Método in vitro para diagnosticar y monitorizar carcinoma de células renales (RCC) usando MMP-7 como biomarcador humora para el RCC.

Método in vitro para diagnosticar o monitorizar carcinoma de células renales (RCC) en un paciente humanomediante la determinación,

en una muestra de un fluido corporal del paciente, de un biomarcador cuyo nivel esindicativo de la presencia de RCC, y la asociación del nivel del biomarcador medido a la presencia de RCC, endonde el biomarcador es la metaloproteinasa de matriz 7 (MMP-7) peptídica que contiene metal y/o su forma depro-enzima (pro-MMP-7), y se determina en una muestra de un fluido corporal seleccionado de entre suero,plasma y sangre.

Método in vitro para diagnosticar y monitorizar carcinoma de células renales (RCC) usando MMP-7 como biomarcador humoral para el RCC

1. Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a un método in vitro altamente sensible y específico, para el diagnóstico de carcinoma de células renales (RCC) basándose en el nuevo hallazgo de que una metaloproteinasa seleccionada, a saber MMP-7, y/o su precursor fisiológico, la pro-MMP-7, son elevadas en los fluidos corporales, especialmente el suero o plasma, de pacientes con RCC. La presente invención se refiere también a un método específico de ensayo con ligandos para la detección de MMP-7 en una muestra de fluido corporal, es decir, al uso de la MMP-7 como biomarcador humoral para el RCC.

En el contexto de la presente solicitud, los términos como “diagnosis” o “diagnóstico”, a no ser que se defina de otra manera más detalladamente o en un sentido más restrictivo, se usan habitualmente como términos genéricos destinados a cubrir no solamente la diagnosis en el sentido restrictivo de detección e identificación de una enfermedad o condición, sino también la monitorización del curso de una enfermedad ya diagnosticada, incluyendo la terapia que acompaña a la valoración del éxito de medidas terapéuticas, y el pronóstico para el curso esperado de una enfermedad y la supervivencia de un paciente.

La expresión “biomarcador humoral” se usa para describir biomarcadores, o una inmunorreactividad asociada a dichos biomarcadores, que se pueden determinar en fluidos corporales, especialmente en la circulación, por oposición a biomarcadores tisulares que requieren material de tejido, obtenibles habitualmente solo mediante biopsia o punción, para su determinación.

2. Antecedentes de la invención [0004] El carcinoma de células renales (RCC) es el tercer tumor maligno más común del tracto urinario después del cáncer de próstata y de vejiga. Es un cáncer que resulta particularmente difícil de diagnosticar. De hecho, los pacientes con RCC con frecuencia tienen síntomas no específicos o se encuentran completamente asintomáticos hasta que se alcanza un estado relativamente avanzado. Consecuentemente, en el momento del diagnóstico, entre el 15 y el 25 % de pacientes con cáncer de riñón ya presentan RCC metastásico. Una vez que la enfermedad metastásica se desarrolla, el pronóstico para la supervivencia a largo plazo es malo.

En la actualidad, ocurre que normalmente el RCC se detecta mediante ecografía abdominal (US) y tomografía computerizada (CT) . En ocasiones, el mismo es sugerido por una gammagrafía isotópica ósea o de perfusión renal. No obstante, estas técnicas consumen mucho tiempo y resultan caras.

Actualmente se están llevando a cabo esfuerzos por caracterizar el RCC usando técnicas biológicas moleculares, citogenéticas, inmunohistoquímicas así como basadas en proteomas. En este contexto, se han evaluado muchos marcadores en relación con su uso potencial como factores de diagnóstico o pronóstico. No obstante, hasta ahora ninguno de ellos se ha validado en ensayos definitivos. El estado actual de la cuestión se puede resumir de la manera siguiente:

La interleucina 6 y su receptor podrían jugar un papel en la proliferación tumoral así como en ciertos signos sintomáticos asociados al cáncer renal metastásico (Blay JY et al., Cancer Res. (1992) 52, 3317-22) .

El FGF (Factor de Crecimiento Fibroblástico) , un factor angiogénico, puede servir como marcador potencial de pronóstico en relación con la progresión de la enfermedad (Rak JW et al., Anticancer Drugs, (1995) 6, 3-18) .

Se ha informado del inhibidor del activador del plasminógeno 1, un inhibidor específico de la uroquinasa, como factor pronóstico en la predicción de una recaída temprana del carcinoma de células renales. Se pueden discriminar grupos de riesgo alto y bajo en relación con la supervivencia sin enfermedad, por medio del contenido de antígeno del inhibidor del activador del plasminógeno 1 en el tejido tumoral (Hofmann R et al, J. Urol. (1996) 155, 858-62) .

Estudios recientes han descrito que la expresión de la cadherina E, que juega un papel principal en la adhesión célula-célula del epitelio normal, se reduce en el cáncer renal. Su índice puede estar en correlación con la agresividad del tumor (Shimazui T, Cancer Res. (1996) 56, 3234-7) .

el documento WO 02/082076 se refiere a la identificación de marcadores tumorales que son inmunogénicos en pacientes con RCC. Los autores dieron a conocer que estas proteínas se presentan en la superficie de la célula tumoral y, por lo tanto, no son circulantes. Los autores describen un inmunoensayo para detectar la presencia de anticuerpos circulantes específicos de estas proteínas marcadoras de tumor en el suero de un individuo. Por lo tanto, el

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inmunoensayo no se basa en la detección directa de marcadores de RCC en la circulación sino en la detección indirecta de autoanticuerpos (circulantes) preparados en relación con proteínas marcadoras de tumor RCC presentes en el tejido de los pacientes. No se mencionan metaloproteinasas de matriz o anticuerpos contra metaloproteinasas de matriz.

