Métodos y biomarcadores para diagnosis y monitorización de trastornos esquizofrénicos.

Un método de diagnosis, determinación de una predisposición a,

o monitorización del tratamiento de untrastorno esquizofrénico, que comprende los pasos de:

(a) medir, en una muestra tomada de un individuo, los niveles de cada uno de los biomarcadores siguientes:Beta-2 Microglobulina a, Factor Neurotrófico Derivado de Cerebro, Calcitonina a, IL-13, IL-7, Alfa-1 antitripsina,Apolipoproteína A1, Factor de Crecimiento del Tejido Conectivo, Fibrinógeno, G-CSF, Hormona del Crecimiento,Glutatión S-Transferasa, lgA, lgM, Leptina, MDC, PAI-1, RANTES, Amiloide P del Suero, Factor de Células Madre,SHBG, TNF Rll, Anticuerpo T3, Anticuerpo H4 de Histona, Anticuerpo HSC 70, Rubéola, Anticuerpo SSB y V.zóster; y

(b) comparar el nivel del biomarcador presente en dicha muestra con el nivel del biomarcador en una muestrade control.

Métodos y biomarcadores para diagnosis y monitorización de trastornos esquizofrénicos Campo Técnico La presente invención se refiere a métodos de diagnosis o de monitorización de trastornos esquizofrénicos, v.g. que utilizan biomarcadores. La exposición se refiere también al uso de biomarcadores en cribado clínico, evaluación de prognosis, evaluación de terapia, cribado de fármacos y desarrollo de fármacos. Los biomarcadores y métodos en los cuales se emplean pueden utilizarse para ayudar a la diagnosis, y para evaluar la aparición y el desarrollo de trastornos esquizofrénicos.

Antecedentes de la Invención La identificación de biomarcadores para trastornos esquizofrénicos permite la integración de procedimientos de diagnosis y regímenes terapéuticos. En la actualidad, existen retardos importantes en la determinación del tratamiento eficaz, y no ha sido posible hasta ahora realizar una evaluación rápida de la respuesta a los fármacos. Tradicionalmente, muchas terapias anti-esquizofrénicas han requerido pruebas de tratamiento que duran semanas hasta meses para un método terapéutico dado.

Yang et al. (2006) , Anal, Chem. 78, 3571-6, da a conocer niveles alterados de proteínas en el plasma de pacientes con esquizofrenia. Los resultados se refieren a marcadores de eficacia de los fármacos. Aparentemente no existe diferencia alguna entre los pacientes tratados y no tratados. No se da resultado cuantitativo alguno.

WO 2007/045865 describe psicosis y otros trastornos y la necesidad de biomarcadores. Los biomarcadores descritos en dicho documento incluyen el péptido ApoA1 (apolipoproteína) .

WO 2008/090319 y Maes et al. 1997 dan a conocer biomarcadores adicionales. Los mismos incluyen el precursor de clusterina, el inhibidor de inter-alfa-tripsina, la apolipoproteína A2 y la glicoproteína alfa2 HS.

Sumario de la Invención Basándose en un enfoque del tipo descrito en WO 2007/045865, se han identificado biomarcadores adicionales. De acuerdo con un aspecto de la invención, se proporciona un método de diagnosis, determinación de una predisposición a o monitorización del tratamiento de un trastorno esquizofrénico, que comprende los pasos de:

(a) medir, en una muestra tomada de un individuo, los niveles de cada uno de los biomarcadores siguientes: Beta-2 Microglobulina, Factor Neurotrófico Derivado de Cerebro, Calcitonina, IL-13, IL-7, Alfa-1 antitripsina, Apolipoproteína A1, Factor de Crecimiento del Tejido Conectivo, Fibrinógeno, G-CSF, Hormona del Crecimiento, Glutatión S-Transferasa, lgA, lgM, Leptina, MDC, PAI-1, RANTES, Amiloide P del Suero, Factor de Células Madre, SHBG, TNF Rll, Anticuerpo T3, Anticuerpo H4 de Histona, Anticuerpo HSC 70, Rubéola, Anticuerpo SSB y V. zóster; y

(b) comparar el nivel del biomarcador presente en dicha muestra con el nivel del biomarcador en una muestra de control.

