Dispositivo de ensayo.

Un dispositivo de ensayo para la determinación de la hCG en una muestra de orina en un amplio intervalo deconcentraciones,

que comprende un primer ensayo para la hCG y un segundo ensayo para la hCG, en el que:

el primer ensayo para la hCG comprende una primera vía de flujo con una única zona de detección del primerensayo y un reactivo de unión a la hCG marcado movilizable, anterior a dicha zona de detección del primer ensayo;

y el segundo ensayo para la hCG comprende una segunda vía de flujo con una única zona de detección del segundoensayo, un reactivo de unión a la hCG marcado movilizable, anterior a dicha zona de detección del segundo ensayo,y un reactivo de unión depurador para la hCG sin marcar y movilizable, anterior a dicha zona de detección delsegundo ensayo; en el que cada una las zonas de detección de los ensayos primero y segundo comprendeindependientemente un reactivo inmovilizado que es capaz de inmovilizar el respectivo reactivo de unión a la hCGmarcado en presencia de la hCG; en el que dichos ensayos primero y segundo se proporcionan en sustratosseparados o en un sustrato común pero con las vías primera y segunda de flujo aisladas fluídicamente entre sí;

en el que la inmovilización de los reactivos de unión a la hCG marcados en las zonas de detección proporciona unaindicación de la hCG en dicha muestra líquida; y en el que el primer ensayo proporciona una indicación de la hCG enun primer intervalo de concentraciones y el segundo ensayo proporciona una indicación de la hCG en un segundointervalo de concentraciones mayores, y en el que además el dispositivo comprende:

(a) un sistema de iluminación y detección para iluminar y detectar el reactivo de unión óptico marcado en las zonasde detección;

(b) un sistema computacional para calcular un nivel de la hCG o un valor correspondiente al nivel de la hCG;

(c) un sistema de visualización para visualizar un resultado de la prueba de ensayo;

(d) un valor umbral de base almacenado, en el que un nivel de la hCG correspondiente a un valor por debajo delumbral de base almacenado indica la ausencia de embarazo y en el que un nivel de la hCG correspondiente a unvalor en o por encima del umbral de base almacenado indica un embarazo;

(e) dos valores umbral almacenados adicionales primero y segundo, en el que un nivel de la hCG correspondiente aun valor inferior o igual a un primer valor umbral indica un nivel de embarazo en un primer intervalo, un nivel de lahCG correspondiente a un valor superior al segundo umbral indica un nivel de embarazo en un tercer intervalo y unnivel de la hCG correspondiente a un valor superior o igual al primer umbral pero inferior al segundo umbral indicaun nivel de embarazo en un segundo intervalo, en el que el sistema de visualización es capaz de indicar un estadosin embarazo o un estado de embarazo y la edad gestacional.

Dispositivo de ensayo

Campo de la invención La presente invención se refiere a un dispositivo de ensayo, un kit y un procedimiento para determinar la presencia o el nivel de la gonadotropina coriónica humana (hCG) en un amplio intervalo de concentraciones.

Antecedentes de la invención Se han desarrollado y comercializado sencillos dispositivos de inmunoensayo de flujo lateral para la detección de analitos en muestras líquidas, véase, por ejemplo, el documento EP 291194. Tales dispositivos comprenden típicamente un soporte poroso que comprende un reactivo de unión marcado movilizable seco, capaz de unirse al

analito en cuestión, y un reactivo de unión inmovilizado, también capaz de unirse al analito, proporcionado en una zona de detección posterior al reactivo de unión marcado. La detección del reactivo de unión marcado inmovilizado en la zona de detección proporciona una indicación de la presencia del analito en la muestra.

Alternativamente, cuando el analito de interés es un hapteno, el dispositivo de inmunoensayo puede emplear una reacción de competición, en la que un analito o un análogo del analito marcados compiten con el analito presente en la muestra por un reactivo de unión inmovilizado en la zona de detección. Alternativamente, el dispositivo de ensayo puede emplear una reacción de inhibición, en el que se proporcionan un analito o un análogo del analito inmovilizados en una zona de detección y el dispositivo de ensayo comprende un reactivo de unión marcado movilizable para el analito.

