Formulaciones de anticuerpos anti-hepatitis B (HBV) estabilizadas.

Una formulación de anticuerpos que comprende:

a) al menos 10 mg/ml de un anticuerpo AB17,

que puede obtenerse a partir del hibridoma depositado en el ECACCcon el nº de registro 96052169, o AB19, que puede obtenerse a partir del hibridoma depositado en el ECACC con elnº de registro 96052168;

b) alanina a una concentración de 85 mM a 95 mM, o 90 mM;

c) citrato de sodio a una concentración de 10 mM a 30 mM, o 20 mM;

d) Tween 80 a una concentración del 0,05 % al 0,5 %, o al 0,1 %; y

e) trehalosa a una concentración del 1 % al 10 %, o al 3 %;

en un vehículo acuoso.

Formulaciones de anticuerpos anti-hepatitis B (HBV) estabilizadas Campo de la invención La presente invención se refiere una formulación líquida de anticuerpos monoclonales humanos anti-HBsAg para el tratamiento o la prevención de una infección de hepatitis B.

Antecedentes de la invención La infección por el virus de la hepatitis B (HBV) es un problema mundial de salud pública, con una tasa de mortalidad que lo coloca entre los diez principales organismos infecciosos letales. La Organización Mundial de la Salud calcula que 400 millones de personas son portadores del virus a nivel mundial. Se ha calculado que la enfermedad de HBV aguda conduce a 600.000 muertes anuales; las complicaciones de la enfermedad crónica, que incluyen cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular inducidos por HBV, son responsables de aproximadamente 400.000 muertes anuales (El-Serag H.B. y Mason A.C., N. Engl. J. Med., 1999, 340 (10) :745-750) .

Muchos pacientes que están infectados por el virus de la hepatitis B son incapaces de acabar con la infección y desarrollan HBV crónica, que puede conducir al deterioro de la función hepática, que incluye cirrosis y descompensación hepática y la posterior necesidad de transplante. Aunque el hígado infectado se retira antes del transplante, siguen quedando algunos virus en la circulación en el suero, y se cree que existen otros depósitos en otros compatimentos corporales. Por tanto, estos pacientes presentan un alto riesgo de reinfección por HBV de su hígado transplantado.

La prevención de la infección por HBV puede lograrse con una inmunización activa o pasiva. La inmunización activa con vacunas de HBV recombinante puede evitar una infección por HBV si se administra antes de la exposición. Estas vacunas, fabricadas a partir de subunidades víricas no infecciosas, han demostrados ser seguras y eficaces y confieren una inmunidad a largo plazo.

La inmunización pasiva con anticuerpos específicos de la hepatitis B, administrados poco tiempo después de la exposición, puede disminuir la incidencia o la gravedad de la enfermedad. La inmunoglobulina de hepatitis B (HBIG) es una preparación policlonal procedente del plasma de anticuerpos contra el antígeno de la superficie de la hepatitis B (anti-HBs) . Los anticuerpos se unen al antígeno de la superficie de la hepatitis que se encuentra sobre la superficie del virus y lo neutralizan, evitando así la infección.

La inmunización pasiva con HBIG es más eficaz si se administra cuando las titulaciones víricas son bajas y puede lograrse un exceso de anticuerpo. Por esta razón, HBIG ha sido eficaz para prevenir nuevas infecciones. También parece ser parcialmente eficaz cuando se emplea para evitar la reinfección después de un transplante de hígado, cuando la carga vírica disminuye por la retirada del órgano infectado. Ha resultado ser especialmente eficaz en pacientes con bajas titulaciones víricas antes de la cirugía.

En la actualidad existen tres productos antivíricos disponibles para el tratamiento de la hepatitis B crónica: el interferón 2b (Intron® A, Schering) , la lamivudina (Epivir HBV®, GlaxoSmithKline) y/o el adefovir dipivoxilo (Hepsera®, Gilead Sciences) . Sin embargo, no existe ninguna terapia para curar las infecciónes por HBV crónicas en todos los pacientes. La HBIG no ha resultado eficaz para tratar pacientes con hepatitis B crónica en que se producen niveles persistentes de virus, y no es posible producir un exceso de anticuerpos sin administraciones frecuentes del anticuerpo. La enfermedad hepática de etapa final relacionada con la hepatitis vírica crónica es la principal indicación para el transplante de hígado ortotópico (OLT) a nivel mundial. El término “ortotópico” significa que el órgano enfermo se retira y el nuevo aloinjerto se implanta en la posición normal o habitual en el cuadrante superior derecho del abdomen. El OLT para la cirrosis y la insuficiencia de órganos debidas a infecciones por HBV supone del 5 % al 10 % de todos los transplantes en adultos.

