Nueva línea de células madre y su aplicación.

Una línea de células madre designada como MIC - 1 derivada de los cuernos en desarrollo de ciervo (Cervidae)depositada en el banco DSMZ bajo el número de acceso DSM ACC2854.

Nueva línea de células madre y su aplicación La presente invención se refiere a una línea de células madre estable designada por MIC-1.

La búsqueda del material ideal para la reconstrucción de la red cartilaginosa de los lóbulos de las orejas y la nariz se realiza desde hace más de cien años y aún se sigue persiguiendo activamente. Se ha usado y aún se sigue usando más a menudo el cartílago costal autólogo como material reconstructivo en cirugía facial. Desafortunadamente, el tiempo requerido para obtenerlo complica enormemente el procedimiento, somete al paciente a un malestar postquirúrgico mayor e incrementa la probabilidad de posteriores complicaciones en las zonas de muestreo. Además, en niños, la cantidad de cartílago costal disponible para su recogida a menudo es demasiado pequeña para reconstruir el lóbulo de la oreja o la nariz, mientras que en adultos puede estar calcificado e inservible. Una etapa importante en la búsqueda del material reconstructivo orgánico ideal consistió en la investigación de Vacanti et al, iniciada durante los años 80. Esta investigación pionera hizo uso de una malla de polímero sintético, biocompatible, biodegradable y poroso que se impregnó con condrocitos humanos aislados. Sin embargo, el número de condrocitos que pueden hacerse crecer ex vivo es limitado, y es de importancia directa para la eficiencia en la regeneración. La tecnología es muy cara, tediosa y requiere un equipo especializado. Además, muchos implantes pierden su forma con el tiempo. Surgen dificultades particulares debido al problema de la compatibilidad entre especies en la mayoría de los casos, puesto que se produce una reacción inmunitaria fuerte contra el tejido exógeno introducido, lo que da como resultado un rechazo del implante.

El comienzo del siglo XXI es un periodo de desarrollo muy dinámico en el uso de células madre en la regeneración y

reconstrucción de toda clase de tejidos, incluido el tejido conjuntivo. Las células madre se caracterizan por un gran potencial de proliferación, tanto in vivo como in vitro, y la posibilidad de implantarlas es una oportunidad para el progreso significativo en transplantología. En el caso de la mayoría de los tejidos, sin embargo, es muy difícil obtener determinadas líneas celulares. Además, la recogida de células madre humanas conlleva problemas éticos, así como el riesgo de transferir enfermedades víricas y tumores.

El estado de la tecnología revela soluciones que corresponden únicamente a la obtención de células madre que se diferencian en osteoblastos exclusivamente a partir de varios tejidos humanos. Las solicitudes WO 2005/085422 y US 2005/0048644 describen células madre aisladas de tejido lípido, usadas en el tratamiento de enfermedades del aparato locomotor. La solicitud WO 2005/038012 revela un procedimiento de obtención de células madre que se pueden diferenciar en osteoblastos o condroblastos a partir de tejido fetal humano. La solicitud 2007/0122902 revela un procedimiento de aislamiento y cultivo de células madre pluripotentes a partir de sangre de placenta. También se han realizado intentos para modificar genéticamente células que pueden regenerar cartílago y hueso, como se relaciona por la descripción de la patente US 6398816. El mayor número de controversias éticas se plantean por las aplicaciones relacionadas con el aislamiento de células madre a partir de tejido embrionario (documentos WO03068937A2, WO02064755A2, WO0038583A1) .

La aplicación de células madre humanas, descrita ampliamente en el estado de la tecnología, conlleva muchos problemas que son evidencia de la necesidad de continuar con la investigación en este respecto. Algunos de los problemas principales son las consideraciones éticas que entraña el uso de tejido embrionario, el daño de defectos genéticos así como el riesgo de transferir enfermedades víricas y tumores. Por tanto, existe una necesidad real y apremiante de obtener líneas de células madre, de las que su aplicación excluiría el riesgo de los problemas anteriores.

Cada año, los cuernos desarrollados del ciervo (Cervidae) , hechos de tejido óseo, se caen y vuelven a crecer rápidamente. Se desarrolla de forma postnatal como una extensión de los pedículos, que siempre están presentes en el orificio. Las regiones de crecimiento, blastema del tallo y cuernos surgen de una zona especializada del orificio, la denominada periostio formador del cuerno. Los brotes y cuernos en desarrollo se construyen a partir de una forma 45 específica de osteocartílago, que es una mezcla de cartílago y hueso. Los cuernos se producen en todos los machos de las 39 especies en la familia de los ciervos.

