Péptidos derivados de la proteína BPLP humana, polinucleótidos que codifican dichos péptidos y anticuerpos dirigidos contra dichos péptidos.

Un péptido que es un producto de maduración de la proteína lacrimal rica en prolina básica (BPLP) oun derivado de péptido de dicho producto de maduración,

en el que:

- el péptido o derivado de péptido presenta un propiedad inhibidora contra la metalo-ectopeptidasa NEP y/oAPN;

- dicho péptido incluye de 3 a 15 aminoácidos y se obtiene por escisión del precursor de la proteína BPLP porfurina, PC convertasas o PACE 4, y dicho derivado de péptido está derivado de dicho péptido por una a dossustituciones de aminoácidos y retiene la especificidad de unión y/o actividad f 10 isiológica de dicho péptido; y

- dicho péptido o derivado de péptido comprende la secuencia X1-X2-Arg-Phe-Ser-Arg en la que:

- X1 representa un átomo de H o un aminoácido Tyr; y

- X2 representa Gln o Glp cuando X1 es H, o X2 representa Gln cuando X1 es Tyr;

en el que dicha secuencia X1-X2-Arg-Phe-Ser-Arg es la parte del extremo C de dicho péptido o derivado depéptido.

Péptidos derivados de la proteína BPLP humana, polinucleótidos que codifican dichos péptidos y anticuerpos dirigidos contra dichos péptidos

La presente invención se refiere a péptidos derivados de la proteína BPLP humana como nuevos inhibidores de metalo-ectopeptidasas. La presente invención también se refiere a polinucleótidos que codifican dichos péptidos y a anticuerpos dirigidos contra dichos péptidos. Además, la presente invención se refiere a usos de diagnóstico y usos terapéuticos de la proteína BPLP humana, péptidos derivados de la misma y miméticos de la misma, polipéptidos que codifican la proteína BPLP humana o péptidos derivados de la misma, además de a anticuerpos dirigidos contra la proteína BPLP o péptidos derivados de la misma.

En un enfoque genómico se ha identificado un gen regulado por andrógenos, que se expresa predominantemente en la glándula submandibular (SMG) y próstata de ratas adultas (Rosinski-Chupin y col., 1988 y patente europea 0 394 424) . El gen codifica una proteína precursora, la proteína submandibular de rata 1 (SMR1) que da lugar a tres péptidos estructuralmente relacionados que maduran selectivamente a partir del precursor in vivo por escisión en sitios multibásicos por una enzima conversora de aminoácidos básica apareada (Rougeot y col., 1994) .

En un enfoque de pos-genómica y fisiómica se establecieron las bases moleculares y funcionales que proporcionaron pruebas de la existencia en mamíferos de un mensajero hormonal de la comunicación intercelular, es decir, el péptido maduro final generado a partir de la pre-prohormona SMR1: el pentapéptido de SMR1, llamado hoy en día sialorfina (de secuencia QHNPR) . Por tanto, la sialorfina es un péptido señal exocrino y endocrino cuya expresión está bajo la regulación androgénica de la activación y la secreción se provoca bajo la repuesta mediada adrenérgicamente a estrés medioambiental, en rata macho (Rougeot y col., 1997) .

El hecho de que en rata macho sexualmente madura la sialorfina regulada por andrógenos sea agudamente secretada en respuesta a estrés agudo medioambiental condujo a postular que este mediador de señalización podría desempeñar una función en alguna integración fisiológica y de comportamiento ligada a la reproducción. Por tanto, los mismos autores investigaron los efectos inducidos por la sialorfina sobre el patrón de comportamiento sexual masculino, que incluyó frecuencia y latencia de montas, intromisiones y eyaculaciones, además de interacciones socio-sexuales. Los datos obtenidos mostraron que la sialorfina tiene capacidad para modular, a dosis relacionadas con niveles en circulación fisiológicos, el patrón de apareamiento de la rata macho, es decir, ejerciendo, de un modo dependiente de la dosis un efecto facilitativo / inhibidor dual sobre el rendimiento sexual, mientras que a todas las dosis se estimula la aparente excitación o motivación sexual. Por tanto, se propone que la sialorfina regulada por andrógenos endógena ayuda a modular el equilibrio adaptativo entre mecanismos excitadores e inhibidores que sirven para la apropiada respuesta sexual de ratas macho, dependiendo del contexto.

