Diagnóstico de preeclampsia.

Un método para el diagnóstico de preeclampsia que comprende medir el urato en una muestra biológica de salivamaterna.

Diagnóstico de preeclampsia Esta invención se refiere a la detección de preeclampsia. En particular, se refiere al diagnóstico de preeclampsia mediante la detección de niveles elevados de urato, la sal sódica del ácido úrico, 2, 6, 8, trioxIpurina, en un líquido biológico, la saliva.

La invención es un método de uso de la mayor sensibilidad inherente a la concentración de urato en la saliva, en comparación con la sanguínea, y depende del urato como un compuesto metabólico con un comportamiento único y predecible.

La preeclampsia se produce en aproximadamente 2 a 4% de las mujeres embarazadas y es una causa frecuente de morbimortalidad materna y fetal. En casos graves, es necesario el parto prematuro y por lo tanto existe el riesgo de que el niño nazca minusválido.

La preeclampsia (toxemia del embarazo, toxemia preeclámpsica) conocida de otro modo como “hipertensión proteinúrica gestacional” (HPG) es una enfermedad multisistémica del embarazo de causa desconocida. El síndrome materno se caracteriza por varias anomalías: aumento de la presión arterial, edema, proteinuria y anomalías en la coagulación y en la función hepática y renal. Esto puede derivar en insuficiencia multisistémica, hemorragia intracraneal y convulsiones. Se cree que la causa de la preeclampsia se encuentra en la placenta y existe evidencia de un factor "tóxico" circulando en las células endoteliales.

El estrés oxidativo se considera esencial para el desarrollo de la preeclampsia y se asocia a mala perfusión placentaria. Una concentración sanguínea de urato elevada, un marcador del estrés oxidativo, se asocia con la gravedad de la preeclampsia y el desenlace clínico del feto (Many et al, 1996) . El urato sanguíneo también es un predictor de la preeclampsia (Chappell et al 2002) .

Los síntomas de la preeclampsia se pueden detectar generalmente desde alrededor de las 28 semanas hasta el término, y habitualmente no son evidentes antes de las 24 semanas. Las pruebas convencionales, como las divulgadas en el estado anterior de la técnica EP 0927355B1 son para detectar insuficiencia renal por medición de urea en sangre o proteína en orina, y aumento de la presión arterial materna.

El estado anterior de la técnica, sin embargo, falla en varios aspectos importantes, las pruebas sanguíneas son lentas, necesitan un operador experimentado, pueden causar molestias físicas y psicológicas y podrían provocar lesiones peligrosas por el pinchazo de la aguja como hepatitis infecciosa o SIDA. Las muestras de sangre también requieren técnicas de almacenamiento especializadas para detener la descomposición.

Por lo tanto, lo que se necesita es un método para la identificación de las mujeres embarazadas que tienen riesgo de sufrir, o que sufren de, preeclampsia con una prueba bioquímica para detectar el estrés oxidativo, que sea muy sensible, económica, no invasiva, y simple y rápida de realizar de forma rutinaria o en emergencia, y que sea más segura, más fácil, más rápida y más barata que la extracción de sangre.

Una prueba de urato es ideal, puesto que es un antioxidante poderoso y un marcador del estrés oxidativo. Además, es probable que el cambio bioquímico ocurra antes que el daño tisular irreversible. La concentración sanguínea de urato es sin embargo un mal discriminador de la preeclampsia, porque también aumenta en el embarazo normal.

No obstante, el urato sanguíneo es resultado de la producción endógena de urato, la dieta, la excreción renal y la excreción gastrointestinal. En el intestino, el urato sufre degradación bacteriana (uricolisis entérica) (Sorensen, 1960) y está sujeto a variabilidad diurna (Owen-Smith et al, 1981, Figura 1) . Por la noche, la excreción de ácido úrico en la orina se reduce, en tanto aumenta la eliminación intestinal. Se ha demostrado que las concentraciones sanguíneas de urato también presentan variación diurna (Kanabrocki et al, 2000, Figura 2) en menor grado. La variación diurna parece deberse principalmente al acto de dormir (Owen-Smith, 1983. Figura 3) . El resultado neto de esos cambios es la estabilidad relativa del urato sanguíneo de forma que con una sobreproducción de urato celular, el aumento de la concentración sanguínea se retrase.

El urato es una molécula pequeña y ampliamente difundida en el líquido extracelular, incluida la saliva. El urato salival no se reabsorbe (como en el riñón) sino que se traga y es degradado por las bacterias en el intestino. Por lo tanto, en la saliva se detectan cambios rápidos o incrementos súbitos en la producción de urato, sin cambios significativos en la concentración sanguínea de urato.

