Procedimiento para la preparación de 1,5-bis(4-hidroxi-3-metoxi-fenil)-penta-1,4-dien-3-ona.

Procedimiento para la preparación de 1,5-bis(4-hidroxi-3-metoxifenil)-penta-1,

4-dien-3-ona, caracterizado porque comprende las etapas siguientes:

a. poner en contacto vainillina y acetona en una relación molar de 2:1 bajo una irradiación ultrasónica de 25 a 40 kHz a una temperatura comprendida entre 25ºC y 60ºC durante de 1 a 3 horas;

b. mezclar la mezcla de reacción en agua/hielo hasta obtener un producto bruto;

c. disolver el producto bruto en una solución de hidróxido de sodio o potasio al 10-30%;

d. filtrar;

e. tratar el filtrado con una solución de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico al 10-30%;

f. filtrar;

g. lavar el filtrado sucesivamente con agua hasta que se alcanza un pH neutro; y

h. repetir las etapas (e) a (g), hasta la purificación total del producto.

Procedimiento para la preparación de 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxi-fenil) -penta-1, 4-dien-3-ona.

La presente patente de invención se refiere a un un nuevo procedimiento para la preparación de 1, 5-bis (4-hidroxi-3metoxi-fenil) -penta-1, 4-dien-3-ona con actividad antitumoral.

Referencias bibliográficas sobre el compuesto 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) -penta-1, 4-dien-3-ona y sus derivados, y sobre su procedimiento de preparación.

El compuesto denominado 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) -penta-1, 4-dien-3-ona se conoce desde el año 1927, desde que E. Glaser y E. Tramer documentaron por primera vez su síntesis con un rendimiento del 60% (Journal für praktische Chemie, 116, 331-346, 1927) a partir de vainillina y acetona en presencia de ácido clorhídrico concentrado, utilizado como catalizador.

Además, P. Ramanan y M. Rao sintetizaron este producto en 1989 (Indian Journal Pharm. Sci., 51, 207, 1989) a partir de 4-O-metoximetilvainillina y acetona en un medio alcalino, obteniendo un rendimiento del 42% después de su purificación mediante cromatografía en capa fina (gel de sílice) .

En 1997, un grupo integrado por S. Sardjiman et al. (Eur. Journal Med. Chem., 32, 625-630, 1997) desarrolló una nueva variante de síntesis con cantidades equimoleculares de vainillina y acetona en presencia de ácido clorhídrico concentrado, y documentaron un rendimiento bruto del 89% (sin purificación) . Por esta razón, el punto de fusión que se indicó en este procedimiento fue 58ºC inferior al indicado por Glaser y Tramer.

M. Artico et al. también obtuvieron esta sustancia al cabo de un año (Journal Med. Chem. 41, 3948-3960, 1998) , con un rendimiento muy bajo de sólo el 18%. La temperatura de fusión (114-116ºC) es menor que la indicada por Glaser y Tramer, lo que hace pensar que el compuesto obtenido no era puro a pesar de la aplicación de cromatografía de columna.

Además, en la revisión bibliográfica podemos encontrar el artículo de la patente US (patente US nº 4.521.629, del 4 de junio de 1985) , de N. Cortese et al., titulado: “Method for the preparation of 1, 5-bis-ar y l-1, 4-pentadien-3-ones”. Dicha invención da a conocer un procedimiento para la preparación de determinadas bis-arilpentadienonas fluoradas, que se utilizan como compuestos intermedios para la preparación de amidinohidrazonas sustituidas insecticidas, pero no protege los productos que aparecen en la presente solicitud de patente.

Además, se han encontrado los siguientes documentos de otras patentes relacionadas con esta familia de compuestos orgánicos:

1. “Hair tonics containing bis (hydroxyphenyl) pentadienones”. Autores de la patente: Morita, Kazuyoshi; Hamada, Kazuto. Empresa: Kanebo, Ltd, Japón. País: Japón. Kokai Tokyo Koho, 7 p. Lengua: japonés. Número de solicitud CA: 134: 183278. PI: JP 2001048756, A2 20010220 JP 1999-224982 19990809.