La solicitud de patente internacional WO 01/00221 describe el uso de productos de maduración de SMR1 para el tratamiento de trastornos interpersonales y del comportamiento alterados, que incluyen defectos sexuales.

Además, estos autores descubrieron que los productos de maduración de SMR1 reconocían sitios diana específicos en órganos que participaban profundamente en la concentración de iones minerales. La solicitud de patente internacional WO 98/37100 describe el uso terapéutico de productos de maduración de SMR1 para prevenir o tratar enfermedades asociadas a un desequilibrio de iones minerales en un cuerpo humano o animal.

En respuesta a contextos estresantes, la sialorfina es agudamente liberada, rápidamente distribuida y es captada a largo plazo por sus dianas asociadas a membrana sistémicas (Rougeot y col., 1997) . Los autores han demostrado que la principal molécula de la superficie celular con la que la sialorfina se une in vivo es la metaloectoendopeptidasa anclada a membrana, NEP (endopeptidasa neutra; neprilisina EC 3.4.24.11) , o encefalinasa (Rougeot y col., 2003) . Además, se mostró que la sialorfina era un antagonista fisiológico de la actividad de NEP ex vivo; y la interacción directa de NEP y sialorfina evaluada en un ensayo in vitro usando NEP renal purificada soluble y DGNPA fluorogénico artificial (dansil-Gly- (pNO2) Phe-ßAla) como sustrato proporcionó pruebas directas de que la sialorfina inhibió la actividad de NEP (CI50 de la sialorfina: 0, 6 µM) . La sialorfina es el primer inhibidor fisiológico de la actividad de NEP-encefalinasa identificada hasta la fecha en roedor (Rougeot y col., 2003 y solicitud de patente europea EP 1 216 707) .

La NEP se localiza en la superficie de células en tejidos nervioso y sistémico, en los que desempeña una función importante como ectoenzima que cataliza el procesamiento pos-secretor o metabolismo de varios neuropéptidos y péptidos reguladores. Los principales sustratos fisiológicamente relevantes para NEP son las encefalinas, sustancia P y péptido natriurético auricular (ANP) . Estos péptidos señal de mamífero participan en el control de la percepción de dolor central y periférico, fenómenos inflamatorios, tono arterial y homeostasis mineral. Su importancia fisiológica y la función crítica de la ectoenzima NEP en modular su potencia funcional hace importante investigar y conocer su posible protección por inhibidores endógenos, desde un punto de vista fisiológico, además de fisiopatológico y terapéutico.

Usando diferentes modelos de farmacología molecular y de comportamiento los autores han mostrado que el mediador fisiológico, sialorfina, previene que la NEP espinal y renal se descomponga en sus dos sustratos fisiológicamente relevantes, la sustancia P y Met-encefalina in vitro. La sialorfina inhibió la descomposición de la sustancia P con una CI50 de 0, 4-1 µM y se comportó como un inhibidor competitivo de la NEP unida a membrana que se origina a partir de tejidos nerviosos (médula espinal) o de tejidos sistémicos (riñón, hueso, diente, placenta, próstata, GSM, intestino) . La sialorfina intravenosa in vivo provocó potentes respuestas antinociceptivas en dos modelos de rata de comportamiento de dolor agudo y tónico inducido por lesión, la prueba del dolor por alfiler (algesia mecánica) y la prueba con formalina (algesia química) . La analgesia inducida por sialorfina requirió la activación de receptores de µ-y 8-opioides, de acuerdo con la participación de receptores de opioides endógenos en la transmisión encefalinérgica. De hecho, estos receptores participan en la transmisión de las señales opioidérgicas endógenas tales como las encefalinas que se inactivan por NEP y la aminopeptidasa APN, y también del opiáceo exógeno, la morfina que interactúa principalmente con el receptor µ-opioide. Se concluyó que la sialorfina protege encefalinas endógenas liberadas tras los estímulos nociceptivos inhibiendo ecto-encefalinasas, in vivo, y, por tanto, potencia su efecto analgésico. De otro modo, el sistema opioide endógeno, en particular la ruta mediada por 8ºpioides, también se ha ligado a la etiología de comportamiento depresivo; por ejemplo, usando una modelo de análisis de desesperación del comportamiento (prueba de natación forzada) , los autores mostraron que la sialorfina muestra una actividad antidepresora significativa en rata macho. La sialorfina es el primer regulador sistémicamente activo natural de actividad de NEP identificada hasta la fecha en mamíferos. Además, la prueba fue una condición de que es un nuevo modulador fisiológico de percepción de dolor tras lesión, y puede ser el progenitor de una nueva clase de moléculas terapéuticas, como novedosos agentes antinociceptivos y antidepresores putativos (Rougeot y col., 2003; documentos EP 1.343.519 y EP 1.343.520) .

