Uso, ex vivo, de un compuesto de fórmula (I): **Fórmula**

en la que:

R3 es hidrógeno o un sustituyente de grupo arilo o R3 es un soporte sólido opcionalmente unido a través de unespaciador;

Z representa un átomo de oxígeno, un átomo de azufre o NR4;

Y representa un átomo de oxígeno, un átomo de azufre o NR5;

en las que R4 y R5, que pueden ser iguales o diferentes, representan hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido quecontiene de 1 a 6 átomos de carbono, fenilo opcionalmente sustituido, bencilo opcionalmente sustituido o β-feniletiloopcionalmente sustituido;

uno de X1 y X2 representa un átomo de nitrógeno y el otro de X1 y X2 representa un átomo de nitrógeno o CR6, en elque R6 representa hidrógeno o un sustituyente de grupo arilo;

y en la que:

R1 representa un grupo -(CH2)m-Q1, en el que m es desde 0 hasta 7, y Q1 representa -NR11R12, en el que R11 y R12junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo opcionalmente sustituido; yR2 representa un grupo -(CH2)n-Q2, en el que n es desde 0 hasta 7, y Q2 representa -CR21R22R23 o -NR21R22, en losque R23 representa hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, y R21, R22, junto con el átomo de carbono onitrógeno al que están unidos, forman un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o heterocicloalquiloopcionalmente sustituido;

"sustituyente de grupo arilo" se refiere, a menos que se defina lo contrario, a un hidroxilo, amino, alquilo, halógeno,hidroxialquilo, amida, acilo, acilamino, alcoxilo, alcoxicarbonilo, alquilendioxilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquiltio,aroílo, aroilamino, arilo, arilalcoxilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquiltio, ariloxilo, ariloxicarbonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo,

ariltio, carboxilo (o un bioisóstero ácido), ciano, heteroaroílo, heteroarilo, heteroarilaquiloxilo, heteroaroilamino,heteroariloxilo, nitro, oxo o trifluorometilo;

para la unión por afinidad de una proteína priónica.

Triazinas sustituidas como ligandos de proteínas priónicas y su uso para detectar o eliminar priones

Campo de la invención

Esta invención se refiere al campo de interacciones proteína-ligando y más particularmente a compuestos que se unen a proteínas priónicas (“ligandos de proteínas priónicas”) y a métodos de uso de los compuestos para detectar o eliminar priones de las muestras biológicas.

Antecedentes de la invención

La proteína priónica nativa o celular “PrPc” está ampliamente distribuida en todos los mamíferos y tiene una estructura de proteína y una secuencia de aminoácidos particularmente bien conservadas. Se piensa que los priones infecciosos están compuestos por una forma modificada de la proteína priónica celular normal (PrPc) y se denominan “PrPsc”. Los priones tienen algunas propiedades en común con otros patógenos infecciosos, pero no parecen contener ácido nucleico. En cambio, se propone que está implicado un cambio conformacional tras la traducción en la conversión de PrPc no infecciosa en PrPsc infecciosas durante el cual las hélices a se transforman en láminas 1. PrPc contiene tres hélices a y tiene una estructura de láminas 1 pequeñas; por el contrario, PrPsc es rica en láminas 1. Se cree que la conversión de PrPc en PrPsc conduce al desarrollo de encefalopatías espongiformes transmisibles (TSE) durante las que se acumula PrPsc en el sistema nervioso central (SNC) y van acompañadas por cambios neuropatológicos y disfunción neurológica. PrPsc, denominado a menudo la forma de “tembladera” de la proteína priónica, se considera necesario y posiblemente suficiente para la transmisión y patogénesis de estas enfermedades neurodegenerativas transmisibles de animales y seres humanos.

