Péptidos ciclicos antimicrobianos.

Uso de un péptido cíclico que consiste de 3 a 15 aminoácidos de arginina en la fabricación de un medicamentopara el tratamiento o prevención de una infección fúngica.

Péptidos cíclicos antimicrobianos Campo de la invención La presente invención se refiere a péptidos cíclicos catiónicos y su uso en el tratamiento de infecciones microbianas.

Antecedentes de la Invención Los péptidos antimicrobianos (AMP) conforman la piedra angular de la inmunidad eucariota y proporcionan una primera línea de defensa contra el traspaso de la piel y de las mucosas por micro-organismos. Ejemplos de AMP naturales incluyen las familias de péptidos de las defensinas y catelicidinas. Estos AMP son heterogéneos en longitud, secuencia y estructura, pero es común a la mayoría su pequeño tamaño, carga catiónica neta y estructura anfipática. Los péptidos antimicrobianos catiónicos y pequeños, se han aislado además de muchas bacterias, hongos, plantas, invertebrados y vertebrados y por lo tanto, parecen además jugar un papel en las defensas procariotas.

Los AMP naturales exhiben una actividad de amplio espectro contra bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, levaduras, hongos y virus con envoltura. Los patógenos microbianos no parecen adquirir resistencia a estos péptidos catiónicos y como tal, los AMP se han conservado como moléculas vitales e innatas de defensa inmunológica del hospedero a través de milenios de evolución. No es de extrañar por lo tanto que los AMP se han implicado como posibles dianas para agentes terapéuticos para una amplia variedad de infecciones. Sin embargo, el hecho de que son técnicamente difíciles y costosos de producir en sistemas recombinantes y tienen potentes funciones biológicas quimiotácticas e inflamatorias descarta las formas naturales de AMP como agentes terapéuticos.

En el documento WO 2006/018652, hemos mostrado que los péptidos lineales ricos en ciertos residuos básicos tales como lisina o arginina poseen actividad antimicrobiana, y, particularmente, actividad antimicótica. Adicionalmente, el documento WO 2004/050685, describe péptidos que contienen arginina eficaces para inhibir el crecimiento de patógenos fúngicos y es un ejemplo adicional de péptidos con actividad antimicrobiana. Se mantiene, sin embargo, una necesidad de agentes adicionales que pueden usarse en el tratamiento o prevención de las infecciones microbianas.

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona el uso de un péptido cíclico que consiste de 3 a 15 aminoácidos arginina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección fúngica.

Los péptidos cíclicos de la invención son deseables como un agente terapéutico ya que son muy eficaces, proteolíticamente estables, prácticamente insensibles a sales, no hepatotóxicos, no hemolíticos y fáciles de sintetizar.

Se cree que la carga catiónica de los péptidos de la invención facilita la asociación del péptido con los grupos polares de las cabezas de las membranas microbianas. Se cree que la estabilización de los grupos cargados en una confirmación más densa por la ciclación mejora esta atracción aumentando de ese modo la potencia antimicrobiana de los péptidos.

En un aspecto preferido de la invención el péptido consiste de 5 a 13 aminoácidos. Aún más preferidos son los péptidos que consisten de 3 a 7 aminoácidos, por ejemplo 7 aminoácidos.

Como se conoce por los expertos, los aminoácidos se pueden ubicar en diferentes clases dependiendo principalmente de las propiedades químicas y físicas de la cadena lateral del aminoácido. Por ejemplo, algunos aminoácidos se consideran generalmente como aminoácidos hidrófilos o polares y otros se consideran aminoácidos hidrófobos o no polares. El aminoácido hidrófobo puede seleccionarse del grupo de aminoácidos hidrófobos que consiste de glicina, leucina fenilalanina, prolina, alanina, triptófano, valina, isoleucina, metionina, tirosina y treonina; los aminoácidos 50 catiónicos pueden seleccionarse del grupo que consiste de ornitina, histidina, arginina y lisina. Como se usa en la presente, los términos quot;hidrófoboquot; y quot;catiónicoquot; pueden referirse a los aminoácidos que tienen una hidrofobicidad que es mayor que o igual a -1.10 y/o una carga neta que es mayor que o igual a 0, como se describe en Fauchere y Pliska Eur.

J. Med Chem. 10:39 (1983) . Un aminoácido hidrófobo o no polar puede además referirse a un aminoácido que tiene una cadena lateral que no está cargada a pH fisiológico, es no polar y que generalmente se repele por una solución acuosa. 55 Los aminoácidos pueden ser de origen natural o sintéticos.

X y/o Y pueden ser isómeros ópticos de un aminoácido hidrófobo o catiónico como se define en la presente, por ejemplo, D- o L-aminoácidos. Preferentemente X y/o Y son D-aminoácidos.

En un aspecto preferido de la invención, el péptido consiste de al menos 90%, por ejemplo al menos 95% tal como 9799% o incluso 100%, de D-aminoácidos.

En un aspecto preferido de la invención, el péptido consiste de al menos 90%, por ejemplo, al menos 95% tal como 9799% o incluso 100%, de L-aminoácidos.