Frecuentemente, el ensayo elegido para la detección de analitos es un inmunoensayo de sándwich. Sin embargo, un ensayo de sándwich no siempre es posible, por ejemplo, en el caso de moléculas pequeñas como haptenos, que pueden no tener el tamaño suficiente para permitir su unión simultánea a dos parejas de unión diferentes. Una curva de respuesta a la dosis preparada con un dispositivo de flujo lateral típico y el empleo de un inmunoensayo de sándwich muestra niveles crecientes de la señal con el aumento del analito hasta el punto de que, para niveles más elevados del analito, la curva tiende a aplanarse. Para niveles aún mayores del analito, la señal comienza a disminuir debido a la captura preferente en la zona de detección del analito que todavía no se ha unido al reactivo marcado. Este fenómeno se conoce como el efecto de gancho. Por lo tanto, los inmunoensayos de sándwich presentan un intervalo de ensayo limitado debido a que la cantidad o la intensidad de la señal observada para mayores niveles del analito puede ser igual o incluso inferior a la observada para menores niveles del analito.

Un ensayo de competición o de inhibición proporciona típicamente una señal elevada para niveles nulos o bajos del analito. Para niveles crecientes del analito, el nivel de la señal puede ser todavía elevado, dependiendo de la cantidad de la especie de unión marcada presente en comparación con la cantidad de analito. Para niveles todavía crecientes del analito, la señal comienza a disminuir, a medida que el analito sin unir compite con el analito o el análogo del analito marcados por el reactivo de unión inmovilizado o se une al reactivo de unión marcado y disminuye la unión del reactivo de unión marcado en la zona de detección.

Por lo tanto, el uso de ensayos de sándwich para medir un analito en un amplio intervalo puede presentar problemas 45 con respecto al efecto de gancho. Elevadas concentraciones del analito comienzan a producir una disminución de la señal del ensayo. Los ensayos de competición o de inhibición resultan en la reducción de la señal del ensayo para elevadas concentraciones del analito y, por lo tanto, ofrecen un intervalo limitado para poder medir el analito.

Por lo tanto, los procedimientos de ensayo anteriores no son adecuados para medir las concentraciones de un analito en un amplio intervalo.

El documento US 2005/0112780 desvela un dispositivo de ensayo y un procedimiento para extender el intervalo de detección dinámica de los dispositivos de ensayo que comprende un soporte poroso que permite el paso de flujo y que comprende una zona de detección y una zona de compensación posterior a la zona de detección. La detección 55 implica un primer reactivo de unión que se une a una sonda de detección para generar una señal de detección con una intensidad proporcional a la cantidad de analito y la zona de compensación comprende un segundo reactivo de captura que se une a una sonda de detección para generar una señal que es inversamente proporcional a la intensidad de la señal de detección. El ensayo puede comprender además una tercera zona de calibración que genera una señal. El primer reactivo de unión puede seleccionarse de un grupo que incluye un antígeno, un hapteno o estreptavidina. Los reactivos primero y segundo de unión pueden elegirse entre una serie de especies que incluyen un antígeno, un hapteno o estreptavidina.

El documento US 2005/0112779 desvela un dispositivo de ensayo de paso de flujo con dos zonas de detección en una única vía de flujo en una única tira de ensayo: una de las zonas de detección participa en un ensayo de tipo 65 competitivo y la otra participa en un ensayo de tipo sándwich, en el que la combinación de los tipos de ensayo permite la detección de un analito en un amplio intervalo de concentraciones.

El documento EP 0465266 desvela un dispositivo de ensayo con varias regiones de detección del analito localizadas en una única vía de flujo. De nuevo, una zona de detección es para usar en un ensayo de tipo competitivo y otra zona de detección es para usar en un ensayo de tipo sándwich. De nuevo, la finalidad indicada es la medida de un analito en un amplio intervalo de concentraciones.