El poderoso efecto analgésico de la sialorfina está asociado a su capacidad para proteger completamente las encefalinas de la inactivación por las ectoenzimas degradadoras de encefalina. In vivo, las encefalinas son inactivadas con una extraordinaria eficiencia (en el plazo de pocos segundos) por ambas ectopeptidasas, NEP y APN. De acuerdo, los primeros inhibidores sintéticos desarrollados, que son sólo tanto específicos para NEP (tal como tioríano) como específicos para APN (tal como bestatina) , presentan un efecto antinociceptivo no significativo o débil. Por tanto, la sialorfina de rata es un... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que es un producto de maduración de la proteína lacrimal rica en prolina básica (BPLP) o un derivado de péptido de dicho producto de maduración, en el que:

- el péptido o derivado de péptido presenta un propiedad inhibidora contra la metalo-ectopeptidasa NEP y/o APN; -dicho péptido incluye de 3 a 15 aminoácidos y se obtiene por escisión del precursor de la proteína BPLP por furina, PC convertasas o PACE 4, y dicho derivado de péptido está derivado de dicho péptido por una a dos sustituciones de aminoácidos y retiene la especificidad de unión y/o actividad fisiológica de dicho péptido; y -dicho péptido o derivado de péptido comprende la secuencia X1-X2-Arg-Phe-Ser-Arg en la que:

- X1 representa un átomo de H o un aminoácido Tyr; y -X2 representa Gln o Glp cuando X1 es H, o X2 representa Gln cuando X1 es Tyr;

en el que dicha secuencia X1-X2-Arg-Phe-Ser-Arg es la parte del extremo C de dicho péptido o derivado de péptido.

2. El péptido de la reivindicación 1 que consiste en la secuencia X1-X2-Arg-Phe-Ser-Arg.

3. El péptido de la reivindicación 2, en el que dicho péptido comprende la secuencia QRFSR o YQRFSR.

4. El péptido de la reivindicación 3 que consiste en la secuencia QRFSR.

5. El péptido de la reivindicación 3 que consiste en la secuencia YQRFSR.

6. Un ácido nucleico que codifica un péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. Un vector para la clonación y/o expresión, vector que comprende un ácido nucleico de la reivindicación

6.

8. Una célula huésped que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 6 o el vector de la reivindicación 7.

9. Un anticuerpo que reconoce específicamente un péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

10. Una composición farmacéutica que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicho mimético se obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificación de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión, (v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

11. Una composición farmacéutica que comprende un polímero de un péptido según las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicho mimético se obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificaciones de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión, (v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

12. Una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico de la reivindicación 6 o un vector que expresa dicho ácido nucleico en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico que codifica la proteína BPLP o un vector que expresa dicho ácido nucleico en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de la reivindicación 9 en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

15. Una composición farmacéutica que comprende una proteína BPLP en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

16. Uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de una enfermedad en la que se busca una modulación de la actividad de una metalopeptidasa de membrana, en el que dicho mimético se obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificaciones de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión, (v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

17. El uso de la reivindicación 16, en el que la metalopeptidasa es una metalopeptidasa de cinc de membrana.

18. El uso de la reivindicación 17, en el que la metalopeptidasa es NEP o APN.

19. El uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de dolor, en el que dicho mimético se obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificaciones de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión, (v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

20. El uso de la reivindicación 19, en el que el dolor es dolor crónico, agudo, inflamatorio visceral o neuropático.

21. El uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de desequilibrio hidro-mineral, en el que dicho mimético se obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificaciones de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión,

(v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

22. El uso de la reivindicación 21 para la prevención o el tratamiento de trastornos de huesos, dientes, riñón, paratiroideos, de páncreas, intestino, estómago mucosa, próstata y de las glándulas salivales que son producidos por desequilibrio hidro-mineral.

