FIBRINÓGENO 3-NITROTIROSINADO COMO UN MARCADOR DIAGNÓSTICO DE ICTUS ISQUÉMICO Y USOS DEL MISMO.

Fibrinógeno 3-nitrotirosinado como un marcador diagnóstico de ictus isquémico y usos del mismo.

La presente invención se refiere a un método in vitro para diagnosticar un ictus isquémico en un paciente, basado en la determinación de la cantidad de fibrinógeno 3-nitrotirosinado y comparándola con valores asociados a un ictus isquémico y a valores control. Se refiere también a un método para decidir o recomendar el inicio de un tratamiento farmacológico en un paciente una vez que le ha sido diagnosticado un ictus isquémico.

Fibrinógeno 3-nitrotirosinado como un marcador diagnóstico de ictus isquémico y usos del mismo.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona métodos y marcadores para el diagnóstico de ictus isquémicos.

ESTADO DEL ARTE

Los ictus son una de las principales causas de muerte y discapacidad en el mundo y aún no hay un biomarcador rápido y preciso para el diagnóstico del ictus. Un ictus es una interrupción patológica del aporte de sangre en el cerebro que produce una pérdida de función (es) cerebral (es) . Un ictus se puede deber a una isquemia (ausencia de aporte de sangre) , causada por trombosis o embolismo, o debido a una hemorragia.

El llamado ictus isquémico representa aproximadamente el 75% del total de los ictus. Hay varios tipos de ictus isquémicos basados en el causa del proceso isquémico: (1) ictus aterotrombótico, cuando la interrupción del aporte de sangre es debido a un ateroma de cualquier parte del cuerpo; (2) ictus cardioembólico, cuando la obstrucción del fluido sanguíneo es debida a un émbolo móvil de origen cardíaco; (3) ictus lacunar, que es un tipo de ictus que resulta de la oclusión de las arterias penetrantes que proporcionan sangre a las estructuras profundas del cerebro; y finalmente (4) ictus indeterminado o ictus sin una explicación obvia.

Los efectos de un ictus isquémico dependen de qué parte del cerebro es dañada, y cuan severamente es dañada. Ello puede causar varios síntomas físicos, como por ejemplo debilidad repentina, pérdida de la sensibilidad, dificultad para hablar y dolor de cabeza entre otros. Pero algunas veces los ictus isquémicos pueden ser completamente indoloros. Por ello es muy importante reconocer los signos de alarma de los ictus y recibir atención médica inmediata cuando ocurren. Un diagnóstico tardío de un ictus isquémico resulta en daños sistémicos tales como hemiplejía, en otras palabras, se impide el movimiento normal de la mitad del cuerpo, hay incapacidad para andar, tragar o incluso para hablar. Un diagnóstico rápido y preciso de un ictus isquémico agudo ayudaría a disminuir la mortandad y a reducir los daños sistémicos asociados con su diagnóstico tardío.

En los procesos isquémicos, y, por lo tanto, en un ictus isquémico también, se produce óxido nítrico (NO) . El NO es una molécula con efectos pleiotrópicos en diferentes tejidos, pero su principal función sistémica es inducir vasodilatación. Después que ocurre un suceso isquémico hay un estallido en la producción de radicales libres tales como el anión superóxido (O2. ) . El NO se combina químicamente con el O2. produciendo el altamente reactivo anión peroxinitrito (ONOO-) . El ONOO- nitra proteínas, un proceso químicamente irreversible que consiste en la adición covalente de un grupo nitro (NO2) a los residuos de tirosina generando 3-nitrotirosina. Tal proceso es conocido como nitrotirosinación. Los efectos tóxicos del ONOO- se extienden a diferentes elementos celulares y también a proteínas que circulan en el plasma, especialmente al fibrinógeno. El fibrinógeno es la tercera proteína más abundante en el plasma siendo el 2-3% de las proteínas circulantes y es el responsable final de la coagulación sanguínea.

Vadseth y cols. "Pro-thrombotic state induced by post-translational modification of fibrinogen by reactive nitrogen species" J. Biol. Chem. (2004) 279:8820- 8826, cuantificaron los niveles circulantes de fibrinógeno nitrotirosinado en el plasma de pacientes con enfermedad de las arterias coronarias, lo cual es un proceso isquémico. Los autores propusieron una asociación entre el fibrinógeno 3-nitrotirosinado y un aumento en la incidencia de efectos adversos en la enfermedad de las arterias coronarias.

A pesar del conocimiento fisiológico mencionado sobre los procesos isquémicos, ningún avance ha sido hecho para desarrollar métodos más rápidos y precisos para el diagnóstico de ictus isquémicos agudos basados en este conocimiento. Un biomarcador para la detección de un ictus isquémico en fase aguda sería una herramienta extremadamente útil. Sin embargo, los biomarcadores propuestos ni son específicos o ni son suficientes para determinar la presencia de un infarto isquémico agudo (Hill y cols., "Diagnostic biomarkers for stroke: a stroke neurologist's perspective" Clinical Chemistr y (2005) 51 (11) : 2001-35 2002; Whiteley et al. "Blood biomarkers in the diagnosis of ischemic stroke. A systematic review" Stroke (2008) 39:2902-2909) .

