Procedimiento y aparato para el análisis de fluidos corporales.

Procedimiento para el análisis de una muestra que contiene partículas,

que comprende:

determinar un primer conteo selectivo de un grupo seleccionado de partículas de la muestra;

tratamiento como mínimo de una parte de la muestra para alterar un subgrupo del grupo seleccionado de partículas:determinar un segundo conteo colectivo de cualquiera del grupo de partículas seleccionado en la parte tratada de lamuestra; y

restar el segundo conteo colectivo del primer conteo colectivo para determinar un conteo de diferenciación para elsubgrupo de partículas alterado por el tratamiento de la muestra,

caracterizado por

la determinación de efectos del tratamiento de la muestra sobre partículas del grupo seleccionado de partículasdistinto del subgrupo del grupo seleccionado de partículas; y por ajustar el segundo conteo colectivo paracompensar el efecto determinado de tratamiento de la muestra.

Procedimiento y aparato para el análisis de fluidos corporales SECTOR DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere de manera general a procedimientos y sistemas para el análisis de partículas contenidas en una muestra y más particularmente, para identificar y cuantificar las partículas de la muestra.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los procedimientos y aparatos para el proceso de imágenes de partículas en una muestra de fluidos son bien conocidos. Por ejemplo, los documentos Patente USA Nos. 4.338.024, 4.393.466, 4.667.335 y 4.612.614 describen aparatos para analizar partículas biológicas. Estos aparatos de análisis de partículas biológicas pueden determinar automáticamente, es decir, sin intervención humana, características tales como color, dimensiones, y brillo de las partículas en una muestra de fluido. Además, basándose en las características determinadas, estos aparatos pueden clasificar cada partícula en una de muchas clases y pueden calcular la concentración de cada tipo de partícula (es decir, clase de partícula) . Este proceso automático de análisis de muestras y determinación de concentración se designa como Auto-Particle Recognition (APR) (Reconocimiento Automático de Partículas) .

Los resultados de la clasificación y cálculo se pueden mostrar de la forma que se da a conocer en la Patente USA Nº. 5.822.447. Es decir, se toma una serie de imágenes ópticas de manera que cada imagen es una representación de una parte de la muestra. Preferentemente, las imágenes representan diferentes partes de la muestra. Una imagen está constituida por uno o varios “fragmentos de imágenes”, conteniendo cada fragmento como mínimo una imagen de una partícula. El reconocimiento de los segmentos se puede implementar de acuerdo con la ubicación de la solicitud de Patente USA 2004/0136593. Los segmentos son clasificados en una de una serie de clases basándose en las imágenes que contienen y las clases se caracterizan usualmente por una o varias características visualmente discernibles. En algunas realizaciones, si un segmento contiene más de una imagen de una partícula discernible, las imágenes de partículas se podrían clasificar separadamente. En otras realizaciones, se utiliza la imagen de la partícula más predominante para clasificar el segmento. Se puede utilizar tecnología de red neural en el proceso de clasificación automática, tal como se da a conocer en la publicación de solicitud de Patente USA 2004/0126008. Después de la clasificación, se determinan las concentraciones de cada clase de partículas.

Los segmentos extraídos de las imágenes pueden ser visualizados en una interfaz gráfica de usuario (por ejemplo, un monitor de ordenador) , preferentemente en disposición ordenada por clasificación. El número de partículas dentro de cada clase o cualquier parámetro derivado de las mismas (por ejemplo, porcentaje del número total de partículas) puede ser visualizado. El proceso APR determina la concentración (lo que de otro se designa como conteo, que es el número de partículas por unidad de volumen de la muestra) de cada tipo de partículas (es decir, clase de partículas) basándose en esta clasificación. Entonces, un operador puede revisar manualmente los resultados de la clasificación APR y corregir cualesquiera errores. Durante el proceso de revisión manual, el operador puede extraer una partícula mal clasificada de una clase y añadirla a otra.

