Herpesvirus de pavo vectorial recombinante que contiene genes de la influencia aviar.

Un herpesvirus de pavo recombinante que comprende un gen de la hemaglutinina del virus de la influenza aviar yel promotor temprano inmediato de citomegalovirus,

en donde dicho gen de la hemaglutinina está bajo el controlde dicho promotor.

Herpesvirus de pavo vectorial recombinante que contiene genes de la influenza aviar.

Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención La presente invención se refiere en general a vacunas aviares contra la influenza aviar (AI) . Más específicamente, la presente invención proporciona un herpesvirus de pavo recombinante modificado por la presencia del ADNc que codifica la proteína hemaglutinina (HA) del virus de la influenza aviar bajo un promotor.

2. Descripción de la técnica relacionada La influenza aviar es causada por los virus de la influenza aviar que se clasifican en la familia Orthomyxoviridae, género Influenzavirus A. El genoma del virus de la influenza aviar consta de ocho segmentos de ARN de cadena sencilla, de sentido negativo. El genoma viral codifica diez proteínas, de las cuales ocho proteínas son proteínas estructurales, incluyendo la HA y la neuraminidasa (NA) , y dos proteínas no son estructurales. Los virus de influenza A se dividen en subtipos sobre la base de la antigenicidad de las proteínas HA y NA. Hay 16 antígenos HA y nueve antígenos NA reconocidos. Se considera que HA es el principal antígeno que puede inducir anticuerpos protectores en las aves.

Los virus de influenza A de aves de corral se clasifican en dos patotipos basados en su patogenicidad: virus de influenza aviar de alta patogenicidad (AIAP) y virus de influenza aviar de baja patogenicidad (AIBP) . La mayoría de los virus de influenza aviar son de baja virulencia, pero algunos virus de los subtipos H5 y H7 puede causar enfermedad sistémica grave que da lugar a una elevada mortalidad. Aunque sólo unos pocos H5 y H7 de los virus de la influenza aviar son de alta virulencia, todos los virus H5 y H7 son identificados como virus de la influenza aviar notificables por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) , debido al riesgo de que virus poco virulentos aumenten su virulencia por mutación.

Desde finales de 1990, ha habido un aumento significativo en el número de brotes de AI y en el número de aves que participan en dichos brotes (I. Capua et al., 2004, Avian Pathology, 33: 393-404) . El ejemplo más notable es una serie de brotes de AIAP H5N1 en China y Asia Sur-Oriental, que ahora se ha extendido a otras partes delmundo como Europa, Oriente Medio y África. Los brotes han costado tantas como 160 vidas humanas en más de 10 países desde 2003, aunque aún no se ha confirmado la transmisión aparente de ser humano a ser humano. Estos brotes recientes han causado enormes pérdidas económicas a la industria avícola y han elevado la preocupación pública por temor a una posible pandemia humana.

La vacunación contra la AI no se había realizado extensamente hasta hace poco debido a que el llamado procedimiento de "sacrificio sanitario" ha sido la opción principal. En el procedimiento de "sacrificio sanitario", todos los pollos de bandadas infectadas con AI son eliminados selectivamente. La mayoría de los brotes de AI fueron erradicados o controlados mediante el "sacrificio sanitario" en el pasado. Sin embargo, en los últimos brotes de AI, especialmente en los brotes de H5N1, ha habido situaciones en las que la eliminación selectiva masiva no era práctica ni viable debido a los costes y pérdidas económicas intolerables asociados con la eliminación selectiva, la amplia presencia de los llamados pollos de corral, etc. En esas situaciones, la vacunación ha sido considerada una herramienta adecuada y de gran alcance para apoyar los programas de erradicación de la AI o de control de la AI ya que se ha demostrado que la vacunación protege las aves contra los signos clínicos y la muerte y reduce la diseminación del virus en las aves vacunadas, lo que reduce la transmisión del virus (D.E. Swayne., 2003, Developments in Biologicals, 114: 201-212) . Con el fin de utilizar las vacunas en los programas de erradicación de la AI o en los programas de control de la AI, es muy importante para el comercio y la vigilancia que las aves vacunadas puedan ser diferenciadas de las infectadas con el virus de campo. De hecho, la exposición de campo en aves vacunadas debe ser detectada en pruebas serológicas sencillas. De lo contrario, el virus de campo puede circular en las aves vacunadas sin ser detectado. También es importante que las pruebas de vacunación puedan detectarse mediante análisis sencillos para confirmar que la mayoría o todas las aves en las bandadas vacunadas están adecuadamente vacunadas.