La invención incluye además isómeros conocidos (estructurales, estéreo, conformacionales & configuracionales) , peptidomiméticos, análogos estructurales de los aminoácidos anteriores, y los modificados ya sea de forma natural (por ejemplo, una modificación post-traduccional) o químicamente, que incluyen, pero no exclusivamente, la fosforilación, glicosilación, sulfonilación y/o hidroxilación.

Además, la secuencia de aminoácidos del péptido puede modificarse a fin de resultar en una variante de péptido que incluye la sustitución de al menos un residuo de aminoácido en el péptido por otro residuo de aminoácido, incluyendo las sustituciones que utilizan la forma D en lugar de la L.

Uno o más de los residuos del péptido puede cambiarse por otro para alterar, mejorar o preservar la actividad biológica del péptido. Tal variante puede tener, por ejemplo, al menos aproximadamente 10% de la actividad biológica del péptido invariante correspondiente. Los aminoácidos conservadores se utilizan frecuentemente, es decir, las sustituciones de aminoácidos con propiedades químicas y físicas similares como se describió anteriormente. Por lo tanto, por ejemplo, las sustituciones de aminoácidos conservadores pueden involucrar el intercambio de lisina por arginina, ornitina o histidina; o el intercambio de arginina por lisina o isoleucina, ornitina por histidina; o el intercambio de un aminoácido hidrófobo por otro. Después de la introducción de las sustituciones, las variantes se examinan en cuanto a la actividad biológica.

El término quot;péptidoquot;, como se usa en la presente significa, en términos generales, una pluralidad de residuos de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Estos se usan de manera intercambiable y significan lo mismo que polipéptido y proteína.

En una modalidad de la invención, el péptido cíclico se selecciona del grupo que consiste de:

R-R-R-R-R-R-R

Los péptidos de la invención son generalmente péptidos sintéticos. Los péptidos pueden ser péptidos aislados, purificados o variantes de los mismos, que pueden sintetizarse in vitro, por ejemplo, por un método de síntesis de péptidos en fase sólida, por síntesis de péptidos catalizada por enzimas o con la ayuda de tecnología de ADN recombinante.

En un aspecto adicional de la invención se proporciona un proceso para la preparación de un péptido de acuerdo con la invención, proceso que comprende ciclar un péptido de fórmula (I) o (II) por la reacción del péptido con un agente de acoplamiento.

El agente de acoplamiento puede ser cualquier agente capaz de formar un enlace peptídico entre los dos residuos aminoácidos terminales (C y N terminales) del péptido cuando está en su forma lineal, por ejemplo, entre dos cadenas principales o laterales de aminoácidos. La elección del agente de acoplamiento puede influir en la eficiencia de acoplamiento y por lo tanto en el rendimiento del péptido cíclico. Los ejemplos de agentes de acoplamiento útiles en el proceso de la invención se muestran en la Tabla 1 aunque un experto será consciente de otros agentes de acoplamiento conocidos que además son útiles en la invención. Preferentemente el agente de acoplamiento es HATU - O- (7-azabenzotriazol-1-il) -N, N, N, N '-tetrametiluroniohexafluorofosfato.

Preferentemente la reacción entre el péptido y el agente de acoplamiento tiene lugar en presencia de una base. La base puede incluir, pero no se limita a, N-metilmorfolina (NMM) o diisopropil-etilamina (DIEA) . Preferentemente, la reacción tiene lugar a pH alcalino, por ejemplo entre pH 8.5-9. El péptido puede modificarse para incluir un grupo protector antes de su reacción con el agente de acoplamiento.... [Seguir leyendo]

1. Uso de un péptido cíclico que consiste de 3 a 15 aminoácidos de arginina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una infección fúngica.

2. El uso como se reivindicó en la reivindicación 1 en donde el péptido consiste de 5 a13 aminoácidos.

3. El uso como se reivindicó en la reivindicación 1 en donde el péptido consiste de 3 a 7 aminoácidos.

4. El uso como se reivindicó en cualquier reivindicación precedente en donde los aminoácidos son Daminoácidos.

5. El uso como se reivindicó en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en donde los aminoácidos son Laminoácidos.

6. El uso como se reivindicó en cualquier reivindicación precedente en donde el péptido es R-R-R-R-R-R-R.

7. El uso como se reivindicó en cualquier reivindicación precedente en donde la infección es una infección por dermatofitos.

8. El uso como se reivindicó en la reivindicación 7 en donde la infección por dermatofitos es causada por un dermatofito de los géneros Trichophyton, Epidermophyton o Microsporum.

9. El uso como se reivindicó en la reivindicación 8 en donde el dermatofito es Trichophyton spp.

10. El uso como se reivindicó en la reivindicación 9 en donde el dermatofito es Trichophyton interdigitale.

11. El uso como se reivindicó en la reivindicación 9 en donde el dermatofito es Trichophyton rubrum. 30 12. El uso como se reivindicó en cualquier reivindicación precedente en donde la infección es onicomicosis.

13. El uso como se reivindicó en cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 6, en donde la infección es una infección por Tinea.

14. El uso como se reivindicó en cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 6, donde la infección es una infección por no dermatofitos.