Composiciones estabilizadas de trombina.

Una composición farmacéutica que comprende:

trombina;

una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcoholbencílico y clorobutanol;

y

del 0,10 % al 5,0 % (p/v) de sacarosa en solución acuosa.

Composiciones estabilizadas de trombina.

Antecedentes de la invención La formulación de proteínas farmacéuticas presenta retos significativos. Las proteínas tienen múltiples grupos funcionales además de una estructura tridimensional; por lo tanto la degradación procede mediante vías químicas (modificaciones que implican la formación o escisión de enlaces) y físicas (desnaturalización, agregación, adsorción, precipitación) . Como cada proteína implica una combinación única de secuencia de aminoácidos, punto isoeléctrico, y otros determinantes, su respuesta a cambios en condiciones de solución es impredecible, y debe determinarse en una base caso por caso. Intentos por evitar una forma de degradación a menudo aumentan la tasa de otra.

La degradación de proteínas puede reducirse enormemente o evitarse por liofilización. Sin embargo, la liofilización lleva mucho tiempo y es muy costosa, y puede causar la desnaturalización y agregación de la proteína si no se incluyen los excipientes apropiados. Como con formulación en solución, la estabilización de las proteínas liofilizadas debe afrontarse en una base individual. Puede usarse cloruro sódico para mantener la estabilidad durante la purificación y el almacenamiento reduciendo la agregación y la precipitación. Sin embargo, el cloruro sódico es un excipiente problemático en formulaciones liofilizadas porque disminuye la temperatura de transición vítrea, necesitando de este modo temperaturas principales bajas y tiempos largos de ciclo. Jiang y col., documento US 20060002918 A1 describen procedimientos para estabilizar preparaciones de trombina liofilizadas formulando la trombina con sacarosa, manitol, cloruro sódico y un tensioactivo o polietilenglicol de alto peso molecular. Sin embargo, la estabilización de una proteína en estado liofilizado no asegura la estabilidad después de su reconstitución, y las soluciones de proteína a menudo deben desecharse si no se usan inmediatamente después de su reconstitución. Además, la manipulación en uso de un producto de fármaco liofilizado a menudo está limitada por consideraciones de esterilidad porque la integridad del cierre del recipiente se compromete durante la reconstitución. Por tanto, el tiempo de manipulación en uso podría prolongarse si una formulación de producto de fármaco fuera estable en presencia de un conservante.

En vista del coste a menudo elevado de los agentes terapéuticos proteicos, se necesitan medios para potenciar la estabilidad de estas proteínas en solución. En el caso de trombina, se han propuesto diversos excipientes para estabilizar la proteína. Por ejemplo, Silbering y col., patente de Estados Unidos Nº 4.696.812 describe el uso de niveles bajos de solución salina y glicerol para reducir la desnaturalización de la trombina en solución. Nishimaki y col., patente de Estados Unidos Nº 5.130.244 describe una solución acuosa de trombina que contiene un azúcar y un aminoácido como estabilizantes.

A pesar de estos avances, sigue existiendo la necesidad en la técnica de preparaciones de trombina que pueden almacenarse durante periodos prolongados de tiempo en forma líquida.

Sumario de la invención La presente invención proporciona composiciones estables en almacenamiento de trombina de acuerdo con la reivindicación 1 y procedimientos y kits relacionados. Las trombinas para su uso en la invención incluyen, sin limitación, trombina humana, trombina humana recombinante, y trombina bovina.

En un aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende trombina, una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcohol bencílico y clorobutanol, y del 0, 10 % al 5, 0 % (p/v) de sacarosa en solución acuosa. En ciertas realizaciones, la composición comprende adicionalmente uno o más de un tampón, una sal, un poliol, un tensioactivo, un aminoácido, o un carbohidrato adicional. En otra realización, el conservante es alcohol bencílico. En una realización relacionada, el conservante es alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % - 1, 5 %, v/v. En otra realización, la composición comprende adicionalmente manitol. En una realización relacionada, el manitol y la sacarosa están presentes en la composición a una proporción manitol:sacarosa mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) .

En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición que comprende trombina, un tampón farmacéuticamente aceptable, del 0, 10 % al 5 % (p/v) de sacarosa, y un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % al 1, 5 % (v/v) o clorobutanol a una concentración del 0, 4 % al 0, 6 % (p/v) , en solución acuosa a pH 5, 7 - 7, 4. En una realización, el conservante es alcohol bencílico. En una realización relacionada, el conservante es alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % - 1, 0 %, v/v. En otras realizaciones, la concentración de sacarosa es del 0, 5 % al 3, 0 % (p/v) o aproximadamente el 1 % (p/v) . En otras realizaciones, el tampón se selecciona entre el grupo compuesto por los tampones histidina, citrato, fosfato, Tris, succinato, y acetato. En otra realización, la composición comprende adicionalmente manitol. En una realización relacionada, el manitol y la sacarosa están presentes en la composición a una proporción de manitol:sacarosa mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) . En otra realización, el diluyente comprende cloruro sódico. En realizaciones adicionales, la trombina está presente en una concentración de 0, 1 mg/ml a 5, 0 mg/ml o una concentración de 0, 3 mg/ml a 3, 0 mg/ml.