En una realización, el método comprende la medida de uno o más biomarcadores adicionales seleccionados de:

Alfa 2 Macroglobulina, ANG 2 (Angiopoyetina 2) , Angiotensinógeno, Anticuerpo Anti-Nuclear, Apolipoproteína A1, Apolipoproteína Clll, Apolipoproteína H, ASCA (Anticuerpo de Saccharomyces cerevisiae) , Betacelulina, BMP 6, C. trachomatis, Proteína C Reactiva, Antígeno Carcinoembrionario, CD40, Ligando de CD40, Anticuerpo de la Proteína B del Centrómero, CgA (Cromogranina A) , Toxina del Cólera, Anticuerpo de Colágeno Tipo 2, Anticuerpo de Colágeno Tipo 4, Complemento 3, Cortisol, Citomegalovirus, EGF, EGF R, ENA 78, Endotelina 1, Eotaxina 3, Antígeno Precoz del Virus Epstein Barr, Eritropoyetina, Factor VIl, Ligando Fas, Ferritina, FGF básico, FSH (Hormona Estimulante del Folículo) , H. pylori, Haptoglobina, Hepatitis A, Hepatitis B Núcleo, Ad de Superficie de la Hepatitis B, Ay de Superficie de la Hepatitis B, Hepatitis C Núcleo, Hepatitis C NS3, Hepatitis C NS4, Hepatitis D, Hepatitis E Virus orf 2, 6KD, Hepatitis E Virus orf 3, 3KD, Herpes Simplex Virus 1.2, HGF (factor de crecimiento de los hepatocitos) , Anticuerpo de Histona, Anticuerpo de Histona H1, Anticuerpo de Histona H2a, Anticuerpo de Histona H2b, Anticuerpo de Histona H3, HIV 1 gp120, HIV 1 p24, Anticuerpo HSP 32 HO, Anticuerpo HSP 71, Anticuerpo HSP 90 alfa, Anticuerpo HSP 90 beta, ICAM 1, IGF BP.2, IL-10, IL-12p40, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL1ra, IL-3, IL-5, IL-6, IL-8, Influenza A, Influenza A H3N2, lnsulina, Anticuerpo de lnsulina, L. donovani, LH (Hormona Luteinizante) , Lyme, M. pneumoniae, MIF, MIP 1 alfa, MIP 1 beta, Anticuerpo Mitocondrial, Paperas, Mieloperoxidasa, Anticuerpo de Mieloperoxidasa pANCA, NrCAM, Anticuerpo GAD de las Células de los Islotes Pancreáticos, Polipéptido pancreático, Parainfluenza 1, Parainfluenza 2, Parainfluenza 3, PDGF, Péptido YY, Anticuerpo PM 1, Polio Virus, Prolactina, Fosfatasa Ácida Prostática, Anticuerpo de Proteinasa 3 cANCA, Resistina, Virus Respiratorio Sincitial, Anticuerpo P Ribosómico, Anticuerpo RNP, Rubéola, Anticuerpo Scl 70, SGOT, Anticuerpo Smith, Sortilina, sRAGE, Estreptolisina O SLO, TECK, Trombopoyetina, Anticuerpo Tiroglobulina, TIMP 1, TNF alfa, TRAIL R3, TSP 1, Anticuerpo de la Enfermedad Celiaca tTG (Transglutaminasa Tisular) , VEGF y Factor

von Willebrand.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método de monitorización de la eficacia de una terapia anti-psicótica en un individuo que sufre, se sospecha que sufre, o que está predispuesto a, un trastorno esquizofrénico, que comprende los pasos siguientes:

(a) medir el nivel de cada uno de los biomarcadores que se definen en esta memoria presentes en muestras tomadas en dos o más ocasiones del individuo; y

(b) comparar el nivel de cada uno de los biomarcadores en una muestra tomada del individuo con el nivel presente en una muestra tomada del individuo antes del comienzo de una terapia, y/o una muestra tomada del individuo en una etapa anterior de una terapia.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un kit para monitorización o diagnosis de un trastorno esquizofrénico que comprende un biosensor capaz de detectar y/o cuantificar los biomarcadores que se definen en esta memoria.

Aspectos adicionales de la invención se definen en las reivindicaciones. La exposición incluye un método para monitorización de la eficacia de la terapia para un trastorno esquizofrénico en un individuo. Los métodos de monitorización de la invención pueden utilizarse para monitorizar la aparición, la progresión, la estabilización, la mejora y/o la remisión de un trastorno psicótico.

La exposición se refiere a un método de identificación de una sustancia capaz de estimular, promover o activar la generación de un biomarcador peptídico en un individuo, que comprende administrar una sustancia de test a un individuo animal y detectar y/o cuantificar los niveles del biomarcador peptídico presentes en una muestra de test del individuo.