El documento WO 97/06439 desvela un ensayo de flujo lateral que implica el uso de miembros de un par de unión específico que no guarda relación con una interacción entre analito y antianalito. El ensayo implica una única vía de flujo.

El documento US 2003/207465 desvela un dispositivo de ensayo de flujo lateral con reactivos de unión específica, marcados y sin marcar, que son capaces de participar en un ensayo de sándwich o en un ensayo de competición y en el que, antes de llevar a cabo el ensayo, el reactivo de unión específica marcado queda retenido en un cuerpo macroporoso. El dispositivo tiene solo una vía de flujo.

El documento US 2006/024842 desvela un kit de múltiples dispositivos de prueba de flujo lateral, diseñados para determinar el nivel relativo de la hCG en muestras de una mujer embarazada y, de este modo, indicar si los niveles de la hCG aumentan de la manera esperada (y confirmar así que el embarazo evoluciona satisfactoriamente) . Cada uno de los dispositivos de prueba tiene varias vías de flujo, cada una de las cuales tiene como objetivo la medida de la hCG en un intervalo de concentraciones concreto diferente, de modo que el dispositivo en su conjunto puede medir la hCG en un intervalo de concentraciones más amplio de lo que es posible con un único dispositivo de ensayo convencional.

El documento US 2004/0197820 desvela un dispositivo de ensayo con un soporte poroso que permite el paso de flujo para reducir el efecto de gancho que comprende una zona de detección, en el que el dispositivo puede incluir una zona de calibración posterior.

El dispositivo US 2006/0019404 desvela un dispositivo de ensayo con un amplio intervalo dinámico que comprende una tira de prueba de flujo lateral que comprende varias de zonas de detección con una sensibilidad progresivamente decreciente a la concentración del analito. El dispositivo de ensayo puede comprender dos soportes, cada uno de los cuales tiene varias zonas de detección. Para determinar la concentración del analito, se detecta la cantidad de marcador o señal presente en las múltiples zonas de detección.

El documento EP 462376 desvela un dispositivo de ensayo que comprende un sitio de captura y un sitio de recuperación del conjugado, en el que el sitio de recuperación del conjugado recibe y se une a dicho conjugado o complejos conjugados que migran a través de dicho sitio de captura y en el que, para determinar la cantidad del analito de interés, se detecta el conjugado inmovilizado en el sitio de recuperación y en el sitio de captura.

Los presentes inventores han demostrado que, para dispositivos de ensayo en los que se proporcionan múltiples zonas de detección para la detección de un analito en el mismo soporte poroso, la unión en una zona de detección anterior puede cambiar las características de unión en una zona de detección posterior y que cualquier variación de la unión en una zona de detección anterior puede causar una variación compuesta de la... [Seguir leyendo]

1. Un dispositivo de ensayo para la determinación de la hCG en una muestra de orina en un amplio intervalo de concentraciones, que comprende un primer ensayo para la hCG y un segundo ensayo para la hCG, en el que:

el primer ensayo para la hCG comprende una primera vía de flujo con una única zona de detección del primer ensayo y un reactivo de unión a la hCG marcado movilizable, anterior a dicha zona de detección del primer ensayo; y el segundo ensayo para la hCG comprende una segunda vía de flujo con una única zona de detección del segundo ensayo, un reactivo de unión a la hCG marcado movilizable, anterior a dicha zona de detección del segundo ensayo, y un reactivo de unión depurador para la hCG sin marcar y movilizable, anterior a dicha zona de detección del segundo ensayo; en el que cada una las zonas de detección de los ensayos primero y segundo comprende independientemente un reactivo inmovilizado que es capaz de inmovilizar el respectivo reactivo de unión a la hCG marcado en presencia de la hCG; en el que dichos ensayos primero y segundo se proporcionan en sustratos separados o en un sustrato común pero con las vías primera y segunda de flujo aisladas fluídicamente entre sí;

en el que la inmovilización de los reactivos de unión a la hCG marcados en las zonas de detección proporciona una indicación de la hCG en dicha muestra líquida; y en el que el primer ensayo proporciona una indicación de la hCG en un primer intervalo de concentraciones y el segundo ensayo proporciona una indicación de la hCG en un segundo intervalo de concentraciones mayores, y en el que además el dispositivo comprende:

(a) un sistema de iluminación y detección para iluminar y detectar el reactivo de unión óptico marcado en las zonas de detección;

(b) un sistema computacional para calcular un nivel de la hCG o un valor correspondiente al nivel de la hCG; 25

(c) un sistema de visualización para visualizar un resultado de la prueba de ensayo;

(d) un valor umbral de base almacenado, en el que un nivel de la hCG correspondiente a un valor por debajo del umbral de base almacenado indica la ausencia de embarazo y en el que un nivel de la hCG correspondiente a un valor en o por encima del umbral de base almacenado indica un embarazo;

(e) dos valores umbral almacenados adicionales primero y segundo, en el que un nivel de la hCG correspondiente a un valor inferior o igual a un primer valor umbral indica un nivel de embarazo en un primer intervalo, un nivel de la hCG correspondiente a un valor superior al segundo umbral indica un nivel de embarazo en un tercer intervalo y un

nivel de la hCG correspondiente a un valor superior o igual al primer umbral pero inferior al segundo umbral indica un nivel de embarazo en un segundo intervalo, en el que el sistema de visualización es capaz de indicar un estado sin embarazo o un estado de embarazo y la edad gestacional.

2. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que los intervalos primero y segundo de concentraciones se solapan.

3. El dispositivo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el primer ensayo es un ensayo para la hCG de mayor sensibilidad y el segundo ensayo es un ensayo para la hCG de menor sensibilidad.

4. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las vías primera y/o segunda de flujo comprenden un soporte poroso.

5. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el soporte poroso es un soporte poroso de flujo lateral.

6. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el reactivo de unión a la hCG marcado movilizable y el reactivo de unión depurador del segundo ensayo se unen respectivamente a unas regiones primera y segunda de unión de la hCG y la zona de detección del segundo ensayo comprende un reactivo de unión inmovilizado para dicha segunda región de unión de la hCG.

7. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el reactivo de unión a la hCG marcado movilizable y el reactivo de unión depurador del segundo ensayo se proporcionan en la misma región.

8. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que cada uno de los reactivos de unión a la hCG marcados movilizables de los ensayos primero y segundo está marcado con una partícula ópticamente detectable.

9. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende un receptor de

muestras poroso común. 65

10. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el reactivo de unión

depurador del segundo ensayo es capaz de unirse a la subunidad β de la hCG y el reactivo de unión marcado movilizable del segundo ensayo es capaz de unirse a la subunidad α de la hCG.

11. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que los reactivos

inmovilizados en las zonas de detección de los ensayos primero y segundo son reactivos de unión a la hCG inmovilizados.

12. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que cada uno de los reactivos inmovilizados en las zonas de detección de los ensayos primero y segundo es capaz de inmovilizar el respectivo reactivo de unión a la hCG marcado por medio de un complejo entre el reactivo de unión a la hCG marcado, la hCG y un segundo reactivo de unión a la hCG.

13. El dispositivo de acuerdo con la reivindicación 12, en el que los reactivos inmovilizados en las zonas de detección de los ensayos primero y segundo son independientemente estreptavidina o antibiotina. 15

14. El dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende un alojamiento, en el que los ensayos primero y segundo se proporcionan dentro de dicho alojamiento.

15. El uso de un dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la

determinación de un embarazo, así como la edad gestacional de una mujer en unidades de semanas, a partir de una muestra de orina de dicha mujer.