En un tercer aspecto de la invención se proporciona una composición acuosa que consta esencialmente de 0, 03 mg/ml a 1, 6 mg/ml de trombina, del 0, 17 % al 1, 3 % (p/v) de sacarosa, del 1, 1 % al 1, 6 % (p/v) de manitol, del 0, 8 % al 2, 0 % (p/v) de NaCl, CaCl2 0 - 1, 6 mM, del 0, 001 % al 0, 32 % (p/v) de un tensioactivo o polietilenglicol de alto peso molecular, un tampón farmacéuticamente aceptable, y una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcohol bencílico y clorobutanol en solución acuosa a pH 5, 7 - 7, 4. La concentración del tampón se selecciona para proporcionar un pH aproximadamente fisiológico tras la aplicación de la composición en un entorno quirúrgico, y la proporción de manitol:sacarosa es mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) . En una realización, la proporción de manitol a sacarosa es 1, 33:1 (p/p) . En otras realizaciones, la proporción molar de sacarosa:trombina es de al menos 700:1 o al menos 2.000:1. En otra realización, el conservante es alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % al 1, 5 % (v/v) .

En un cuarto aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento para preparar una solución estabilizada de trombina que comprende las etapas de (a) proporcionar una composición liofilizada que comprende trombina y una cantidad de sacarosa suficiente para estabilizar la proteína en presencia de una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcohol bencílico y clorobutanol, (b) proporcionar un diluyente que comprende una cantidad bacteriostáticamente eficaz de alcohol bencílico o clorobutanol en agua, y (c) combinar la composición liofilizada y el diluyente para formar una solución, en la que la concentración de sacarosa en la solución es del 0, 10 % al 5, 0 % (p/v) . En ciertas realizaciones, la composición liofilizada comprende adicionalmente un tampón, una sal, o un poliol.

En un quinto aspecto de la invención se proporciona un procedimiento para preparar una solución estabilizada de trombina que comprende las etapas de (a) proporcionar una composición liofilizada que comprende trombina y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, y (b) reconstituir la composición liofilizada en un diluyente para proporcionar una solución de trombina farmacéuticamente aceptable, en la que el diluyente se selecciona para proporcionar en la solución una concentración de alcohol bencílico del 0, 8 % al 1, 5 % (v/v) y una concentración de sacarosa del 0, 10 % al 5 % (p/v) . En una realización, la solución comprende adicionalmente manitol. En una realización relacionada, la solución comprende manitol y el manitol y la sacarosa están presentes en la solución a una proporción de manitol:sacarosa mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) .

En un sexto aspecto de la invención se proporciona un kit que comprende (a) un diluyente farmacéuticamente aceptable que comprende una cantidad bacteriostáticamente eficaz de alcohol bencílico o clorobutanol en agua en un primer recipiente sellado, y (b) una composición liofilizada... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende: trombina; una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado entre el grupo compuesto por alcohol

bencílico y clorobutanol; y del 0, 10 % al 5, 0 % (p/v) de sacarosa en solución acuosa. 2. La composición de la reivindicación 1 que comprende adicionalmente uno o más de un tampón, una sal, un poliol,

un tensioactivo, un aminoácido o un carbohidrato adicional.

3. La composición de la reivindicación 1 en la que el conservante es alcohol bencílico y en la que preferiblemente el alcohol bencílico está presente a una concentración del 0, 8 % - 1, 5 % (v/v) . 4. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende adicionalmente: un tampón farmacéuticamente aceptable, en la que el conservante se selecciona entre el grupo compuesto por alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % al 1, 5 %

(v/v) o clorobutanol a una concentración del 0, 4 % al 0, 6 % (p/v) y la solución acuosa está a pH 5, 7 - 7, 4. 5. La composición de la reivindicación 4 en la que

(1) el conservante es alcohol bencílico, y en la que preferiblemente la concentración de alcohol bencílico es del 0, 8 % al 1, 0 % (v/v) ;

(2) la concentración de sacarosa es del 0, 5 % al 3, 0 % (p/v) , preferiblemente de aproximadamente el 1 % (p/v) ;

(3) el tampón se selecciona de entre el grupo compuesto por los tampones histidina, citrato, fosfato, Tris, succinato y acetato; y/o

(4) el diluyente comprende cloruro sódico. 6. La composición de la reivindicación 1 o reivindicación 4, que comprende adicionalmente manitol, en la que

preferiblemente el manitol y la sacarosa están presentes en una proporción de manitol:sacarosa mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) . 7. La composición de la reivindicación 1 o reivindicación 4, en la que la trombina es trombina humana, trombina

humana recombinante o trombina bovina.