2. “Skin-lightening cosmetics containing distyr y l ketones”. Autor: Morita, Kazuyoshi. Empresa: Kanebo, Ltd., Japón. País: Japón. Kokai Tokyo Koho, 7 p. Lengua: japonés. Número de solicitud CA: 131:149078. PI: JP 11209235 A2 19990803 JP 1998-10414 19980122.

3. “Acidic planting baths and methods for electrodepositing bright and ductile zinc-nickel alloys and additive composition for these baths”. Empresa: McGean-Rohco, Inc., USA. Autor: Canaris, Valerie M. País: USA., 8

p. Lengua: inglés. Número de solicitud CA: 111:183131. PI: US 4832802 A 19890523 US 1988-206017 19880610 EP 346161 A1 19891213 EP 1989-305925 19890612.

4. “Photopolymerizable compositions”. Empresa: Eastman Kodak Co., USA. Autores: Noonan, John M.; McConkey, Robert C.; Arcesi, J.A.; Rauner; Frederick J. País: Gran Bretaña, 19 p. Lengua: inglés. PI: GB 1425476 A 19760218 GB 1973-3986 19730322 US 3748133 A 19730724 US 1972-237929 19720324.

Ninguna de estas cuatro patentes se refiere directa ni indirectamente a las propiedades antiproliferativas mostradas por la 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) -penta-1, 4-dien-3-ona y sus derivados.

La presente patente de invención da a conocer las propiedades antitumorales de la 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) penta-1, 4-dien-3-ona y sus derivados, y un procedimiento para su preparación.

La muestra denominada compuesto 37/01 se obtuvo con un rendimiento y una pureza elevados mediante la técnica de ultrasonidos, y presentaba actividad citostática (inhibición del crecimiento) en las concentraciones evaluadas y actividad citotóxica (muerte celular) a partir de una concentración de 0, 25 !g/ml frente a nueve tipos diferentes de cánceres humanos. Dicho compuesto tiene una LD50 igual a 8, 54 g/kg. Esto significa que este producto se puede considerar prácticamente no tóxico. La doxorrubicina, un fármaco anticarcinógeno que se utiliza como referencia en todos estos ensayos, es un producto extremadamente tóxico (LD50 de 20 mg/kg) y que no inhibe el crecimiento de la línea celular NCI-ADR de cáncer de mama (la que expresa el fenotipo de resistencia frente a diversos fármacos) , por lo que el producto de los presentes inventores presentaba una fuerte actividad citostática.

: R1=CH3; R2=H; R3=H; R4=H; R5=H; X=O EHB1 : R1=CH3; R2=H3CCO; R3=H; R4=H; R5=H; X=O HB6 : R1=CH3; R2=CH2CH=C (CH3) 2; R3=H; R4=H; R5=H; X=O

HBM1 : R1=CH3; R2=CH3; R3=H; R4=H; R5=H; X=O HB5 : R1 = CH3; R2=H; R3=H; R4=H; R5=H; X=C (CN) 2 HB10 : R1=CH3; R2=H; R3=CH2CH=C (CH3) 2; R4=H; R5=H; X=O HB11 : R1=CH3; R2=H; R3=H; R4=H; R5=H; X=C (CN) CO2C2H5 HB12 : R1=H; R2=H; R3=H; R4=H; R5=H; X=O

HB13 : R1=CH3; R2=H; R3=Br; R4=H; R5=H; X=O HB14 : R1=CH3; R2=CH2CH=C (CH3) 2; R=Br; R4=H; R5=H; X=O HB15 : R1=H; R2=H; R3=CH2CH=C (CH3) 2; R4=CH2CH=C (CH3) 2; R5=H; X=O

Actividad antitumoral mostrada por los compuestos sintetizados.

Leyenda: NCI460 (tumor pulmonar) ; UACC62 (melanoma) ; MCF7 (tumor de mama normal) ; NCI ADR (tumor de mama que expresa resistencia fenotípica a diversos fármacos) ; HT29 (tumor de colon) ; 786-O (tumor renal) ; OVCAR- 3 (tumor de ovario) ; PC-3 (tumor de próstata) ; K-562 (leucemia) ; ED50 (dosis efectiva en el 50, expresada en microgramos por mililitro, !g/ml) .