23. El uso de la reivindicación 22, en el que el trastorno está seleccionado del grupo que consiste en hiper

o hipo-paratiroidismo, osteoporosis, pancreatitis, litiasis de las glándulas submandibulares, nefrolitiasis y osteodistrofia.

24. El uso de un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un mimético del mismo para la prevención o el tratamiento de trastorno interpersonal y del comportamiento alterado, en el que dicho mimético se

obtiene (i) por sustitución de uno o más enlaces amida por un enlace no amida, (ii) por sustitución de una o más cadenas laterales de aminoácidos por un resto químico diferente, (iii) protegiendo uno o más del extremo N, el extremo C o una o más cadenas laterales por un grupo protector, (iv) introduciendo dobles enlaces y/o ciclación y/o modificaciones de estereoespecificidad en la cadena lateral amino para aumentar la rigidez y/o afinidad de unión, (v) por medio del desarrollo de diseños de fármacos asistidos por ordenador, (vi) protegiendo los grupos hidrófilos -NH2 y COOH por esterificación con alcoholes lipófilos o por amidación y/o por acetilación o adición de cadena hidrófoba de carboxilalquilo o aromática en el extremo NH2, (vii) por retroinversión isomérica de los enlaces amida CO-NH o metilación de las funciones amida, o (viii) sustituyendo L-aminoácidos por D-aminoácidos.

25. El uso de la reivindicación 24, en el que el trastorno está seleccionado del grupo que consiste en trastorno por evitación, trastorno por disminución de la conciencia, trastorno autístico, trastorno por déficit de atención e hiperactividad, hospitalismo, funcionamiento y relación interpersonal alterada con el mundo exterior, trastorno de personalidad esquizoide, esquizofrenia, disminución del interés en el medioambiente, actividad social alterada ligada a la sexualidad y comportamiento sexual alterado.

26. El uso de la reivindicación 24, en el que el trastorno es trastorno depresivo.

27. El uso según la reivindicación 16 para la prevención o el tratamiento de artritis inflamatoria.

28. El uso según la reivindicación 16 para la prevención o el tratamiento de hipertensión.

29. El uso según la reivindicación 16, en el que el péptido actúa de agente natriurético.

30. El uso de un péptido según la reivindicación 16, en el que el péptido actúa de agente diurético.

31. El uso según la reivindicación 16 para la prevención o el tratamiento de aterosclerosis.

32. El uso según la reivindicación 16 para la prevención o el tratamiento de un tumor.

33. El uso según la reivindicación 16 para la prevención o el tratamiento de enfermedad inflamatoria del intestino.

34. El uso según la reivindicación 16 para el tratamiento de infecciones.

35. El uso según la reivindicación 16 para controlar respuestas inmuno-inflamatorias.

36. El uso según la reivindicación 16 para el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.

37. El uso según la reivindicación 36 para el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa asociada a amiloidosis.

38. Uso de un ácido nucleico de la reivindicación 6 para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de una enfermedad como se define en cualquiera de las reivindicaciones 16 a 37.

39. Uso de un anticuerpo de la reivindicación 9 para la preparación de un medicamento para la prevención

o el tratamiento de una enfermedad como se define en cualquiera de las reivindicaciones 16 a 37.

40. Un procedimiento in vitro para el pronóstico, diagnóstico o determinación de la evolución de una afección que implica una producción alterada de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, procedimiento que comprende detectar o cuantificar en una muestra biológica de un sujeto de prueba un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en comparación con la producción del mismo en una muestra biológica de un sujeto de control.

41. El procedimiento de la reivindicación 40, en el que la detección de la producción de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 se realiza poniendo en contacto una muestra biológica con un anticuerpo como se define en la reivindicación 9.

42. Un procedimiento in vitro para el pronóstico o el diagnóstico de una afección que implica una producción alterada de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, procedimiento que comprende detectar en una muestra biológica de un sujeto de prueba una

anomalía cuantitativa y/o cualitativa en el gen BPLP o en su transcrito.

43. Un procedimiento in vitro para cribar compuestos para su capacidad para unirse a NEP, que comprende las etapas de:

a) incubar un compuesto candidato con una célula que expresa NEP en presencia de un péptido que es un producto de maduración de la proteína BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; b) determinar la capacidad del compuesto candidato para competir con dicho producto de maduración para unirse a NEP.