Descripción de la Invención En el uso de los métodos se apreciará que pueden utilizarse un solo biomarcador o más de uno, en una o más de una ocasión, y con respecto a una o más muestras. Puede hacerse referencia a biomarcadores proteínicos, y se apreciará que, dependiendo de las circunstancias, la referencia a una proteína de este tipo incluye fragmentos de la misma.

En el ensayo, según la exposición, un nivel alterado o disminuido de biomarcadores proteínicos plasmáticos en una muestra biológica de test con relación al nivel en un control normal es indicativo de la presencia de un trastorno esquizofrénico, o predisposición al mismo. Una disminución en el nivel de una proteína plasmática en una muestra biológica, preferiblemente en una muestra de sangre entera, plasma, o suero, a lo largo del tiempo puede ser indicativa de aparición o progresión, es decir, empeoramiento del trastorno, mientras que un aumento en el nivel de la proteína plasmática puede indicar mejora o remisión del trastorno.

Los métodos de monitorización y de diagnosis son útiles para confirmar la existencia de un trastorno, o predisposición al mismo, para monitorizar el desarrollo del trastorno por evaluación de la aparición y progresión, o para evaluar la mejora o regresión del trastorno. Los métodos de monitorización y de diagnosis son útiles también en métodos para evaluación de cribado clínico, prognosis, elección de terapia, evaluación de beneficio terapéutico, es decir para cribado de fármacos y desarrollo de fármacos.

Los métodos eficientes de diagnosis y monitorización proporcionan "soluciones para el paciente" muy potentes con el potencial para prognosis mejorada, por establecimiento de la diagnosis correcta, haciendo posible una identificación rápida del tratamiento más apropiado... [Seguir leyendo]

1. Un método de diagnosis, determinación de una predisposición a, o monitorización del tratamiento de un trastorno esquizofrénico, que comprende los pasos de:

(a) medir, en una muestra tomada de un individuo, los niveles de cada uno de los biomarcadores siguientes:

Beta-2 Microglobulina a, Factor Neurotrófico Derivado de Cerebro, Calcitonina a, IL-13, IL-7, Alfa-1 antitripsina, Apolipoproteína A1, Factor de Crecimiento del Tejido Conectivo, Fibrinógeno, G-CSF, Hormona del Crecimiento, Glutatión S-Transferasa, lgA, lgM, Leptina, MDC, PAI-1, RANTES, Amiloide P del Suero, Factor de Células Madre, SHBG, TNF Rll, Anticuerpo T3, Anticuerpo H4 de Histona, Anticuerpo HSC 70, Rubéola, Anticuerpo SSB y V. zóster; y

(b) comparar el nivel del biomarcador presente en dicha muestra con el nivel del biomarcador en una muestra de control.

2. El método que se define en la reivindicación 1, que comprende la medición de uno o más biomarcadores adicionales seleccionados de: Alfa 2 Macroglobulina, ANG 2 (Angiopoyetina 2) , Angiotensinógeno, Anticuerpo Anti-Nuclear, Apolipoproteína A1, Apolipoproteína Clll, Apolipoproteína H, ASCA (Anticuerpo Saccharomyces 15 cerevisiae) , Betacelulina, BMP 6, C. trachomatis, Proteína C Reactiva, Antígeno Carcinoembrionario, CD40, Ligando de CD40, Anticuerpo de la Proteína B del Centrómero, CgA (Cromogranina A) , Toxina del Cólera, Anticuerpo de Colágeno Tipo 2, Anticuerpo de Colágeno Tipo 4, Complemento 3, Cortisol, Citomegalovirus, EGF, EGF R, ENA 78, Endotelina 1, Eotaxina 3, Antígeno Precoz del virus Epstein Barr, Eritropoyetina, Factor VIl, Ligando Fas, Ferritina, FGF básico, FSH (Hormona Estimulante del Folículo) , H. pylori, Haptoglobina, Hepatitis A, Hepatitis B 20 Núcleo, Ad de Superficie de la Hepatitis B, Ay de Superficie de la Hepatitis B, Hepatitis C Núcleo, Hepatitis C NS3, Hepatitis C NS4, Hepatitis D, Hepatitis E Virus orf 2.6KD, Hepatitis E Virus orf 3.3KD, Herpes Simplex Virus 1.2, HGF (factor de crecimiento de los hepatocitos) , Anticuerpo de Histona, Anticuerpo de Histona H1, Anticuerpo de Histona H2a, Anticuerpo de Histona H3, HIV 1 gp120, HIV 1 p24, Anticuerpo HSP 32 HO, Anticuerpo HSP 71, Anticuerpo HSP 90 alfa, Anticuerpo HSP 90 beta, ICAM 1, IGF BP.2, IL-10, IL-12p40, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL25 1ra, IL-3, IL-5, IL-6, IL-8, Influenza A, Influenza A H3N2, lnsulina, Anticuerpo de lnsulina, L. donovani, LH (Hormona Luteinizante) , Lyme, M. pneumoniae, MIF, MIP 1 alfa, MIP 1 beta, Anticuerpo Mitocondrial, Paperas, Mieloperoxidasa, Anticuerpo de Mieloperoxidasa pANCA , NrCAM, Anticuerpo GAD de las Células de los Islotes Pancreáticos, Polipéptido pancreático, Parainfluenza 1, Parainfluenza 2, Parainfluenza 3, PDGF, Péptido YY, Anticuerpo PM 1, Polio Virus, Prolactina, Fosfatasa Ácida Prostática, Anticuerpo de Proteinasa 3 cANCA, Resistina,