Los ejemplos específicos de TSE incluyen tembladera, que afecta a ovejas y cabras; encefalopatía espongiforme bovina (BSE) , que afecta al ganado; encefalopatía transmisible del visón; encefalopatía espongiforme felina; y enfermedad consuntiva crónica (CWD) de ciervo mulo, ciervo de cola blanca, ciervo de cola negra y alce. En seres humanos, las enfermedades de TSE pueden presentarse como kuru, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) , síndrome de Gerstmann-Straüssler-Scheinker (GSS) , insomnio letal y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob variante (CJDv) . CJDv surgió recientemente en seres humanos como resultado de la epidemia de BSE en Gran Bretaña y se produjo lo más probablemente por el consumo de productos alimenticios derivados de ganado infectado con BSE o “enfermedad de las vacas locas”. Un número desconocido de personas en el RU ingirió alimento potencialmente contaminado con tejido nervioso de ganado infectado con BSE durante de mediados de la década de 1980 a principios de la década de 1990. Debido a que el periodo de incubación para la enfermedad contraída por vía oral puede ser de más de 20 años en seres humanos, la verdadera incidencia de CJDv puede no ser evidente durante muchos años. Hasta la fecha, se sabe que más de 150 personas han contraído la enfermedad, principalmente en el RU; sin embargo, se han notificado casos en Canadá, Francia, Hong Kong, Irlanda, Italia y los EE.UU. La exportación de productos alimenticios bovinos contaminados del RU a todo el mundo indica una posible presencia global de BSE y por tanto la probabilidad de CJDv. La detección de BSE en la mayoría de los países europeos, Canadá, EE.UU., Japón e Israel concuerda con estas observaciones. Por consiguiente, la capacidad de detectar y eliminar proteína priónica infecciosa de una variedad de materiales incluyendo productos alimenticios es de gran importancia.

Históricamente, el diagnóstico de TSE se basó en la aparición de signos clínicos de la enfermedad y pudo confirmarse sólo mediante examen histológico cadavérico de tejido cerebral. Una característica de todas las TSE es la falta de una respuesta inmunitaria del huésped medible al agente. Por tanto, no se producen anticuerpos y no puede usarse una prueba serológica convencional para identificar animales infectados. Recientemente, la identificación de una proteína priónica en el cerebro ha mejorado la capacidad de obtener un diagnóstico de enfermedad.

Además de la ingestión de productos infectados de origen bovino, la transfusión de sangre y el trasplante de órganos representan otro posible modo de transmisión de CJDv entre seres humanos. Se han producido dos casos sospechosos de transmisión de CJDv por transfusión de sangre en el RU. Actualmente se desconoce la infectividad de CJDv en seres humanos por transfusión de sangre, pero existe una preocupación creciente de que esto pueda ser un medio más eficaz de transmisión de CJDv en comparación con la ingestión. Esto concuerda con datos de modelos animales experimentales incluyendo transmisión a partir de ovejas. A diferencia de otras TSE humanas, PrPsc está presente en el sistema linforreticular de pacientes con CJDv, aumentando así la probabilidad de que el agente infeccioso esté en la sangre y de su transmisión a través de la transfusión de sangre. Otros factores que aumentan la preocupación con respecto al riesgo de transmisión por transfusión incluyen el número desconocido, pero presumiblemente alto de personas expuestas a BSE y la falta de una prueba de diagnóstico preclínico para CJDv. Además, la virulencia de CJDv parece aumentarse tras la adaptación de especies en primates y ratones, lo que sugiere que la transmisión de ser humano a ser humano puede ser más eficaz que de vaca a ser humano. Por tanto, existe una necesidad urgente de métodos para evitar la transmisión de CJDv por transfusión de sangre. Tales medidas pueden incluir una identificación temprana de donantes infectados y la eliminación e inactivación de agentes de TSE en alimento derivado de animales y productos sanitarios destinados para el consumo o aplicaciones en animales o seres humanos, productos derivados de sangre bovina y humana y trasplantes de órganos. Desgraciadamente, PrPsc es notablemente resistente a métodos químicos y fisicos de inactivación, y un método de inactivación selectivo es difícil de obtener.

La eliminación de priones a través de la interacción específica con ligandos parece más prometedora. Ya se han identificado varios ligandos que se unen a proteínas priónicas. Se han examinado bibliotecas combinatorias de péptidos para ligandos que se unen a la secuencia de repetición octapeptídica (PHGGGWGQ) encontrada en todas las proteínas priónicas de mamíferos conocidas y se descubrió una serie de ligandos, tal como se describe en el documento WO 01/77687. Otros materiales incluyen una variedad de polímeros, por ejemplo polimetacrilato de amino de TosoBioSep, generalmente resinas de intercambio iónico (véase la patente estadounidense n.º 5.808.011 de Gawr y l et al) , ligandos que interaccionan con placa amiloide por ejemplo rojo Congo (Ingrosso et al, J. Virology 69:506-508 (1995) ) , 4-yodo, 4-desoxidoxorubicina (Tagliavini et al, Science 276:1119-1122 (1997) ) , anfotericina B, porfirinas y ftalocianinas (Priola et al, Science 287:1503-1506 (2000) ) , metales (Stockel et al, Biochemistr y , 37, 71857193 (1998) ) , péptidos que interaccionan con PrP para formar complejos (véase la patente estadounidense 5.750.361 de Prusiner et al y Soto et al, Lancet, 355:192-197 (2000) ) , heparina y otros polianiones polisulfatados (Caughey et al, Binding of the Protease-sensitive form of prion protein PrP to Sulphated Glycosaminoglycan and Congo Red, J. Virology 68:2135-2141 (1994) ) , anticuerpos (Kascsak et al, Immunological Invest. 26:259-268 (1997) ) , y otras proteínas, por ejemplo plasminógeno (Fischer et al, Nature 408:479-483 (2000) ) . Actualmente, no se ha caracterizado completamente ningún ligando ni se ha encontrado que pueda unirse a priones a partir de una amplia variedad de medios, aunque algunos pueden ser útiles en circunstancias específicas (véase la patente estadounidense n.º 5.808.011 de Gawr y l et al) . En E. N. Soto Renou et al, Journal of Molecular Recognition 2004, 17, 248-261, se dan a conocer ligandos de afinidad para proteínas criónica.