Actualmente el diagnóstico de un ictus consiste en un examen físico y técnicas de imagen como tomografía computerizada por escáner (escáner o TAC) , angiograma, imagen por resonancia magnética (MRI) , tomografía computarizada por emisión de fotones individuales (SPECT) y tomografía computarizada por emisión de positrones (PET) . Un diagnóstico de ictus basado en TAC, SPECT, PET y MRI no se puede realizar de forma rápida, es decir a las pocas horas de ocurrir el ictus. El examen físico es rápido pero sólo puede detectar grandes ictus con signos neurológicos evidentes tales como parálisis. Además, cualquier tratamiento estará condicionado por los conocimientos y experiencia del médico que examine al paciente. La terapia trombolítica ha demostrado efectividad en el tratamiento del ictus isquémico agudo. En un ictus es fundamental restaurar el flujo sanguíneo del cerebro inmediatamente para prevenir daños tisulares, por lo que un diagnóstico rápido de ictus es crítico para la supervivencia del paciente y la minimización de los daños. Si se tratan los ictus isquémicos inmediatamente después de ocurrir, la mayoría de los pacientes podrían tener una recuperación total o al menos parcial. Preferiblemente el paciente debería ser tratado dentro de las primeras 24 horas después del ictus, preferiblemente debería ser dentro de las 3 primeras horas y más preferiblemente dentro de la primera hora.

En resumen, dado que el ictus ocurre rápidamente y requiere tratamiento inmediato, se requiere un rápido y preciso diagnóstico del ictus isquémico que permita proceder con el tratamiento apropiado. Esto fundamenta la necesidad de un test complementario (biomarcador) que proporcione información diagnóstica relevante y de mayor precisión que los exámenes clínicos rutinarios.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención incluye métodos útiles en el diagnóstico y tratamiento del ictus, particularmente el ictus isquémico.

La presente invención responde a la necesidad desde hace mucho tiempo de un diagnóstico rápido y preciso del ictus isquémico usando un biomarcador.

La presente invención está basada en el inesperado hallazgo de los inventores de que el fibrinógeno plasmático está significativamente 3-nitrotirosinado (hasta 50 veces por encima de los valores de los controles) hasta 24 horas después de ocurrir un ictus isquémico.

La presente invención, por lo tanto, proporciona un método nuevo, simple y económico para el diagnóstico del ictus isquémico que comprende la cuantificación del fibrinógeno 3-nitrotirosinado en un paciente. En resumen, esta es la primera vez que se divulga un método rápido y preciso para la detección de un ictus isquémico.

La nitrotirosinación del fibrinógeno en pacientes con enfermedad de las arterias coronarias fue divulgada por Vadseth y cols. Estos autores demuestran un aumento selectivo de los niveles circulantes de fibrinógeno nitrotirosinado (denominado fibrinógeno nitrado en Vadseth y cols.) en pacientes con enfermedad de las arterias coronarias. Así mismo, Vadseth y cols. muestran la relación entre los niveles de fibrinógeno nitrotirosinado y la enfermedad cardiaca.

En contra a lo propuesto por Vadseth y cols. y el documento US200904815, la presente invención se refiere a la determinación de los niveles de fibrinógeno 3-nitrotirosinado en una muestra tomada de un sujeto para el diagnóstico de un ictus isquémico.

Es sabido por el experto en la materia que el ictus isquémico y la enfermedad de las arterias coronarias son dos entidades clínicas completamente diferentes.

Durante el ictus isquémico, como resultado del propio episodio isquémico, hay una obstrucción de los vasos sanguíneos cerebrales. Debido al bloqueo en el flujo sanguíneo no sería esperable la distribución en la circulación sistémica de biomarcadores producidos en el ictus isquémico.

Sin embargo los inventores han encontrado que la distribución volémica de fibrinógeno 3-nitrotirosinado permite su detección inmediatamente después de un suceso isquémico y hasta las 24 horas, estando aumentada su concentración hasta 50 veces sobre el valor de los controles sanos. Los sorprendentes e inesperados altos niveles de fibrinógeno... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para el diagnóstico de un ictus isquémico en un paciente, que comprende medir la cantidad de

fibrinógeno 3-nitrotirosinado en el paciente. 2. El método de la reivindicación 1, que comprende además comparar el valor obtenido con el (los) valor (es) conocido (s) asociados con un ictus isquémico y/o el (los) valor (es) control (es) .

3. Método para decidir o recomendar si ha de iniciarse un tratamiento farmacológico de un paciente sospechoso de

sufrir un ictus isquémico cuyo método comprende: a) medir, in vitro, la cantidad de fibrinógeno 3-nitrotirosinado en el paciente, b) diagnosticar el ictus isquémico mediante la comparación del valor obtenido en el paso (a) con el (los) valor (es) conocido (s) asociados con un ictus isquémico y/o el (los) valor (es) control (es) , c) donde,

ca) si el paciente es diagnosticado de sufrir un ictus isquémico, entonces la iniciación del tratamiento es recomendado, y/o cb) si el paciente es diagnosticado de no sufrir un ictus isquémico, entonces evitar el tratamiento es recomendado.

opcionalmente en consideración del resultado de un examen del paciente por un neurólogo.

4. El método de la reivindicación 3, en donde el tratamiento farmacológico es seleccionado entre los siguientes trombolítico, anticoagulante y antioxidantes.

5. El método de la reivindicación 4, en donde el trombolítico usado es el activador tisular del plasminógeno recombinante. 6. El método de la reivindicación 4, en donde el anticoagulante usado es el ácido acetilsalicílico. 7. El método de la reivindicación 4, en donde el antioxidante usado es glutatión

reducido. 8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la muestra es plasma. 9. Uso del fibrinógeno 3-nitrotirosinado como un marcador de diagnóstico clínico de ictus isquémico. 10. Uso del fibrinógeno 3-nitrotirosinado como un marcador terapéutico. 11. El uso de la reivindicación 10, en donde el tratamiento terapéutico es seleccionado entre los siguientes

trombolítico, anticoagulantes antiplaquetarios y antioxidantes. 12. Uso de medios diagnósticos capaces de medir la cantidad de fibrinógeno 3-nitrotirosinado de un paciente en cualquiera de los métodos de las reivindicaciones 1 a 8.

ES 2 396 523 Al