La protección del hígado transplantado frente a la infección recurrente por HBV es fundamental para conservar la función del injerto. Probablemente sea necesario un tratamiento profiláctico para el HBV durante toda la vida, puesto que el virus permanece en varios otros compartimentos corporales (bazo, nódulos linfáticos, riñones, piel, tracto gastrointestinal, gónadas, ganglios nerviosos, y cerebro) después de la retirada del hígado infectado. La infección por hepatitis B del hígado vuelve a aparecer con rapidez cuando el paciente está inmunodeprimido después del transplante, lo cual da como resultado la enfermedad progresiva, un fallo del injerto, y la muerte. Los pacientes con señales de replicación activa del HBV (HBeAg y/o altos niveles de ADN de HBV) en el momento del transplante presentan un mayor riesgo. La recurrencia de la enfermedad aparece incluso con más rapidez después de repetir el transplante (Rosen H.R. y Martin P., Infectious Disease Clinics of North America, septiembre 2002, 14 (3) :761-786) .

En conjunto, el uso de anticuerpos policlonales derivados del plasma es limitado porque estas preparaciones tienen actividad variable, disponibilidad limitada, y representan un riesgo potencial para la transmisión de agentes infecciosos.

Por el contrario, los anticuerpos monoclonales (mAb) pueden producirse de forma constante y no comportan los riesgos infecciosos asociados con los productos derivados del plasma.

En estudios previos, se han desarrollado dos anticuerpos monoclonales totalmente humanos dirigidos contra diferentes epitopos del antígeno de la superficie de la hepatitis B (HBsAg) (documentos WO/1997/047654 y WO/1199/047653) . Una única administración de una mezcla de estos anticuerpos en chimpancés portadores con HBV crónica produjo una reducción inmediata en los niveles de HBsAg, seguido de una recurrencia hasta los niveles iniciales en unos pocos días (Eren et al., 2000, Hepatology, 32, 588-596) .

Se realizó un estudio clínico de fase 1 usando una mezcla de estos anticuerpos monoclonales (denominada HBV-

ABHTL

, y ahora HEPEX BT) . En la parte A del estudio, los pacientes recibieron una única infusión intravenosa (IV) de anticuerpos, mientras que en la parte B los pacientes recibieron 4 infusiones semanales. La mezcla de anticuerpos resultó eficaz para reducir los niveles de HBsAg y de ADN de HBV.

HEPEX BT para un uso IV se preparó inicialmente en forma de dos formulaciones líquidas distintas para cada uno de los anticuerpos (17 y 19) en disolución salina tamponada con fosfato (fosfato de sodio 65 mM, cloruro de sodio 80 mM, a pH 7, 0) . Los dos mAb se mezclaron antes de la administración en una proporción de aproximadamente 1:1 de unidades internacionales.

Es necesario desarrollar una formulación líquida de alta dosificación de HEPEX B que sea adecuada para la administración subcutánea y también intramuscular. Las preparaciones de anticuerpos líquidas anteriores tienen una caducidad baja y se puede perder la actividad biológica de los anticuerpos como resultado de inestabilidades químicas y físicas durante el almacenamiento. Así, es necesaria una formulación líquida estable para un anticuerpo anti-HBV que sea eficaz para prevenir la infección por HBV.

Sumario de la invención La presente invención se basa, en parte, en el desarrollo de formulaciones líquidas de alta concentración de anticuerpos, o de sus fragmentos, que se unen de modo específico a un antígeno de HBV, mostrando dicha formulación, en ausencia de sales inorgánicas pero en presencia de aminoácidos, un carbohidrato y un tensioactivo, una estabilidad y unos niveles de bajos a indetectables de fragmentación y/o agregación de los anticuerpos, y muy poca o ninguna pérdida de las actividades biológicas del anticuerpo o del fragmento de anticuerpo durante la fabricación, la preparación, el transporte, y el almacenamiento. Las formulaciones líquidas de la presente invención facilitan la administración de anticuerpos, o de sus fragmentos, que se unen de modo específico a un antígeno de HBV para la prevención, el tratamiento, la gestión y/o la mejora de una infección por HBV, o de uno o más de sus síntomas. En particular, las formulaciones líquidas de la presente invención permiten administrar con rapidez una dosificación estéril de anticuerpos, o de sus fragmentos, que se unen de modo específico a un antígeno de HBV, sin tener que mezclar de forma precisa y aséptica los dos anticuerpos separados (17 y 19) , o sus fragmentos, antes de la administración, según era necesario en la forma de dosificación previamente usada.