Hasta la fecha, las enfermedades de TSE humanas son mortales en un 100%. Desgraciadamente, aún cuando se han notificado varios compuestos incluyendo anfotericinas, polianiones sulfatados, colorante rojo Congo y antibióticos de antraciclina como agentes terapéuticos prospectivos, todos han demostrado sólo un potencial moderado para impedir la propagación priónica, y ninguno ha demostrado tener algún efecto sobre la eliminación de priones preexistentes de un huésped infectado. Por tanto, sigue habiendo una necesidad urgente de nuevos... [Seguir leyendo]

1. Uso, ex vivo, de un compuesto de fórmula (I) :

en la que:

R3 es hidrógeno o un sustituyente de grupo arilo o R3 es un soporte sólido opcionalmente unido a través de un 10 espaciador;

Z representa un átomo de oxígeno, un átomo de azufre o NR4;

Y representa un átomo de oxígeno, un átomo de azufre o NR5;

en las que R4 y R5, que pueden ser iguales o diferentes, representan hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, fenilo opcionalmente sustituido, bencilo opcionalmente sustituido o 1-feniletilo opcionalmente sustituido;

uno de X1 y X2 representa un átomo de nitrógeno y el otro de X1 y X2 representa un átomo de nitrógeno o CR6, en el que R6 representa hidrógeno o un sustituyente de grupo arilo;

y en la que:

R1 representa un grupo - (CH2) m-Q1, en el que m es desde 0 hasta 7, y Q1 representa -NR11R12, en el que R11 y R12 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo opcionalmente sustituido; y R2 representa un grupo - (CH2) n-Q2, en el que n es desde 0 hasta 7, y Q2 representa -CR21R22R23 o -NR21R22, en los que R23 representa hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo, y R21, R22, junto con el átomo de carbono o 30 nitrógeno al que están unidos, forman un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido;

“sustituyente de grupo arilo” se refiere, a menos que se defina lo contrario, a un hidroxilo, amino, alquilo, halógeno, hidroxialquilo, amida, acilo, acilamino, alcoxilo, alcoxicarbonilo, alquilendioxilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquiltio, aroílo, aroilamino, arilo, arilalcoxilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquiltio, ariloxilo, ariloxicarbonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, ariltio, carboxilo (o un bioisóstero ácido) , ciano, heteroaroílo, heteroarilo, heteroarilaquiloxilo, heteroaroilamino, heteroariloxilo, nitro, oxo o trifluorometilo;

para la unión por afinidad de una proteína priónica. 40

2. Método para detectar una proteína priónica en una muestra, y/o eliminar una proteína priónica de una muestra, comprendiendo el método poner en contracto la muestra con un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1.

3. Compuesto de fórmula (I) , según la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento o retardo del desarrollo de, una 45 patología asociada con priones en un sujeto humano o animal.

4. Uso de un compuesto de fórmula (I) , según la reivindicación 1, que no se une a un soporte sólido en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una patología asociada con priones.

50 5. Compuesto de fórmula (I) , según la reivindicación 1, en la que: R3 es según la reivindicación 1; X1 y X2 son ambos N;

55 Y y Z representan ambos NH; m representa 2;

Q1 representa piperidilo o piperazinilo; n representa 0 ó 2; y Q2 representa 1-piperidilo o adamantilo.

6. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en la que: R3 es según la reivindicación 1; X1 y X2 son ambos N; Y y Z representan ambos NH; m representa 2; Q1 representa piperazinilo; n representa 0; y Q2 representa norbornilo.

7. Uso o método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el compuesto de fórmula (I) es un compuesto según la reivindicación 5 o la reivindicación 6.