Virus Respiratorio Sincitial, Anticuerpo P Ribosómico, Anticuerpo RNP, Rubeola, Anticuerpo Scl 70, SGOT, Anticuerpo Smith, Sortilina, sRAGE, Estreptolisina O SLO, TECK, Trombopoyetina, Anticuerpo Tiroglobulina, TIMP 1, TNF alfa, TRAIL R3, TSP 1, Anticuerpo de la Enfermedad Celiaca tTG (Transglutaminasa Tisular) , VEGF y Factor von Willebrand.

3. Un método de monitorización de la eficacia de una terapia anti-psicótica en un individuo que padece, se 35 sospecha que padece, o que está predispuesto a, un trastorno esquizofrénico, que comprende los pasos siguientes:

(a) medir el nivel de cada uno de los biomarcadores que se definen en la reivindicación 1 o la reivindicación 2 presentes en muestras tomadas en dos o más ocasiones del individuo; y

(b) comparar el nivel de cada uno de los biomarcadores en una muestra tomada del individuo con el nivel

presente en una muestra tomada del individuo antes del comienzo de una terapia, y/o una muestra tomada del 40 individuo en una etapa anterior de una terapia.

4. Un método según cualquier reivindicación anterior, que comprende detectar un cambio en la cantidad del biomarcador en muestras tomadas en dos o más ocasiones.

5. Un método según la reivindicación 1, en donde el control es un control normal y/o un control de trastorno psicótico.

6. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde el nivel de cada biomarcador se detecta por análisis de espectros NMR.

7. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde el o cada nivel se detecta por un método seleccionado de NMR, SELDI (-TOF) , MALDI (-TOF) , análisis 1-D basado en gel, análisis 2D basado en gel, espectrometría de masas (MS) y técnicas basadas en LC-MS.

8. Un método según cualquier reivindicación 1 a 6, en donde el o cada nivel se detecta por un método seleccionado de métodos enzimáticos directos o indirectos acoplados o no acoplados, técnicas electroquímicas, espectrofotométricas, fluorimétricas, luminométricas, espectrométricas, polarimétricas y cromatográficas, o un método inmunológico tal como ELISA.

9. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde el nivel de proteínas plasmáticas se detecta por 55 uno o más métodos seleccionados de absorbancia ultravioleta y un método colorimétrico.

10. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde el nivel de cada biomarcador se detecta utilizando un sensor o biosensor que comprende una o más enzimas, proteínas de fijación, receptoras o de transporte, anticuerpos, receptores sintéticos u otras moléculas de fijación selectivas para detección directa o indirecta de los biomarcadores, estando acoplada dicha detección a un transductor eléctrico, óptico, acústico,

magnético o térmico.

11. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde la muestra se selecciona de sangre entera, suero sanguíneo, plasma sanguíneo o un extracto o purificación del mismo, o dilución del mismo.

12. Un método según cualquier reivindicación anterior, que comprende cuantificar el nivel de cada biomarcador en una muestra ulterior tomada del individuo.

13. Un método según la reivindicación 12, en donde la muestra biológica adicional se selecciona de CSF, orina, saliva, u otro fluido corporal, o aliento, aliento condensado, o un extracto o purificación del mismo, o dilución del mismo.

14. Un método según cualquier reivindicación anterior, en donde el individuo es naíf frente al fármaco.

15. Uso de un kit para monitorización o diagnosis de un trastorno esquizofrénico según la reivindicación 1, que 15 comprende un biosensor capaz de detectar y/o cuantificar los biomarcadores como se definen en la reivindicación 1

o la reivindicación 2.