Las vacunas comerciales disponibles en la actualidad son antígenos de AI completos inactivados con un coadyuvante oleoso y una vacuna recombinante vectorizada con el virus de la viruela aviar. Aunque se ha demostrado que ambas vacunas son eficaces, requieren una vacunación parenteral de trabajo intensivo y costoso que implica el manejo de cada ave manualmente. Mientras que las vacunas para AI inactivadas se han utilizado en el denominado programa DIVA ("Diferenciación de animales infectados de vacunados") , no se han desarrollado ensayos asequibles comercialmente para la aplicación en masa. Se ha demostrado que los pollos previamente inmunizados con el virus de la viruela aviar, ya sea por exposición de campo o por vacunación con vacunas de la viruela aviar convencionales no desarrollarían inmunidad protectora consistente contra la AI después de ser vacunados con la vacuna de AI recombinante vectorizada con el virus de la viruela aviar (D.E. Swayne et al., 2000, Avian Diseases, 44: 132-137) . La vacuna de AI recombinante vectorizada con el virus de la viruela aviar no ha logrado provocar una respuesta serológica detectable por medio del ensayo de inhibición de la hemaglutinación (HI) de modo sistemático (D.E. Swayne et al., 1997, Avian Diseases, 41: 910-922) . Por lo tanto, es deseable para la industria de las aves de corral el desarrollo de vacunas que sean más fáciles de administrar y que puedan ser fácilmente diferenciadas de la infección por virus de campo.

La vacuna de AI recombinante vectorizada con el virus de la viruela aviar comercial contiene el gen HA del virus AI A/turkey/Ireland/1378/83 (H5N8) (J.R. Taylor et al., 1988, Vaccine, 6: 504-508) . Se han desarrollado otras varias vacunas recombinantes vectorizadas con el virus de la viruela aviar experimentales y se ha demostrado que son eficaces contra la sensibilización con virus AI en condiciones experimentales. Los genes del virus de la influenza aviar contenidos en vacunas recombinantes vectorizadas con viruela aviar incluyen el gen HA de A/Chicken/Scotland/59 (H5N1) (C.W. Beard et al., 1991, Avian Diseases, 35: 356-359) y los genes HA y NA de A/Goose/Guangdond/3/96 (H5N1) (C. Qiao et al., 2003, Avian Pathol., 32: 25-31) . M. Mingxiao et al. fusionaron los genes HA de subtipo H5N1 y de subtipo H7N1 para formar un único marco abierto y los insertaron en un virus de la viruela aviar recombinante junto con Interleuquina 18 de pollo (M. Mingxiao et al., 2006, Vaccine, 24: 4304-4311) . Se ha observado una amplia protección cruzada entre los subtipos H5 del virus AI. Se ha demostrado que la vacuna de AI recombinante vectorizada con virus de la viruela aviar y las vacunas de AI completo inactivado contra los subtipos H5 de la influenza aviar protegen los pollos frente a la sensibilización con diversos de virus AI de subtipo H5, de lo que se deduce que las similitudes de aminoácidos de HA con las vacunas son tan bajas como 87% (D.E. Swayne et al., 2000, Veterinar y Microbiol, 74: 165-172) .