En la presente se describen formulaciones líquidas de anticuerpos anti-HBV, o de sus fragmentos,... [Seguir leyendo]

1. Una formulación de anticuerpos que comprende: a) al menos 10 mg/ml de un anticuerpo AB17, que puede obtenerse a partir del hibridoma depositado en el ECACC

con el nº de registro 96052169, o AB19, que puede obtenerse a partir del hibridoma depositado en el ECACC con el nº de registro 96052168; b) alanina a una concentración de 85 mM a 95 mM, o 90 mM; c) citrato de sodio a una concentración de 10 mM a 30 mM, o 20 mM; d) Tween 80 a una concentración del 0, 05 % al 0, 5 %, o al 0, 1 %; y e) trehalosa a una concentración del 1 % al 10 %, o al 3 %; en un vehículo acuoso. 2. La formulación de la reivindicación 1, en la que el vehículo acuoso es agua destilada. 3. La formulación de la reivindicación 1, en la que la formulación es estéril. 4. La formulación de la reivindicación 1, en la que la formulación es homogénea. 5. La formulación de la reivindicación 1, en la que la formulación tiene un pH en el intervalo de 5, 0 a 7, 5. 6. La formulación de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo está a una concentración de al menos: a) 20 mg/ml, b) 40 mg/ml, c) 80 mg/ml, o d) 100 mg/ml. 7. La formulación de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo es: a) estable a temperatura ambiente durante al menos 6 meses, según se determina mediante cromatografía de

exclusión molecular de alto rendimiento (HPSEC) , o b) estable a 4 ºC durante al menos 2 años, según se determina mediante HPSEC. 8. La formulación de la reivindicación 1, en la que menos del: a) 10 % del anticuerpo forma un agregado, según se mide mediante HPSEC, o b) 5 % del anticuerpo forma un agregado, según se mide mediante HPSEC. 9. Una forma de dosificación unitaria farmacéutica adecuada para la administración parenteral a un ser humano, que

comprende una formulación de anticuerpos de la reivindicación 1 en un recipiente farmacéuticamente aceptable.

10. La forma de dosificación unitaria farmacéutica de la reivindicación 9, en la que dicho anticuerpo tiene una

concentración de:

a) 10 mg/ml a 100 mg/ml en un volumen de 1 ml a 20 ml, o

b) 80 mg/ml en un volumen de 1 ml.

11. La forma de dosificación unitaria farmacéutica de la reivindicación 9, en la que dicha formulación de anticuerpos

es adecuada para: a) la administracón subcutánea, b) la administración intravenosa, o c) la administración intramuscular. 12. Un recipiente sellado que comprende una formulación de la reivindicación 1.

13. Uso de la formulación de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para su uso en un procedimiento para el tratamiento de infecciones por HBV en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento la administración de una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de la formulación de la reivindicación 1.

14. Uso de la formulación de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para su uso en un procedimiento para reducir la infección por HBV de un hígado transplantado, que comprende administrar a un individuo que lo necesita la formulación de la reivindicación 1.

15. Uso de la formulación de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para su uso en un procedimiento para tratar a un individuo nacido de una madre infectada por HBV, que comprende administrar a dicho individuo la formulación de la reivindicación 1.

16. Uso de la formulación de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para su uso en un procedimiento para tratar a un trabajador sanitario expuesto a HBV, que comprende administrar la formulación de la reivindicación 1 a dicho trabajador sanitario.

17. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 13-16, en el que la formulación se administra: a) por vía patenteral, b) por vía intramuscular, c) por vía intravenosa, o d) por vía subcutánea. 18. Una formulación que comprende: a) al menos 10 mg/ml de al menos dos anticuerpos que se unen de modo específico a un antígeno de HBV; b) alanina a una concentración de 85 mM a 95 mM, o 90 mM; c) citrato de sodio a una concentración de 10 mM a 30 mM, o 20 mM; d) Tween 80 a una concentración del 0, 05 % al 0, 5 %, o al 0, 1 %; y e) trehalosa a una concentración del 1 % al 10 %, o al 3 %; en un vehículo acuoso, en la que al menos uno de dichos anticuerpos es el anticuerpo AB17, que puede obtenerse a

partir del hibridoma depositado en el ECACC con el nº de registro 96052169, y al menos un segundo de dichos anticuerpos es el anticuerpo AB19, que puede obtenerse a partir del hibridoma depositado en el ECACC con el nº de registro 96052168.

19. Una formulación según la reivindicación 1 o la reivindicación 18, para su uso en: a) el tratamiento del HBV, b) la reducción de la infección por HBV en un hígado transplantado, c) el tratamiento de un individuo nacido de una madre infectada por HBV, o d) el tratamiento de un trabajador sanitario expuesto a HBV.