Sigue existiendo la necesidad de marcadores tumorales adicionales para la detección y el seguimiento de carcinoma de células renales, especialmente de marcadores de tumores humorales que se pueden detectar en muestras de sangre y muestras de suero o plasma respectivamente, y que, por lo tanto, se pueden incluir en la lista de biomarcadores determinados en las revisiones médicas rutinarias de los pacientes. Si fuera posible diagnosticar precozmente tumores renales, esto tendría un impacto muy alto en la mejora del devenir del RCC. La disponibilidad de un ensayo diagnóstico eficaz posibilitaría el cribado rutinario de poblaciones de riesgo especialmente alto (es decir, pacientes con Von Hippel-Lindau, en hemodiálisis, transplantados o inmunodeprimidos (N.J. Vogelzang, (1998) The Lancet 352, 1691-1696) ) y la detección de un tumor asintomático. Una prueba con marcadores humorales sensibles de carcinoma de células renales también tendría un valor elevado para la detección de la recidiva tumoral en pacientes con carcinoma de células renales después de una nefrectomía total o parcial. Un marcador de este tipo permitirá completar la evaluación de la extensión de la enfermedad. El mismo puede ayudar a limitar el uso de revisiones invasivas y adaptar la terapéutica antes. Dicho marcadores humoral facilitará la monitorización de tumores durante el tratamiento y permitirá una mejor predicción de respuestas terapéuticas y de pronósticos.

3. Resumen de la invención [0012] Para lograr estos fines, y otros, es un objetivo de la presente invención proporcionar un método in vitro para el diagnóstico de RCC sobre la base de un biomarcador humoral medible directamente en fluidos corporales de pacientes, más especialmente sangre, suero y plasma.

Basándose en las determinaciones y pruebas clínicas descritas en la presente, se proporciona, según la presente invención, tal como se caracteriza en la reivindicación 1, un método in vitro para diagnosticar o monitorizar carcinoma de células renales (RCC) en un paciente humano mediante la determinación, en una muestra de un fluido corporal del paciente, de un biomarcador cuyo nivel es indicativo de la presencia de RCC, y la asociación del nivel del biomarcador medido a la presencia de RCC, en donde el biomarcador es la metaloproteinasa de matriz 7 (MMP-7) peptídica que contiene metal y/o su forma de pro-enzima (pro-MMP-7) , y se determina en una muestra de un fluido corporal seleccionado de entre suero, plasma y sangre.

En las reivindicaciones 2 a 4 se exponen reivindicaciones preferidas de dicho método basado en la determinación de la MMP-7 como biomarcador de RCC.

En dichas reivindicaciones, el término “nivel” significa cantidad o concentración la cual se puede proporcionar en números exactos de masa por volumen, aunque también comunidades arbitrarias definidas por la calibración del ensayo usado para la determinación.

La MMP-7 y la pro-MMP-7 son biomoléculas que contienen metal, peptídicas, de estructuras y secuencias de aminoácidos conocidas. La MMP-7 presenta actividad enzimática y pertenece a un grupo de moléculas relacionadas funcional y estructuralmente que se denominan “metaloproteinasas de matriz” las cuales, además de las denominaciones triviales, se caracterizan por abreviaturas sistemáticas que constan de las letras MMP y un número (es decir, MMP-xx) . En humanos, se han identificado 16 miembros de esta familia (Kleiner et al., (1999) Cancer Chemother... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para diagnosticar o monitorizar carcinoma de células renales (RCC) en un paciente humano mediante la determinación, en una muestra de un fluido corporal del paciente, de un biomarcador cuyo nivel es indicativo de la presencia de RCC, y la asociación del nivel del biomarcador medido a la presencia de RCC, en donde el biomarcador es la metaloproteinasa de matriz 7 (MMP-7) peptídica que contiene metal y/o su forma de pro-enzima (pro-MMP-7) , y se determina en una muestra de un fluido corporal seleccionado de entre suero, plasma y sangre.

2. Método según la reivindicación 1, que se lleva a cabo como método para monitorizar la evolución del RCC en un paciente con RCC, comprendiendo la medición de los niveles de MMP-7 y/o pro-MMP-7 en intervalos de tiempo consecutivos seleccionados, en donde una variación de los niveles medidos de MMP-7 y/o pro-MMP-7 en el tiempo es indicativa de la evolución del RCC.

3. Método según la reivindicación 1, que se lleva a cabo como método para medir la eficacia de un tratamiento de RCC, que comprende la medición de los niveles de MMP-7 y/o pro-MMP-7 en intervalos de tiempo consecutivos seleccionados, en donde una reducción de los niveles medidos de MMP-7 y/o pro-MMP-7 entre las mediciones es indicativa de la eficacia del tratamiento.

4. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que se mide la MMP-7 y/o la pro-MMP-7 usando técnicas de ensayo con ligandos específicos.

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