Una aplicación para APR es el conteo de glóbulos rojos (RBC) y glóbulos blancos (WBC) (conocidos de otro modo como linfocitos) de una muestra de fluido vertebral. El problema es que para algunos sistemas de APR puede ser difícil discriminar con precisión y cuantificar los RBC y los WBC. Existe la necesidad de sistema y procedimiento para mejorar la clasificación de partículas.

El documento DE2052010 da a conocer un dispositivo para analizar lavados de fluidos corporales que contienen células. Las células cancerosas son destruidas utilizando ultrasonidos, y las células restantes son contadas utilizando un microscopio.

En el documento WO9221027 se da a conocer un procedimiento de cribado óptico y aparato para identificar y contar células que expresan características o propiedades seleccionadas.

El documento US4599307 da a conocer un procedimiento para identificar subpoblaciones de células de interés sin interferencia de otras células.

El documento US6699680 da a conocer un procedimiento para la determinación de una medición del número de plaquetas en una suspensión de células que contiene plaquetas.

En el documento US3586859 se da a conocer un procedimiento y aparato para determinar automáticamente el número de células muertas en un lote. Las células son contadas, a continuación se vuelven a contar después de que las células han sido sumergidas en un baño de calentamiento.

El documento US2002028517 da a conocer un procedimiento para determinar la activación de plaquetas utilizando conteo numérico de plaquetas antes de que una muestra de plaquetas ha sido activada y después de que las plaquetas activables son activadas con un agonista de activación de plaquetas.

En el documento US5264369 se prepara una muestra hematológica para clasificar y contar leucocitos con un citómetro de flujo.

En el documento WO02079752 se da a conocer la utilización de una combinación exclusiva de marcadores que identifican células anormales restando falsos positivos que de otro modo se generarían, por ejemplo, por células normalmente proliferantes y restos no celulares.

El documento US5822447 da a conocer un procedimiento y un aparato para analizar partículas en una muestra de fluido por distribución de la muestra sobre un área extensa y tomando una serie de imágenes ópticas fijas de la muestra, representando cada imagen una parte distinta del área.

CARACTERÍSTICAS DE LA INVENCIÓN

Se da a conocer un procedimiento y un sistema para mejorar la precisión del reconocimiento y análisis automático de partículas.

Un procedimiento de análisis de una muestra que contiene partículas incluye la determinación de un primer conteo colectivo de un grupo seleccionado de partículas de una muestra, tratar como mínimo una parte de la muestra para alterar un subgrupo del grupo seleccionado de partículas, determinando un segundo conteo colectivo de cualquier grupo seleccionado de partículas en la parte tratada de la muestra, y sustraer el segundo conteo colectivo del primer conteo colectivo para determinar un conteo de diferenciación para el subgrupo de partículas alteradas por el tratamiento de la muestra.

Un dispositivo para analizar una muestra que contiene partículas que incluye un dispositivo de formación de imágenes para captar imágenes de partes tratadas y no tratadas de una muestra y crear imágenes electrónicas de las imágenes captadas, en el que un subgrupo de un grupo seleccionado de partículas de la muestra es alterado en la parte tratada de la muestra y un procesador. El procesador está adaptado para determinar un primer conteo colectivo del grupo seleccionado de partículas en la parte no tratada de la muestra, determinar un segundo conteo colectivo de cualquiera de las partículas del grupo seleccionado en la parte tratada de la muestra y restar el segundo conteo colectivo del primer conteo colectivo para determinar un conteo de diferenciación para el subgrupo de partículas alteradas en la parte tratada de la muestra.

Otros objetivos y características de la presente invención quedarán evidentes por la siguiente descripción, reivindicaciones y figuras adjuntas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura 1 es un diagrama esquemático de un analizador de partículas.

La figura 2 es un diagrama de flujo que muestra las etapas de procedimiento de una realización de análisis de partículas.

La figura 3 es un diagrama de flujo que muestra las etapas de procedimiento de una segunda realización de análisis de partículas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERENTES

El sistema y procedimiento que se describen mejoran la exactitud de clasificación de partículas que pueden ser difíciles de diferenciar, especialmente en sistemas analizadores automatizados de partículas. El sistema y procedimiento mejorados pueden ser utilizados empleando técnicas de reconocimiento automático de partículas (APR) utilizando un analizador de partículas que tiene un sistema de imagen -2- y un procesador -4-, tal como se ha mostrado esquemáticamente en la figura 1.

