Procedimiento de regeneración intracelular del ácido hialurónico y composición cosmética asociada.

Una preparación cosmética que contiene vesículas liposomales cargadas con

i) ácido D-glucurónico o ácido UDP-D-glucurónico,

y

ii) N-acetil-D-glucosamina o UDP-N-acetil-D-glucosamina, mezclado con un transportador cosméticamenteaceptable.

Procedimiento de regeneración intracelular del ácido hialurónico y composición cosmética asociada

La presente invención se refiere a un procedimiento cosmético para la regeneración del ácido hialurónico en células de tejidos conectivos, comenzando desde los precursores del ácido hialurónico, ácido D-glucurónico y N-acetil-D

glucosamina, o sus derivados. Más específicamente, la invención proporciona una composición cosmética que contiene liposomas cargados con ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina, o sus derivados, en combinación con un transportador fisiológicamente aceptable.

Antecedentes de la invención

El uso de liposomas para la administración del ácido hialurónico se describe en varios documentos de patente. Por

citar algunos ejemplos, el documento WO2006122638 desvela un material de carga para su uso en dermocosmética, que contiene ácido hialurónico o sus derivados estructurados en liposomas fosfolipídicos. Los documentos WO03000190 y WO03000191 desvelan un procedimiento para la administración intraarticular del ácido hialurónico encapsulado en liposomas para el tratamiento de la osteoartritis. El documento WO9813024 desvela una formulación farmacéutica que contiene una mezcla de ácido hialurónico y liposomas.

El documento EP-A- 295 092 desvela preparaciones cosméticas que contienen vesículas liposomales cargadas con fragmentos de ácido hialurónico.

El documento US2007/077292 desvela preparaciones cosméticas que contienen vesículas liposomales cargadas con ácido hialurónico.

Descripción de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de un procedimiento eficaz para la regeneración del ácido hialurónico dentro de las células administrando, a un sujeto que lo necesite, una preparación liposomal que contiene por separado - es decir, sin unión mediante enlace químico- los precursores del ácido hialurónico, ácido Dglucurónico (GA) y N-acetil-D-glucosamina (GlcNH2) , o sus derivados. La regeneración del ácido hialurónico dentro de las células permite la reconstrucción del tejido conectivo dañado por procesos degenerativos relacionados con la

edad. Tal efecto regenerador es particularmente útil en dermatología, especialmente para el tratamiento de arrugas y envejecimiento de la piel.

Por consiguiente, en una primera realización, la invención proporciona una preparación cosmética que contiene vesículas liposomales cargadas con ácido D-glucurónico y N-acetil-D-glucosamina, o sus derivados, en combinación con un transportador cosméticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, el término “derivado” 30 indica una forma activada del ácido D-glucurónico y la N-acetil-D-glucosamina, los derivados uridin difosfo del ácido UDP-D-glucurónico y UDP-N-acetil-D-glucosamina. Los dos principios activos (GA y GlcNH2 o sus derivados) pueden cargarse en las mismas vesículas liposomales o en una mezcla de vesículas que encapsulan cualquiera de uno o los otros principios activos que pueden usarse de acuerdo con la invención. La composición también puede contener otros principios que facilitan la regeneración del ácido hialurónico dentro de las células, por ejemplo,

inhibiendo su degradación por la hialuronidasa. Preferentemente, el inhibidor de la hialuronidasa es un extracto de Echinacia angustifolia.

Las vesículas liposomales pueden ser vesículas unilaminares (VUL) o multilaminares (VML) de diverso tamaño (pequeño, mediano, grande, gigante) y pueden estar formadas por fosfolípidos o esfingolípidos, preferentemente por fosfatidilcolina; las vesículas también pueden contener principios que modulen su resistencia, viscosidad o

estabilidad.

Para cargar vesículas liposomales con ácido D-glucurónico y/o N-acetil-D-glucosamina, o sus derivados, pueden usarse procedimientos conocidos en la técnica; por ejemplo, los fosfolípidos pueden añadirse a una mezcla de los dos componentes, o por separado a cada componente individual disuelto en un medio adecuado, con agitación constante, seguido de homogeneización en turbina. En los casos en los que los componentes activos se añaden por

45 separado a las vesículas liposomales, estos se mezclan posteriormente para formar una mezcla liposomal de ambos principios activos. Una vez terminado el proceso, los liposomas pueden dispersarse en una base o en una preparación cosmética, para formar una crema, emulsión, microemulsión, pomada, gel, loción y aceite.

En una realización preferida, la preparación liposomal se dispersa en una base cosmética que contiene agua y glicerol, preferentemente en presencia de principios adicionales tales como EDTA, piroglutamato sódico, lactato

50 sódico, goma xantano o agentes espesantes similares, en condiciones adecuadas para formar un concentrado en gel.