Las vacunas de nueva generación en desarrollo incluyen vacunas con virus de la enfermedad de Newcastle recombinantes (D.E. Swayne et al., 2003, Avian Diseases, 47: 1047-1050; J. Veits et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 103:8197-8202; M. Park et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 103:8203-8208; y J. Ge et al., 2007, J. Virol. 81: 150-158) , vacunas del virus de la laringotraqueitis infecciosa recombinante (D. Luschow et al., 2001, Vaccine 19: 4249-4259 y J. Veits et al., 2003, J. Gen. Virol. 84: 3343-3352) , una vacuna de adenovirus recombinante (W. Gao et al., 2006, J. Virol. 80: 1959-1964; documento WO 2007/022151) , vacunas de subunidades expresadas en baculovirus (J. Crawford et al., 1999, Vaccine, 17:2265-2274 y D.E. Swayne et al., 2001, Avian Diseases, 45: 355-365) y vacunas de ADN (Patente de los Estados Unidos Núm. 5.916.879 y M. Cherbonnel et al., 2003, Avian Diseases, 47: 1181-1186) . Aunque las vacunas de virus de la enfermedad de Newcastle recombinantes, las vacunas de virus de la laringotraqueitis infecciosa recombinantes, y la vacuna de adenovirus recombinante fueron capaces de conferir protección de parcial a semicompleta frente a la sensibilización con AI en pollos libres de patógenos específicos, su eficacia en pollos con anticuerpos maternos contra los virus vectores o AI, o en pollos con infección previa o vacunación con virus... [Seguir leyendo]

1. Un herpesvirus de pavo recombinante que comprende un gen de la hemaglutinina del virus de la influenza aviar y el promotor temprano inmediato de citomegalovirus, en donde dicho gen de la hemaglutinina está bajo el control de dicho promotor.

2. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1, en donde dicho gen de la hemaglutinina y dicho promotor están presentes en una región no esencial del genoma del herpesvirus de pavo.

3. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 2, en donde dicha región no esencial es entre UL45 y UL46 del genoma del herpesvirus de pavo.

4. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1, en donde dicho virus de la influenza aviar es el subtipo H5.

5. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1, en donde dicho virus de la influenza aviar es la cepa A/Turkey/Wisconsin/68 (H5N9) .

6. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1, en donde una secuencia de nucleótidos de dicho gen de la hemaglutinina se muestra en SEQ ID NO: 1.

7. Una vacuna que comprende un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1.

8. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 7, capaz de inducir títulos de inhibición de la hemaglutinación.

9. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende adicionalmente un coadyuvante y/o un tampón.

10. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, en donde los pollos desarrollan títulos de inhibición de la hemaglutinación de más de 50 (media geométrica del título) durante cinco semanas después de la vacunación.

11. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, en donde dichos títulos de inhibición de la hemaglutinación son las diluciones más altas de sueros que muestran inhibición de la hemaglutinación cuando se utilizan cuatro unidades de hemaglutinación de un antígeno homólogo del virus de influenza aviar inactivado.

12. Una vacuna que comprende el herpesvirus de pavo recombinante de acuerdo con la reivindicación 1 para la vacunación contra la influenza aviar.

13. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 12 para la vacunación contra la influenza aviar de volatería.

14. Una vacuna combinada que comprende el herpesvirus de pavo recombinante de acuerdo con la reivindicación 1 que tiene adicionalmente otros virus recombinantes y/o no recombinantes.

15. Una vacuna que comprende el herpesvirus de pavo recombinante de acuerdo con la reivindicación 1, que puede ser monovalente o bivalente.

16. Un vector de homología para producir un herpesvirus de pavo recombinante de la reivindicación 1, que comprende el gen de la hemaglutinina de A/Turkey/Wisconsin/68 (H5N9) y el promotor de CMV.

17. Un herpesvirus de pavo recombinante como en la reivindicación 1, capaz de inducir una respuesta serológica que es detectada mediante el ensayo de inhibición de la hemaglutinación, en comparación con los kits de ELISA de diagnóstico.