Derivados de pirazol como agentes contra Francisella.

Un compuesto de Fórmula I**Fórmula**

en la que:

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en restos de hidrógeno,

amino, amido, sulfonoamidilo, metilsulfiniloy etilsulfinilo,

y

R2 es un grupo arilo, y donde R2 está opcionalmente sustituido en posiciones sustituibles con uno o más restosseleccionados de forma independiente entre halo, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, hidroxialquilo C1-4, hidroxilo, nitro,amino, carboxilo y ciano; o

una de sus sales farmacéuticamente aceptables;

para su uso en un método para tratar o prevenir infección por Francisella tularensis en un sujeto,donde dicho método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición queincluye un compuesto de Fórmula I.

Derivados de pirazol como agentes contra Francisella

Financiación gubernamental

Antecedente Francisella tularensis es una bacteria gram negativa facultativa muy virulenta, que produce la enfermedad zoonótica tularemia. La infección puede producirse a través de diversas rutas, pero la tularemia peumónica es la forma clínica más grave, con una tasa de mortalidad de hasta en un 60 por ciento en ausencia de tratamiento. F tularensis puede invadir una gama de células hospedadoras, pero su diana principal in vivo es el macrófago. Sjostedt, A, Curr. Opin. Microbiol. 6, p. 66-71 (2003) . Tras ser fagocitado por los macrófagos, este patógeno intracelular puede bloquear la fusión de los fagosomas que contienen la Francisella con los lisosomas y escapar del fagosoma hasta el citosol

donde se multiplica. Tras la proliferación en el interior de los macrófagos, F. tularensis induce la apoptosis o la piroptosis de la célula hospedadora conduciendo a la liberación de la bacteria y a la posterior infección de nuevas células.

Debido a la facilidad con la que los organismos aerosolizados podrían diseminarse potencialmente de forma deliberada infringiendo una morbilidad y mortalidad sustanciales a gran cantidad de personas. F. tularensis se ha reconocido como un potencial agente de guerra biológica y, por consiguiente, se ha clasificado como un agente de bioterrorismo de Categoría A por los U.S. Centers for Disease Control and Prevention. Desafortunadamente, la vacuna atenuada viva actual derivada de una cepa de tipo B de F. tularensis tiene graves inconvenientes y es de limitada utilidad en el escenario de una amenaza bioterrorista. Oyston y col., Nat. Rev. Microbiol. 2, p. 967-78 (2004) .

Además, se cree que se crearon cepas resistentes de F. tularensis al principio de la década de los 90 como armas biológicas. Dennis y col., JAMA, 285, p. 2763-73 (2001) . Por consiguiente, el desarrollo de novedosos agentes antibacterianos frente a F. tularensis se ha convertido en una importante prioridad.

En el documento WO 2008/130669 A1, Ojima y col, describen novedosos derivados de bencimidazol y sus sales farmacéuticamente aceptables. Se describen también en dicho documento métodos para tratar a un paciente infectado por Mycobacterium tuberculosis o Francisella tularensis administrando al paciente un derivado de bencimidazol o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

Sumario de la invención Se describen en el presente documento numerosos derivados de celecoxib que demuestran actividad antibacteriana frente a F. tularensis. De acuerdo con esto, se describe también en el presente documento un método para tratar o prevenir la infección por Francisella tularensis en un sujeto, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que incluye un derivado de celecoxib, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como se define adicionalmente en el presente documento. La infección por Francisella tularensis se puede inhibir en las células de los macrófagos sin toxicidad significativa para las células de los macrófagos, y la Francisella tularensis puede ser resistente a los antibióticos. El sujeto puede ser un ser humano.

Se describen también en el presente documento compuestos de acuerdo con la fórmula I 45

R1de Fórmula I se puede seleccionar entre el grupo que consiste en restos de hidrógeno, amino, amido, metilsulfinilo y etilsulfinilo, y R2 puede ser un grupo arilo. El grupo R2 de la fórmula I puede sustituirse opcionalmente en posiciones sustituibles con uno o más restos seleccionados de forma independiente entre halo, alquilo inferior,

haloalquilo inferior, hidroxialquilo inferior, hidroxilo, nitro, amino, carboxilo, y ciano. Se describen también en el presente documento sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I.

Se describen también en el presente documento composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de fórmula I:

R1

se puede seleccionar entre el grupo que consiste en restos de hidrógeno, amino, amido, metilsulfinilo, y etilsulfinilo, y R2 puede ser un grupo arilo. El grupo R2 de la Fórmula I puede sustituirse opcionalmente en posiciones sustituibles con uno o más restos seleccionados de forma independiente entre halo, alquilo inferior, haloalquilo inferior, hidroxialquilo inferior, hidroxilo, nitro, amino, carboxilo, y ciano. El compuesto de fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, puede ser un principio activo en la composición farmacéutica, y puede proporcionarse en combinación con un portador o portadores líquidos o sólidos aceptables.