En una realización adicional la invención proporciona el uso de las composiciones, desveladas en el presente documento, para tratamientos dermatológicos, particularmente para el tratamiento de elementos antiestéticos tales como arrugas, pliegues cutáneos, cicatrices producidas por acné, cicatrices post-traumáticas, cicatrices por

55 rinoplastia, por levantamiento de labios o rostro (mejillas y mentón) .

Descripción de la Figura 1

Electroforesis PAGEFS de cultivos de células; la flecha indica la banda de disacáridos correspondiente al ácido hialurónico;

S: solución de disacáridos indicativa de ácido hialurónico; 5 A-B: placas control;

C: placa tratada con liposomas placebo 15 mg/ml;

D: placa tratada con liposomas placebo 60 mg/ml; E-F: placas tratadas con liposomas cargados con GA y GlcNH2 a concentraciones de 0, 5 y 10 mM, respectivamente;

G-H: placas tratadas con liposomas cargados con GA y GlcNH2 a concentraciones de 5 y 50 mM, respectivamente.

Ejemplo 1 – Preparación de sistemas liposomales basados en fosfatidilcolina para la administración del ácido Dglucurónico (GA) y de la N-acetil-D-glucosamina (GlcNH2) y análisis del contenido de los principios activos.

Materiales

Fosfatidilcolina usada: FosFo LCN-DS, lecitina de soja, pureza mínima del 62%, Fancor; fosfatidilcolina del huevo (PC) , de tipo XI-E, pureza del 99%, Sigma.

Sal sódica monohidrato del ácido D-glucurónico, N-acetil-L-glucosamina, Aldrich; Colesterol, Carlo Erba.

Los liposomas se prepararon con dos procedimientos para aumentar la encapsulación del GA y GlcNH2.

Se introdujeron las siguientes variables:

• procedimiento de preparación (hidratación directa o hidratación después de la formación de una película lipídica)

• cantidad y tipo de fosfatidilcolina

• uso del colesterol

• concentraciones de soluciones del GA y GlcNH2.

Procedimiento A (hidratación directa) :

Para los lotes de 'placebo' y 'cargados' se realizó el siguiente procedimiento:

• pesar la fase lipófila y añadir la fase hidrófila (volumen final de 200 µl a 1 ml) ;

• hacer circular en un agitador vorticial hasta la dispersión completa del fosfolípido y posteriormente en una

mezcladora térmica durante 15 minutos a 25 ºC, 1400 rpm; 30 • en algunos casos mantener la dispersión a 4 ºC durante 24 horas;

• centrifugar las muestras durante 60 minutos a 4 ºC, 16400 rpm para eliminar el principio activo que no se haya encapsulado;

• separar el sobrenadante del sedimento y mantener las dos partes congeladas por separado a -20 ºC para dosificación específica posterior de los principios activos.

Mediante este procedimiento, se produjeron lotes formados por fosfatidilcolina FosFo LCN-DS; la composición de estos lotes se indica en la Tabla 1. A menos que se especifique de otra manera, el volumen de la fase hidrófila se mantuvo a 1 ml. Los lotes marcados con * se hidrataron durante 24 horas en un frigorífico antes de la centrifugación.

Tabla 1

1. Una preparación cosmética que contiene vesículas liposomales cargadas con

i) ácido D-glucurónico o ácido UDP-D-glucurónico, y ii) N-acetil-D-glucosamina o UDP-N-acetil-D-glucosamina, mezclado con un transportador cosméticamente 5 aceptable.

2. Una preparación de acuerdo con la reivindicación 1, que adicionalmente contiene un inhibidor de hialuronidasa.

3. Una preparación de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicho inhibidor de hialuronidasa es un extracto de

Echinacea angustifolia.

4. Una preparación de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, en la que las vesículas consnisten esencialmente en 10 fosfatidilcolina.

5. Una preparación de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, que está en forma de crema, emulsión, microemulsión, pomada, gel, loción o aceite.

6. Una preparación de acuerdo con la reivindicación 5, que está en forma de un gel que contiene agua y glicerol.

7. Una preparación de acuerdo con la reivindicación 6, que adicionalmente contiene EDTA, piroglutamato sódico, 15 lactato sódico y un agente espesante, preferentemente goma xantano.

8. El uso de liposomas de encapsulación

i) de ácido D-glucurónico o de ácido UDP-D-glucurónico, y ii) de N-acetil-D-glucosamina o de UDP-N-acetil-D-glucosamina, en una composición cosmética.

9. El uso de una preparación de acuerdo con las reivindicaciones 1-7, para el tratamiento cosmético no terapéutico

de arrugas, pliegues cutáneos, cicatrices por acné, cicatrices post-traumáticas, cicatrices por rinoplastia, por levantamiento de labios, mejillas o mentón.