Se demostró que la concentración de urato en la saliva es un indicador más sensible del metabolismo celular de urato que el que se encuentra en la sangre. Esto se estableció en pacientes que sufren de gota, antes y después del tratamiento con alopurinol (que previene la formación de urato) y en sujetos normales practicando ejercicio o que proporcionan muestras de día y de noche (para evaluar la variabilidad diurna en la excreción) (Owen-Smith et al, 1998) .

Además, una paciente con preeclampsia proporcionó muestras de urato sanguíneo y salival en los días anteriores y posteriores al parto (Figura 4) . Ambos conjuntos de muestras tuvieron valores considerablemente elevados en comparación con mujeres no embarazadas normales y un embarazo de 28 semanas. Los niveles salivales en preeclampsia mostraron una buena correlación con los niveles sanguíneos. El aumento en la concentración salival entre las 28 semanas de embarazo y el parto fue de 180 µmol/l.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona un método para el diagnóstico de preeclampsia, que comprende medir el urato en una muestra biológica. Los valores obtenidos midiendo los niveles de urato en mujeres embarazadas se pueden comparar con los valores normales que resultan de la medición de los niveles de urato en muestras biológicas obtenidas de mujeres embarazadas de edad gestacional similar que no presentaron preeclampsia.

La muestra puede ser de sangre entera o plasma que también puede contener un anticoagulante. Sin embargo, en un aspecto preferido de la invención, la muestra se toma de la saliva materna. El urato de la saliva materna no ha sido utilizado previamente para el diagnóstico de preeclampsia en el embarazo. Debido a la variación diurna en los niveles de urato salival, con el fin de controlar los cambios en los niveles de urato durante el embarazo, la muestra se debe recoger preferentemente a la misma hora del día.

La muestra de saliva se puede recoger de cualquier manera adecuada. Por ejemplo, se puede recoger una muestra de saliva directamente en un tubo. Alternativamente se puede recoger la muestra en un tubo que tenga un recipiente insertado que contenga un hisopo de algodón y una perforación en su base. El hisopo de algodón se humedece debajo de la lengua y luego se mastica durante unos 45 segundos para que absorba la saliva. Luego la muestra recogida se refrigera por debajo de 10 °C, preferentemente a 4 °C hasta que pueda ser transportada a un laboratorio para su procesamiento. Después el tubo se puede centrifugar, por ejemplo a 3000 revoluciones durante 5 minutos, para que esté listo para el ensayo.

Los niveles de urato en la muestra biológica se pueden medir utilizando cualquier prueba o ensayo biológico adecuados, incluidos una prueba con tira reactiva, el método de punto final cronometrado o por medio del método de prueba en seco.

La prueba de la tira reactiva comprende utilizar una tira reactiva farmacéutica estándar para análisis biológicos, que tiene áreas recubiertas con reactivos que cambian de color cuando se detecta urato. Los reactivos utilizados son los específicos para detectar urato en la saliva y los valores obtenidos se pueden comparar contra una carta de colores normalizados.

Se puede usar un reactivo de ácido úrico para medir la concentración de ácido úrico por el método del punto final cronometrado. El ácido úrico es oxidado por la uricasa para producir alantoína y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno reacciona con 4-aminoantipirina (4-AAP) y 3, 5-dicloro-2-hidroxibenceno sulfonato (DCHBS) en una reacción catalizada por la peroxidasa para dar un producto coloreado.

Para analizar la muestra se puede utilizar un medidor múltiple comercial, el calibrador SYNCHRON CX Systems MULTI Calibrator en el que la muestra es su propio reactivo. Después se puede monitorear el cambio en la absorbancia a 920 nanómetros. Este cambio en la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de ácido úrico en la muestra y es utilizado por el SYNCHRON CX System para calcular... [Seguir leyendo]

1. Un método para el diagnóstico de preeclampsia que comprende medir el urato en una muestra biológica de saliva materna. 5

2. Un método como el reivindicado en la reivindicación 1, donde el urato se mide por medio de un método de punto final cronometrado.

3. Un método como el reivindicado en la reivindicación 1, donde el urato se mide por medio de un método de prueba 10 en seco.

4. Un método como el reivindicado en la reivindicación 1, donde el urato se mide por medio de un método de tira reactiva.

5. El uso de los niveles de urato en la saliva materna como indicador de preeclampsia.