Breve descripción de las figuras La FIG. 1 muestra la inhibición del crecimiento de F. tularensis debido a celecoxib en el caldo de cultivo, mostrando la sección (A) las estructuras de los inhibidores de celecoxib (izquierda) y rofecoxib (derecha) específicos de COX-2, y la sección (B) proporciona un gráfico de barras que muestra los resultados de un ensayo de viabilidad de bacterias. F. novicida y LVS se cultivaron en TBS modificado que contenía diferentes dosis de celecoxib o rofecoxib

a 37 ºC F. novicida y LVS viables se midieron como UFC tras 24 o 48 h de incubación, respectivamente. Las columnas significan; barras ± SD (n=3) . La sección (C) proporciona una tabla que muestra los resultados del ensayo de la concentración inhibidora mínima (MIC) . Cada grupo de ensayo se trató por triplicado y los valores que se muestran son los resultados de uno de tres experimentos independientes.

La FIG. 2 proporciona una tabla que muestra las estructuras y características de celecoxib y los compuestos 1-21. La estructura general de estas moléculas se muestra en la parte superior. Cada grupo de ensayo se trató por triplicado y los valores que se muestran son los resultados de uno de tres experimentos independientes.

La FIG. 3 muestra el efecto de celecoxib y sus derivados sobre las células RAW264.7 de macrófagos de murino,

proporcionando la sección (A) una gráfica que muestra los resultados de un ensayo de citotoxicidad de los agentes seleccionados, donde las células RAW264.7 se trataron con diferentes dosis de celecoxib y los compuestos (2, 11, 12, 16 y 20) en DMEM suplementado con FBS al 5 % durante 8 h. Se midió la viabilidad de las células tratadas con fármacos utilizando un ensayo de viabilidad de células MTT y se expresó como porcentaje de las células tratadas con el portador del control (DMSO) . Los puntos indican el promedio; barras ± SD (n = 3) , y la sección (B) proporciona una tabla que muestra la comparación de la citotoxicidad y la eficacia antimicrobiana de los agentes seleccionados.

La FIG. 4 muestra la inhibición de F. tularensis intracelular debida al compuesto 20, proporcionando la sección A un gráfico de barras que muestra que el compuesto 20 disminuyó la supervivencia de F. novicida intracelular en células RAW264.7 y THP-1, y mostrando la sección (B) la disminución de la supervivencia intracelular de F. tularensis (tipo A, Schu S4) en células THP-1 debida al compuesto 20. Los datos se presentan como el % de supervivencia con respecto a las células tratadas con el portador del control (DMSO) . Las columnas significan; barras ± SD (n = 3) . *P < 0, 05.

Descripción detallada de la invención Los inventores han demostrado que celecoxib (4- [5- (4-metilfenil) -3- (trifluorometil) pirazol-1-il] bencenosulfonamida) inhibidor específico de la cicloxigenasa-2 (COX-2) presenta actividad antibacteriana frente a una cepa virulenta de tipo A de F. tularensis (Schu S4) , la cepa de la vacuna viva (LVS) de F. tularensis (cepa de tipo B) y F. tularensis subespecie novicida (una subespecie avirulenta) directamente en medio de crecimiento. Este destructor bacteriano,

sin embargo, no se señaló con otro inhibidor específico de COX-2, rofecoxib, a pesar de su mayor potencia con respecto a celecoxib en la inhibición de COX-2. Tacconelli y col., Curr. Med. Res. Opin. 18, p. 503- 11 (2002) . Desde una perspectiva de descubrimiento del fármaco, la capacidad única de celecoxib para inhibir la proliferación de F. tularensis puede aprovecharse farmacológicamente como una plataforma molecular para desarrollar agentes novedosos dirigidos contra la Francisella.

Definiciones La terminología que se muestra en el presente documento es para la descripción solo de las realizaciones y no debe tomarse como limitante de la invención en su conjunto. A no ser que se especifique otra cosa “un”, “uno”, “el”, y “al

menos uno” se utilizan de forma indistinta. Además, tal como se usa en la descripción de la invención y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “un”,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de Fórmula I

en la que:

R1 se selecciona entre el grupo que consiste en restos de hidrógeno, amino, amido, sulfonoamidilo, metilsulfinilo y etilsulfinilo,

y R2 es un grupo arilo, y donde R2 está opcionalmente sustituido en posiciones sustituibles con uno o más restos seleccionados de forma independiente entre halo, alquilo C1-4, haloalquilo C1-4, hidroxialquilo C1-4, hidroxilo, nitro, amino, carboxilo y ciano; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables;

para su uso en un método para tratar o prevenir infección por Francisella tularensis en un sujeto, donde dicho método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que incluye un compuesto de Fórmula I.

2. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el grupo arilo de R2 se selecciona entre el 20 grupo que consiste en grupos fenilo, naftilo, bifenilo, antracenilo y fenantracenil arilo.

3. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 donde los restos sustituyentes opcionales para R2 se seleccionan de forma independiente entre bromo, cloro, flúor, metoxi, trifluorometilo, metilo, etilo, propilo, y butilo.

4. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:

Celecoxib;

4- (5- bifenil- 4- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - benzamida; 4- [5- (4’- cloro- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [5- (3’, 5’- dicloro- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [5- (4’- metil- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [3- trifluorometil- 5- (4’- trifluorometil-bifenil-4- il) - pirazol- 1- il]- benzamida;

4- [5- (3’, 5’- dimetil- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [5- (4’- terc- butil- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [5- (4’- butil- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- (5- antracen- 9- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - benzamida; 4- [5- (4- butil- fenil) - 3- trifluorometil- pirazol-1- il]- benzamida;

4- [5- (4’- cloro- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- bencenosulfonamida; 4- [5- (3’, 4’, 5’- tricloro- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- bencenosulfonamida; 4- (5- naftalen- 1- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - bencenosulfonamida; 5- (4- fluoro- fenil) - 1- (4- etanosulfonil- fenil) -3- trifluorometil- 1H- pirazol; 1- (4- metanosulfonil- fenil) - 5- (4’-metilbifenil-4- il) - 3- trifluorometil- 1H- pirazol;

4- (5- bifenil- 4- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; 4- [5- (3’, 4’, 5’- tricloro- bifenil- 4- il) -3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- fenilamina; 4- (5- naftalen- 1- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; 4- [5- (6- metoxi- naftalen- 2- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- fenilamina; 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazolil]- fenilamina; y

5- fenantren- 3- il- 1- fenil- 3- trifluorometil-1H- pirazol; y sus sales farmacéuticamente aceptables.

5. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en: 55

Celecoxib; 4- [5- (4’- cloro- bifenil- 4- il) - 3-trifluorometil-pirazol- 1- il]- benzamida; 4- [5- (4’- cloro- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- bencenosulfonamida; 4- [5- (3’, 4’, 5’- tricloro- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- bencenosulfonamida;

4- (5- bifenil- 4- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; y 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazolil]- fenilamina; y sus sales farmacéuticamente aceptables.

6. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto es 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) 10 3- trifluorometil- pirazolil]- fenilamina o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

7. Un compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la infección por Francisella tularensis se inhibe en células de macrófagos sin toxicidad significativa para las células de macrófagos.

8. Un compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, donde la Francisella tularensis es resistente a los antibióticos.

9. Un compuesto para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde el sujeto es un ser

humano. 20

10. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde R1 se selecciona entre el grupo que consiste en restos amino, amido y sulfonoamidilo y el grupo arilo del R2 es un grupo bifenilo, donde los restos sustituyentes opcionales para R2 se seleccionan de forma independiente entre bromo, cloro, fluoro, metoxi, trifluorometilo, metilo, etilo, propilo y butilo.

11. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 10, donde R1 es un resto amino o amido.

12. Un compuesto seleccionado entre el grupo que consiste en:

4- (5- bifenil- 4- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; 4- [5- (3’, 4’, 5’- tricloro- bifenil- 4- il) -3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- fenilamina; 4- (5- naftalen- 1- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; 4- [5- (6- metoxi- naftalen- 2- il) - 3- trifluorometil-pirazol- 1- il]- fenilamina; 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazolil]- fenilamina; y

sus sales farmacéuticamente aceptables.

13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 12, donde el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en:

4- (5- bifenil- 4- il- 3- trifluorometil- pirazol-1- il) - fenilamina; y 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) - 3- trifluorometil-pirazolil]- fenilamina; y sus sales farmacéuticamente aceptables.

14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, donde el compuesto es 4- [5- (4’- bromo- bifenil- 4- il) - 345 trifluorometil-pirazolil]- fenilamina o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

15. Una composición farmacéutica para su uso en un método para tratar o prevenir infección por Francisella tularensis que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 como un principio activo, y un portador o portadores líquidos o sólidos farmacéuticamente aceptables, en combinación con el

principio activo.

16. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14 como un principio activo y un portador o portadores líquidos o sólidos farmacéuticamente aceptables, en combinación con el principio activo.

17. Uso de un compuesto tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infección por Francisella tularensis en un sujeto.

C

Bacterias Gram-negativas Valores MIC en la inhibición del crecimiento bacteriano (μg/ml)

Celecoxib Rofecoxib

F. novicida 32 NE

F. tularensis LVS 16 NE

F. tularensis Schu S4 16 NE

Salmonella enterica serovar Typhimurium NE NE

Escherichia coli NE NE

(NE, sin efecto a 64 μg/ml del agente de ensayo)

Figura 1

(* Fn, F. novicida, se obtuvieron los datos después de 24 h y 48 h para Fn y LVS, respectivamente)

Figura 2

Compuesto MIC (μg/ml) CI50 (μg/ml) CI50/MIC

F. novicida RAW264.7

Celecoxib 32 17 0, 5

2 4 9 2, 3

11 4 4, 8 1, 2

12 2 2, 4 1, 2

16 4 15 3, 6

20 4 46 11, 5

B

Figura 3 Figura 4