas magnetizables, 5 caracterizado porque comprende:  al menos una primera cámara (2) adaptada para almacenar de forma estanca unos primeros reactivos, y las partículas magnetizables que a su vez comprende

o unos primeros medios de sellado (7) para el sellado hermético de dicha primera cámara, 10 o unos medios de apertura (17) de los primeros medios de sellado (7) ,

 al menos una segunda cámara (3) adaptada para almacenar de forma estanca unos segundos reactivos que a su vez comprende

o unos segundos medios de sellado (8) para el sellado hermético de dicha segunda cámara, 15 o unos medios de apertura (18) de los segundos medios de sellado (8) ,

 al menos una cámara principal (4) adaptada para alojar matrices y para permitir la reacción de los reactivos y en la que desembocan al menos la primera cámara (2) y la segunda cámara (3) respectivamente a través de los medios sellado (7, 8) ,

 medios de succión (15) de muestra,  y al menos un orificio de entrada-salida (5) .

2. Dispositivo según la reivindicación 1 caracterizado porque comprende al menos un elemento removible (1) para succionar la muestra, preferiblemente con 25 forma tubular tronco-cónica adaptada para ser encajada en los medios de entrada-

salida (5) .

3. Dispositivo según la reivindicación 2 caracterizado porque el elemento removible (1) , comprende medios de filtrado (16) . 30

4. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende  al menos un primer ramal (12) que aloja al menos la primera cámara (2) y  al menos un segundo ramal (13) que aloja al menos la segunda cámara (3) .

3.

5. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque los medios de succión (15) de muestra son la cámara principal (4) , sien

do ésta de un material elástico.

6. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende unos medios (6) capaces de generar un campo magnético. 5

7. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende al menos una tercera cámara (10) adaptada para alojar de forma estanca unos terceros reactivos y que a su vez comprende  unos terceros medios de sellado (11) para el sellado hermético de dicha tercera cámara (10) ,  unos medios de apertura (19) de los terceros medios de sellado (11) , y que desemboca en la en la cámara principal (4) a través de los terceros medios de sellado (11) .

1.

8. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende al menos un tercer ramal (14) que aloja al menos la tercera cámara (10) .

9. Dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracte

rizado porque los medios de sellado (7, 8, 11) están fabricados de un material compuesto por aluminio y polipropileno y están termosellados a sus respectivas cámaras (2, 3, 10) .

10. Dispositivo según la reivindicación 9 caracterizado porque los medios 25 de apertura (17, 18, 19) de los medios de sellado (7, 8, 11) son punzones.

11. Soporte (9) para un dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10 que comprende medios de extracción (20) del elemento removible (1) .

3.

12. Soporte (9) según la reivindicación 11 caracterizado porque tiene medios de alojamiento (21) para unos medios (22) capaces de generar un campo magnético.

13. Sistema adaptado para la dosificación y preparación de muestras para su análisis mediante un procedimiento de análisis caracterizado porque comprende:  un dispositivo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10,  y un soporte (9) según cualquiera de las reivindicaciones de la 11 a la 12.

14. Método de preparación de muestras para su análisis que comprende la preparación de muestras por medio del dispositivo según cualquiera de las reivindica

ciones 1 a 10, o un sistema según la reivindicación 13.

15. Método de análisis de una muestra que comprende la preparación de dicha muestra por medio del método de la reivindicación 14.