Conservación y/o perfusión de órganos.

Un método para conservar un órgano para trasplante, proteger un órgano isquémico,

atenuar una disfunción de órgano después de isquemia, o proteger un órgano de daño después de su aislamiento del sistema circulatorio, que comprende el paso de perfundir el órgano con una solución que comprende al menos un inhibidor peptídico de la proteína quinasa ε (PKC ε), en donde el al menos un inhibidor peptídico de PKC ε tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y en donde dicho órgano se aísla del sistema circulatorio.

Conservación y/o perfusión de órganos

Campo de la invención La presente invención se refiere a una solución para la conservación, perfusión y/o reperfusión de un órgano, especialmente el corazón, para trasplante. La solución contiene inhibidor (es) peptídico (s) de la proteína quinasa C ε (PKC ε) .

Antecedentes de la invención El trasplante de órganos con éxito con frecuencia está limitado debido a lesión isquémica/reperfusión. Los corazones humanos aislados privados de oxígeno durante más de cuatro horas progresivamente pierden vigor y con frecuencia no sobreviven en los huéspedes receptores. Otros órganos tal como el riñón, hígado, páncreas y pulmón también están sometidos a daño tisular y celular cuando se retiran de sus huéspedes antes del trasplante. Este daño se debe a condiciones hipóxicas y una falta de circulación, que normalmente administra concentraciones fisiológicas de oxígeno y nutrientes, y elimina compuestos tóxicos producidos por las células de un órgano. Los trasplantes de órganos tienen una mayor frecuencia de éxito cuando se realizan inmediatamente después de la extracción de sus huéspedes.

Avances recientes han aumentado el índice de trasplantes de órgano con éxito y cirugía de órganos, tal como cirugía de revascularización coronaria. El primero incluye soluciones de conservación del órgano y de perfusión del órgano. El segundo es métodos y dispositivos mejorados para la administración de soluciones de perfusión de órganos a un órgano.

La conservación miocárdica a corto plazo actualmente está proporcionada por almacenamiento en frío después de la parada cardiopléjica. Sin embargo, existe una variedad de procesos que se diferencian por la composición de la solución usada, la temperatura de conservación y el protocolo de administración. Se han desarrollado diferentes soluciones para parar y conservar el corazón para proteger el miocardio en cirugía cardiaca. Los ejemplos de estas soluciones incluyen la solución de Krebs-Hanseleit, solución UW, solución St. Thomas II, solución Collins y solución Stanford. (Véanse, por ejemplo las patentes en EE UU Nos. 4.798.824 y 4.938.961; Southard y Belzer, Ann. Rev. Med. 46:235-247 (1995) ; y Donnelly y Djuric, Am. J. Hosp. Pharm. 48:2444-2460 (1991) ) . No obstante, los rechazos de órganos aún permanecen debido al deterioro en el estado del órgano trasplantado entre el tiempo de retirada y el restablecimiento del flujo sanguíneo en el receptor.

El restablecimiento del flujo sanguíneo es el objetivo principal para el tratamiento de tejido de órgano que experimenta isquemia prolongada, por ejemplo, durante el trasplante. Sin embargo, la reperfusión del flujo sanguíneo induce lesión en el endotelio y miocitos, lo que produce disfunción del órgano (Buerke et al., Am J Physiol

266: H128- 136, 1994; Lucchesi y Mullane, Ann Rev Pharmacol Toxicol 26: 2011-2024, 1986; y Lucchesi et al., J Mol Cell Cardiol 21: 1241-1251, 1989) . Los sucesos secuenciales asociados con la lesión de reperfusión se inician por la disfunción endotelial que se caracteriza por una reducción de la liberación basal por las células endoteliales de óxido nítrico (NO) en los primeros 2, 5-5 minutos tras la reperfusión (Tsao y Lefer, Am J Phyiol 259: H1660-1666, 1990) . La disminución en el NO de origen endotelial se asocia con el aumento de moléculas de adhesión en membranas de células endoteliales y leucocitos polimorfonucleares (PMN) (Ma et al., Circ Res 72: 403-412, 1993; y Weyrich et al., J Leuko Biol 57: 45-55, 1995) . Este suceso fomenta la interacción PMN/endotelial, que se produce a los 10 a 20 minutos tras la reperfusión, y la posterior infiltración de PMN en el miocardio se observa a los 30 minutos tras la reperfusión (Lefer y Hayward, En The Role of Nitric Oxide in Ischemia-Reperfusion: Contemporar y Cardiology, Loscalzo et al. (Eds.) , Humana Press, Totowa, NJ, pp. 357-380, 2000; Lefer y Lefer, Cardiovasc Res 32: 743-751, 1996; Tsao et al., Circulation 82: 1402-1412, 1990; y Weyrich et al., J Leuko Biol 57: 45-55, 1995) .

Las sustancias quimiotácticas liberadas del tejido reperfundido y factores del plasma activan las PMN que aumentan la liberación de sustancias citotóxicas de PMN (es decir, anión superóxido) y contribuyen a la disfunción de órganos después de isquemia/reperfusión (Lucchesi et al. J Mol Cell Cardiol 21: 1241-1251, 1989; Ma et al., Circ Res 69: 95106, 1991; Tsao et al., Circulation 82: 1402-1412, 1990; y Tsao et al., Am Heart J 123: 1464-1471, 1992) . El superóxido se combina con NO para producir anión peroxinitrito reduciendo de esta manera la biodisponibilidad de NO y fomenta la disfunción endotelial y la infiltración de PMN después de isquemia/reperfusión miocárdica (Clancey et al., J Clin Invest 90: 1116-1121, 1992; Hansen, Circulation 91: 1872-85, 1995; Lucchesi et al., J Mol Cell Cardiol

21: 1241-1251, 1989; Rubanyi y Vanhoutte, Am J Physiol 250: H815-821, 1986; Tsao et al., Am Heart J 123: 14641471, 1992; y Weiss, New Eng J Med 320: 365-375, 1989) .