Compuesto ED50 determinada en líneas celulares humanas (!g/ml)

UACC-62 MC-7 NCI-ADR 786-O NCI-460 K-562 PC-03 OVCAR-03 HT29

37 0, 03 0, 04 0, 27 0, 65 0, 5 0, 6 0, 41 0, 72 0, 75

EHB1 1, 77 0, 45 1, 28 0, 27 0, 7 0, 58 0, 39 0, 57 0, 61

HB6 14, 16 8, 43 3, 34 3, 64 15, 8 2, 22 27, 99 14 1, 87

HBM1 0, 75 0, 71 0, 84 1, 19 0, 66 0, 65 0, 82 0, 82 0, 86

HB5 1, 25 1, 96 1, 11 2, 67 2, 58 2, 84 1, 59 43 1, 26

Observaciones:

Todos estos resultados pueden considerarse excelentes tomando como referencia los publicados en la 30 bibliografía:

Banskota A.H. et al., Chemical Constituents of Brazilian propolis and their cytotoxic activities; J. Nat. Prod. 61, 896-900, 1998.

Banskota A.H. et al., Two Novel Cytotoxic Benzofuran Derivatives from Brazilian propolis; J. Nat. Prod. 63, 12771279, 2000.

Kimoto T. et al., Apoptosis and Suppression of tumor growth by Artepillin C extracted from Brazilian Propolis; Cancer Detect. Prev. 22 (6) , 505-15, 1998.

Se observa que la mayoría de los productos de los presentes inventores presentaban una fuerte acción antiproliferativa en intervalos de concentración (en ppm) muy inferiores a los mostrados por algunos de los compuestos aislados de los propóleos brasileños.

Citotoxicidad de algunos compuestos aislados de propóleos brasileños por Banskota y Kimoto.

Nombre del compuesto HT-1080 Colon L5-26

1 ácido 3-hidroxi-2, 2-dimetil-8-prenilcroman-6-propenoico 71, 53 77, 07

2 ácido 2, 2-dimetil-8-prenil-2H-1-benzopiranbenzopiren-6-il-2-propenoico 46, 86 50, 22

3 ácido 3, 5-diprenil-4-hidroxicinámico 45, 47 59, 32

4 ácido 4-dihidrocinamoiloxi-3-prenilcinámico 25, 94 77, 90

Debe apreciarse que los productos obtenidos el equipo de los presentes inventores consisten en materias primas del proyecto de investigación de los presentes inventores, de las que estamos obteniendo nuevos derivados, guiados por el principio de analogía y los resultados de las predicciones por TOPS-MODE.

Curvas Respuesta a la concentración de los compuestos ensayados:

El compuesto 37, obtenido por medio de un procedimiento de síntesis orgánica, presentaba una actividad citostática (inhibición del crecimiento) para todas las líneas celulares y actividad citotóxica (muerte celular) para NCI460 (pulmón) , UACC62 (melanoma) y MCF7 (mama) y NCI-ADR (mama resistente) a partir de 0, 25 !g/ml, en los primeros ensayos antitumorales realizados en CPQBA, UNICAMP, 24 de septiembre... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la preparación de 1, 5-bis (4-hidroxi-3-metoxifenil) -penta-1, 4-dien-3-ona, caracterizado porque comprende las etapas siguientes: 5

a. poner en contacto vainillina y acetona en una relación molar de 2:1 bajo una irradiación ultrasónica de 25 a 40 kHz a una temperatura comprendida entre 25ºC y 60ºC durante de 1 a 3 horas;

b. mezclar la mezcla de reacción en agua/hielo hasta obtener un producto bruto; 10

c. disolver el producto bruto en una solución de hidróxido de sodio o potasio al 10-30%;

d. filtrar; 15 e. tratar el filtrado con una solución de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico al 10-30%;

f. filtrar;

g. lavar el filtrado sucesivamente con agua hasta que se alcanza un pH neutro; y 20

h. repetir las etapas (e) a (g) , hasta la purificación total del producto.