44. El procedimiento de la reivindicación 43 que comprende las etapas de:

a) preparar un cultivo celular o preparar un espécimen de órgano o una muestra de tejido que expresa NEP; b) añadir el compuesto candidato que va a probarse en competencia con concentración de semi-saturación de producto de maduración marcado de la proteína BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; c) incubar el cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido de la etapa a) en presencia del compuesto candidato durante un tiempo suficiente y en condiciones para que tenga lugar la unión específica; d) cuantificar la marca específicamente unida al cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido en presencia de diversas concentraciones de compuesto candidato.

45. Un procedimiento para determinar la afinidad de un compuesto que se une específicamente a NEP que comprende las etapas de:

a) preparar un cultivo celular o preparar un espécimen de órgano o una muestra de tejido que expresa NEP; b) añadir el compuesto candidato que ha sido previamente marcado con una marca radiactiva o no radiactiva; c) incubar el cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido de la etapa a) en presencia del compuesto candidato marcado durante un tiempo suficiente y en condiciones para que tenga lugar la unión específica; y d) cuantificar la marca específicamente unida al cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido que expresa NEP en presencia de diversas concentraciones del compuesto candidato marcado.

46. Un procedimiento in vitro para cribar compuestos para su capacidad para actuar de agonistas o antagonistas de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 sobre la actividad de NEP, procedimiento que comprende las etapas de:

a) incubar un compuesto candidato con una célula que expresa NEP en presencia de (i) un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y (ii) un sustrato de NEP; b) determinar la endoproteólisis del sustrato de NEP por la NEP, en la que un aumento de la endoproteólisis en presencia del compuesto candidato, en comparación con la endoproteólisis en ausencia del compuesto candidato, es indicativo de una actividad de antagonista; mientras que una disminución de la endoproteólisis en presencia del compuesto candidato, en comparación con la endoproteólisis en ausencia del compuesto candidato, es indicativa de una actividad agonista.

47. El procedimiento de la reivindicación 46 para cribar un compuesto que es un agonista de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende las etapas de:

a) preparar un cultivo celular o preparar un espécimen de órgano o una muestra de tejido que expresa NEP; b) incubar el cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido de la etapa a) a concentraciones que permiten la medición de la actividad enzimática de NEP en presencia de (i) el compuesto candidato, (ii) una concentración semi-saturante del péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y (iii) un sustrato de NEP, durante un tiempo suficiente para que tenga lugar la endoproteólisis del sustrato de NEP bajo condiciones de velocidad iniciales; c) cuantificar la actividad de la NEP presente en el material biológico de la etapa a) midiendo los niveles de endoproteólisis del sustrato de NEP, respectivamente, en presencia o en ausencia del compuesto candidato y en presencia o en ausencia de dicho péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

48. El procedimiento de la reivindicación 46 para cribar un compuesto que es un antagonista del péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende las etapas de:

a) preparar un cultivo celular o preparar un espécimen de órgano o una muestra de tejido que expresa NEP; b) incubar el cultivo celular, espécimen de órgano o muestra de tejido de la etapa a) a concentraciones que permiten la medición de la actividad enzimática de NEP bajo condiciones de velocidad iniciales en presencia

de una concentración inferior a la máxima de un péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un sustrato de NEP, en presencia del compuesto candidato, durante un tiempo suficiente para que tenga lugar la endoproteólisis del sustrato de NEP bajo condiciones de velocidad iniciales; c) cuantificar la actividad de la NEP presente en el material biológico de la etapa a) midiendo los niveles de

endoproteólisis del sustrato de NEP, respectivamente, en presencia o en ausencia del compuesto candidato y en presencia o en ausencia del péptido que es un producto de maduración de la BPLP según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

49. El procedimiento de la reivindicación 47 o 48, en el que dicho cultivo celular, espécimen de órgano o

muestra de tejido está seleccionado del grupo que consiste en preparación de membrana o rebanadas de médula espinal de un mamífero, médula externa renal de mamífero, placenta, testículos, próstata o hueso, o tejidos y/o células de origen de ratón, rata o humano o líneas celulares transfectadas con ADNc de metalo-ectopeptidasa.