8. La composición de la reivindicación 4, en la que la trombina está presente a una concentración de 0, 1 mg/ml a 5, 0 mg/ml o una concentración de 0, 3 mg/ml a 3, 0 mg/ml. 9. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 que consta esencialmente de: 0, 03 mg/ml a 1, 6 mg/ml de trombina; del 0, 17 % al 1, 3 % (p/v) de sacarosa; del 1, 1 % al 1, 6 % (p/v) de manitol; del 0, 8 % al 2, 0 % (p/v) de NaCl; CaCl2 0-1, 6 mM, del 0, 001 % al 0, 32 % (p/v) de un tensioactivo o polietilenglicol de alto peso molecular; un tampón

farmacéuticamente aceptable; y una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado de entre el grupo compuesto por alcohol bencílico y clorobutanol, en solución acuosa a pH 5, 7 - 7, 4, en la que la concentración del tampón se selecciona

para proporcionar un pH aproximadamente fisiológico tras la aplicación de la composición en un entorno quirúrgico y en la que la proporción de manitol:sacarosa es mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) . 10. La composición de la reivindicación 9 en la que:

(1) la proporción de manitol a sacarosa es 1, 33:1 (p/p) ;

(2) la proporción molar de sacarosa:trombina es de al menos 700:1;

(3) la proporción molar de sacarosa:trombina es de al menos 2000:1; y/o

(4) el conservante es alcohol bencílico a una concentración del 0, 8 % al 1, 5 % (v/v) .

11. Un procedimiento para preparar una solución estabilizada de trombina que comprende:

proporcionar una composición liofilizada que comprende trombina y una cantidad de sacarosa suficiente para estabilizar la proteína en presencia de una cantidad bacteriostáticamente eficaz de un conservante seleccionado de entre el grupo compuesto por alcohol bencílico y clorobutanol;

proporcionar un diluyente que comprende una cantidad bacteriostáticamente eficaz de alcohol bencílico o clorobutanol en agua; y

combinar la composición liofilizada y el diluyente para formar una solución, en donde la concentración de sacarosa en la solución es del 0, 10 % al 5, 0 % (p/v) , en el que preferiblemente la composición liofilizada comprende adicionalmente un tampón, una sal o un poliol.

12. Un procedimiento para preparar una solución estabilizada de trombina que comprende:

proporcionar una composición liofilizada que comprende trombina y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable; y

reconstituir la composición liofilizada en un diluyente para proporcionar una solución de trombina farmacéuticamente aceptable, en donde el diluyente se selecciona para proporcionar en la solución una concentración de alcohol bencílico del 0, 8 % al 1, 5 % (v/v) y una concentración de sacarosa del 0, 10 % al 5 % (p/v) .

13. El procedimiento de la reivindicación 12 en el que la solución comprende adicionalmente manitol y en el que preferiblemente el manitol y la sacarosa están presentes en la solución en una proporción de manitol:sacarosa mayor de 1:1 pero no mayor de 2, 5:1 (p/p) .

14. Un kit que comprende:

un diluyente farmacéuticamente aceptable que comprende una cantidad bacteriostáticamente eficaz de alcohol bencílico o clorobutanol en agua en un primer recipiente sellado; y

una composición liofilizada que comprende trombina y una cantidad de sacarosa en un segundo recipiente sellado, en donde la cantidad de sacarosa se selecciona para proporcionar una concentración de sacarosa del 0, 10 % al 5, 0 % (p/v) tras la reconstitución de la composición liofilizada con el diluyente.

15. El kit de la reivindicación 14 en el que:

(1) el diluyente comprende adicionalmente NaCl y es preferiblemente solución salina bacteriostática;

(2) el kit comprende adicionalmente un medio para transferir el diluyente desde el primer recipiente sellado hasta el segundo recipiente sellado;

(3) el kit comprende adicionalmente una hoja de instrucciones;

(4) el kit comprende adicionalmente un dispositivo aplicador en el que preferiblemente el dispositivo aplicador es una jeringa o un pulverizador; y/o

(5) el primer y el segundo recipientes sellados están envasados en un tercer recipiente.

16. Un composición farmacéutica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en el tratamiento de un trastorno hemostático.