El crecimiento de los cuernos en el ciervo, su forma y posterior mineralización son procesos complejos y a la vez rápidos. Los cuernos crecen debido al denominado proceso de osificación endocondral. En nuestra zona climática, el crecimiento es particularmente rápido durante un periodo de tres meses, de abril a junio, el crecimiento diario de dos 50 centímetros hace que los cuernos en desarrollo sean uno de los órganos que crecen más rápidamente en mamíferos. Esto requiere la activación y la colaboración de muchos tipos de células, y las células madre desempeñan un papel particular en la iniciación y continuación del proceso. Las células productoras de cuernos son de origen mesenquimal, y algunas de ellas se pueden considerar células madre somáticas adultas.

El estado de la tecnología describe las propiedades del tejido de los cuernos del ciervo, reconocido como la forma de 55 hueso que crece más rápidamente entre los tejidos de mamíferos. Se han realizado intentos para utilizar las propiedades de crecimiento de este tejido, principalmente a través del aislamiento de factores de crecimiento. La solicitud WO 93/19085 revela un procedimiento de aislamiento de un factor de crecimiento, como sustancia que puede regenerar el tejido óseo dañado. Los autores revelaron un procedimiento de obtención de un extracto aislado de los cuernos del ciervo Sika (Cervus nippan) , que estimula el crecimiento de células madre hematopoyéticas y megacariocitos. La solicitud WO 2004/112808 revela una composición para el tratamiento de disfunciones neuronales, a base de marcadores de factores de crecimiento obtenidos a partir de cuernos de ciervo. Sin embargo, hasta la fecha, no ha sido posible obtener una línea de células madre estable a partir de cuernos de ciervo, lo que se podría usar con éxito en la reconstrucción de lesiones del tejido conjuntivo, ni un procedimiento para cultivar las mismas.

El objetivo de la presente invención es obtener una línea estable de células madre para la reconstrucción de tejido conjuntivo, preferentemente cartílago, hueso o tejidos grasos, tanto humano como animal. Además, un objetivo de la presente invención es una línea de células madre que induce pocas respuestas inmunitarias, lo que permitirá que se use en implantes xenogénicos, es decir, de especies cruzadas. Un objetivo de la presente invención también es la obtención de esta línea de células madre cuya aplicación evitaría consideraciones éticas, el peligro de formación de defectos genéticos así como los riesgos de transferencia de enfermedades víricas y tumores.

Inesperadamente, el objetivo establecido anteriormente se ha logrado en la presente invención.

El objeto de la presente invención es una nueva línea de células madre designada MIC-1 derivada de los cuernos en desarrollo del ciervo (Cervidae) , depositada en el banco DSMZ con el número de referencia DSM ACC2854. El siguiente objeto de la presente invención es la línea de células madre anterior para su uso en la reconstrucción de lesiones del tejido conjuntivo.

El siguiente objeto de la invención es la línea de células madre depositada con el número de referencia DSM ACC2854 para su uso en implantación.

Inesperadamente, resultó que las células xenogénicas podrían ser una alternativa a las células madre humanas. Durante la búsqueda de fuentes de estas células, la atención se dirigió a los cuernos de los ciervos, caracterizados por su proceso de crecimiento y renovación peculiar sin precedentes. Los resultados de la investigación muestran que entre las células que participan en la renovación anual de los cuernos, hay un grupo de células provistas de un potencial de proliferación alto. Estas forman un conjunto limitado de células diferenciadas que participan, entre otros procesos, en la regeneración de cartílago, hueso y tejido adiposos dañados. Puesto que las células productoras de cuernos están poco diferenciadas, lo que induce un nivel bajo de respuesta inmunitaria, resultó que las posibilidades de aceptar implantes xenogénicos, de especies... [Seguir leyendo]

1. Una línea de células madre designada como MIC -1 derivada de los cuernos en desarrollo de ciervo (Cervidae) depositada en el banco DSMZ bajo el número de acceso DSM ACC2854.

2. Una línea de células madre de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en la reconstrucción de lesiones del tejido conjuntivo.

3. Una línea de células madre de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en implantación.