Sistema de imagen y procesador

El sistema de imagen -2- es utilizado para producir imágenes de campos de visión de una muestra que contiene las partículas... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para el análisis de una muestra que contiene partículas, que comprende:

determinar un primer conteo selectivo de un grupo seleccionado de partículas de la muestra;

tratamiento como mínimo de una parte de la muestra para alterar un subgrupo del grupo seleccionado de partículas:

determinar un segundo conteo colectivo de cualquiera del grupo de partículas seleccionado en la parte tratada de la muestra; y

restar el segundo conteo colectivo del primer conteo colectivo para determinar un conteo de diferenciación para el subgrupo de partículas alterado por el tratamiento de la muestra,

caracterizado por la determinación de efectos del tratamiento de la muestra sobre partículas del grupo seleccionado de partículas distinto del subgrupo del grupo seleccionado de partículas; y por ajustar el segundo conteo colectivo para compensar el efecto determinado de tratamiento de la muestra.

2. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que la determinación del primer conteo colectivo comprende: crear primeras imágenes electrónicas de la muestra; e identificar colectivamente y contar imágenes del grupo seleccionado de partículas en las primeras imágenes

electrónicas.

3. Procedimiento, según la reivindicación 2, en el que la determinación del segundo conteo colectivo comprende: la creación de segundas imágenes electrónicas de la parte tratada de la muestra; e identificar colectivamente y contar imágenes de cualquiera del grupo seleccionado de partículas en las segundas

imágenes electrónicas.

4. Procedimiento, según la reivindicación 3, en el que la determinación del primer conteo colectivo comprende además:

hacer pasar como mínimo una parte de la muestra a través de una célula de flujo (10) : y captar imágenes de la muestra en la célula de flujo (10) utilizando una cámara (14) .

5. Procedimiento, según la reivindicación 4, en el que la determinación del segundo conteo colectivo comprende además:

hacer pasar la parte tratada de la muestra a través de la célula de flujo (10) ; y captar imágenes de la parte tratada de la muestra en la célula de flujo (10) utilizando la cámara (14) .

6. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que: el grupo seleccionado de partículas comprende glóbulos rojos y glóbulos blancos de la sangre: y el subgrupo del grupo seleccionado de partículas comprende glóbulos rojos de la sangre.

7. Procedimiento, según la reivindicación 6, en el que el tratamiento de como mínimo una parte de la muestra comprende el tratamiento de la muestra con un agente de lisado.

8. Procedimiento, según la reivindicación 7, en el que la muestra es fluido vertebral.

9. Dispositivo para el análisis de una muestra que contiene partículas, que comprende:

un dispositivo de toma de imágenes (2) para la captación de imágenes de partes tratadas y no tratadas de una muestra y creación de imágenes electrónicas a partir de las imágenes captadas, en el que un subgrupo de un grupo seleccionado de partículas de la muestra es alterado en la parte tratada de la muestra; un procesador adaptado para:

determinar un primer conteo colectivo del grupo seleccionado de partículas en la parte no tratada de la muestra, determinar un segundo conteo colectivo de cualquiera del grupo seleccionado de partículas en la parte tratada de la muestra.

y restar el segundo conteo colectivo del primer conteo colectivo para determinar un conteo de diferenciación para el 5 subgrupo de partículas alterado en la parte tratada de la muestra,

caracterizado porque el procesador está adaptado también para determinar efectos del tratamiento de la muestra sobre partículas del grupo seleccionado de partículas distintas del subgrupo del grupo seleccionado de partículas y para ajustar el segundo conteo colectivo para compensar el efecto determinado del tratamiento de la muestra.

10. Dispositivo, según la reivindicación 9, en el que el dispositivo de toma de imágenes comprende:

una célula de flujo (10) a través de la que puede pasar la muestra; y 15 cámara (14) para captar las imágenes de las partes tratadas y no tratadas de la muestra.