Por tanto, permanece una necesidad para una solución de calidad mejorada que pueda extender el tiempo de conservación de un órgano para trasplante y proteger el órgano de lesión de reperfusión tras la isquemia, de modo que el órgano pueda continuar la función adecuada después del restablecimiento del flujo sanguíneo.

Compendio de la invención La presente invención proporciona una solución para la conservación, perfusión y/o reperfusión de un órgano,

especialmente el corazón, que contiene inhibidor (es) peptídico (s) de la proteína quinasa C ε (PKC ε) , que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO. 1. La solución protege los tejidos y células de un órgano de daño mientras el órgano está aislado del sistema circulatorio. El presente inventor ha descubierto que los inhibidores peptídicos de PKC ε pueden ejercer efectos protectores sobre órganos sometidos a isquemia/reperfusión.

En una forma de realización, la solución contiene aproximadamente de 1-10 µM, preferiblemente aproximadamente 1-5 μM, del inhibidor peptídico de la PKC ε disuelto en una solución, preferiblemente una solución salina.

La solución de la presente invención se puede usar como una solución de perfusión o una solución de conservación. Como solución de perfusión, se bombea en la vasculatura del órgano para proteger los tejidos y células del órgano. Como solución de conservación, sirve como una solución de baño en la que el órgano se sumerge. Preferiblemente, el órgano se perfunde con y se sumerge en la presente solución. Además, la presente solución también sirve como solución de reperfusión tras el restablecimiento del flujo sanguíneo al órgano después de la isquemia.

La presente invención también incluye métodos de usar la solución de la presente invención. Estos incluyen métodos para conservar un órgano para trasplante, para proteger un órgano isquémico del daño, para atenuar la disfunción de un órgano después de la isquemia, y para proteger un órgano del daño cuando se aísla del sistema circulatorio.

Breve descripción de las figuras La figura 1 es un gráfico que muestra la evolución temporal de la LVDP (presión desarrollada ventricular izquierda = presión telesistólica ventricular izquierda (LVESP) - presión telediastólica ventricular izquierda (LVEDP) ) en corazones de rata perfundidos I/R de referencia, I/R, I/R+PMN e I/R+PMN+ inhibidor peptídico de PKC ε (5 μM) .

La figura 2 es un gráfico que muestra la evolución temporal de LVEDP en grupos de I/R de referencia, I/R, I/R+PMN e I/R+PMN+ inhibidor peptídico de PKC ε (5 μM) .

La figura 3 es un gráfico que muestra las LVDP inicial y final expresadas en mm Hg de corazones de rata perfundidos aislados antes de la isquemia (I) (Inicial) y después de 45 minutos tras la reperfusión (Final) . Los corazones se perfundieron en presencia o ausencia de PMN. Las PMN indujeron una disfunción contráctil significativa, que se atenuó por el inhibidor peptídico de la PKC ε. Todos los valores se expresan como media ± EEM. Los números de los corazones examinados están en la parte inferior de las barras.

La figura 4 es un gráfico que muestra las velocidades máximas de LVDP inicial y final (+dP/dt max) expresadas en mm Hg/s en corazones de rata perfundidos aislados antes de la isquemia (Inicial) y después de la reperfusión (Final) . Los corazones se perfundieron en presencia o ausencia de PMN. Las PMN indujeron una disfunción contráctil significativa, que se atenuó por el inhibidor peptídico de la PKC ε. Todos los valores se expresan como media ±... [Seguir leyendo]

1. Un método para conservar un órgano para trasplante, proteger un órgano isquémico, atenuar una disfunción de órgano después de isquemia, o proteger un órgano de daño después de su aislamiento del sistema circulatorio, que comprende el paso de perfundir el órgano con una solución que comprende al menos un inhibidor peptídico de la proteína quinasa ε (PKC ε) , en donde el al menos un inhibidor peptídico de PKC ε tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y en donde dicho órgano se aísla del sistema circulatorio.

2. Un método según la reivindicación 1, en donde el al menos un inhibidor peptídico se disuelve en solución salina.

3. Un método según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la solución comprende además cloruro de potasio.

4. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la concentración del al menos un inhibidor peptídico de PKC ε es aproximadamente 1-10 µM.

5. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el órgano es un corazón.

6. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el órgano es un órgano de mamífero.

7. Un método según la reivindicación 6, en donde es mamífero es humano.

8. Un método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el órgano se conserva para trasplante.

9. Una solución que comprende al menos un inhibidor peptídico de la proteína quinasa ε (PKC ε) , para su uso en conservar un órgano para trasplante, proteger un órgano isquémico, atenuar una disfunción de órgano después de isquemia, o proteger un órgano de daño después de su aislamiento del sistema circulatorio, en donde el al menos un inhibidor peptídico de PKC ε tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

10. Una solución para uso según la reivindicación 9, en donde el al menos un inhibidor peptídico está miristilado.

11. Uso de una solución que comprende al menos un inhibidor peptídico de la proteína quinasa ε (PKC ε) para perfusión, conservación y/o reperfusión de un órgano aislado para trasplante, en donde el al menos un inhibidor peptídico de PKC ε tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y en donde dicho órgano se aísla del sistema circulatorio.

12. Uso según la reivindicación 11, en donde el órgano es un corazón.