Nuevo clon del virus de la enfermedad de Newcastle, su fabricación y aplicación en el tratamiento médico del cáncer.

Un clon del virus de la enfermedad de Newcastle que abarca la secuencia de nucleótido del ADN de Seq.

Id. No. 1

o

según se depositó con la European Collection of Cell Cultures como Accesión número 06112101 el 21 de noviembre de 2006.

El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV - Newcastle Disease Virus) es un virus bien conocido [Diseases of poultr y , 10ª edición, editado por B.W. Calnek, Mosby International, Iowa State University Press, Ames, Iowa, 1997]. El virus es responsable de grandes pérdidas económicas en el sector avícola. Asimismo es bien sabido que existen muchas cepas del NDV (EP 0770397 B1) con una extensa gama en cuanto a la intensidad y el tipo de enfermedad provocado en las aves.

El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es clasificado como un paramixovirus-1 aviar (APMV1) , un miembro de la familia de paramixoviridae en el orden mononegavirales. Los miembros de esta familia poseen un ARN monocatenario, con una simetría elíptica. El genoma total es de aproximadamente 16.000 nucleótidos. La replicación del virus tiene lugar en el citoplasma de la célula huésped.

Esta familia está subdividida en dos subfamilias: los paramixovirinae y los pneumovirinae. En el curso de 1993, el Comité Internacional de la Taxonomía de Virus reclasificó los paramixovirus y asignó el NDV al rubulavirus genus. Los genomas de la mayoría de los rubulavirus, con excepción del NDV contienen un pequeño gen de proteína que no está presente entre otros paramixovirus. A base de las secuencias previstas para cada proteína viral, los clones NDV son agrupados filogenéticamente como un clade separado de los rubulavirus. La secuencia de edición del gen de fosfoproteína policistrónica (O) del NDV y los productos putativos del gen son más similares a los patrones de expresión entre los miembros del respirovirus y morbillivirus. Además, la estructura de la proteína de nucleocapsida se parece más estrechamente a los respirovirus. Hay nueve serotipos reconocidos entre los paramixovirus aviares que infectan en primer lugar sólo especies de aves. Estos tipos de virus son filogenéticamente diferentes del NDV, si bien se separan como un clade con NDV de los otros paramixovirus. Esta relación fue confirmada ulteriormente por un análisis filogenético de las secuencias genómicas de longitud completa.

Tal como fue la situación para muchos otros virus aviares, el NDV se ha desarrollado entre aves en forma separada de los mamíferos. Debido a ello y a base de varios factores clave, incluyendo genes y secuencias previstas de aminoácidos, los paramixovirus aviares merecen su propia designación de género entre los paramixovirinae.

La enfermedad de Newcastle (ND) es una enfermedad viral contagiosa que afecta sólo especies de aves. Los indicios clínicos son extremadamente variables en función de la cepa del virus, la especie y la edad de la ave, enfermedades concomitantes y una inmunidad preexistente.

La vacunación desempeña un papel primordial en el control de la enfermedad de Newcastle (ND) en las aves. Esto puede atribuirse en parte al hecho de que varias cepas virales vivas derivadas en forma natural y menos patogénicas y atenuadas fueron identificadas y han estado disponibles para este fin ya en la segunda mitad de los años 1940 (revisado por Lancaster, 1964) .

La variación extrema en la virulencia de diferentes clones del virus ND y el uso extenso de vacunas vivas significa que la identificación de un clon como virus de ND de pájaros que mostraron indicios clínicos no confirma un diagnóstico de ND, de modo que debe valorarse asimismo la virulencia del clon.

Las cepas de NDV han sido clasificadas de diferentes maneras por diversos autores e instituciones. Una forma temprana de la clasificación estaba basada en su patogenicidad en la que las cepas fueron clasificadas en grupos velogénicos, mesogénicos, lentogénicos y avirulentes (Hanson y Brandly, 1955) .

Varios ensayos potenciales in vitro para establecer la virulencia habitualmente relacionada con la base molecular de la patogenicidad están siendo investigados por varios grupos en el mundo. Actualmente, una valoración definitiva de la virulencia del virus suele estar basada en uno de los siguientes ensayos in vivo, si bien la definición actual de la OIE permite la valoración molecular de la virulencia.

1. La relación de tamaño de la placa y la virulencia de las cepas de NDV fue publicada por G. M. Schloer y R.P. Hanson (J Virol. 1968; 2 (1) : 40-47) . Schloer y Hanson encontraron que el tamaño de las placas del NDV estaba relacionado a la virulencia para pollos. Placas marcadamentel as grandes fueron producidas por las cepas velogénicas (alta virulencia) mientras que se encontraron placas pequeñas en las cepas mesogénicas (virulencia intermedia) . Este método fue empleado en el pasado como método para clasificar las cepas NDV por medición del tamaño de placa.

2. Tiempo medio de mortalidad en huevos. El MDT ha sido empleado para clasificar las cepas de virus ND en velogénicas (requiriendo menos de 60 horas para matar) , mesogénicas (entre 60 y 90 horas para matar) así como lentogénicas (más de 90 horas para matar) .

3. Índice de patogencidad intracerebral (ICPI) . Los virus más virulentos ofrecen índices que se acercan a la puntuación máxima de 2, 0, mientras que las cepas lentogénicas facilitan valores cercanos a 0, 0. Las cepas mesogénicas oscilan entre 0, 7 y 1, 5.

4. Índice de patogenicidad intravenosa (IVPI) . Las cepas lentogénicas y algunas cepas mesogénicas tendrán valores IVPI de 0, mientras que los índices para las cepas virulentas se acercan a 3, 0.

5. Base molecular de la patogenicidad. Durante la replicación, partículas de virus ND fueron producidas con una glucoproteína de precursor, F0, que debe ser escindida en F1 y F2 para las partículas de virus que sean infecciosas. Esta escisión post-traduccional es mediada por proteasas de la célula huésped. La tripsina es capa de escindir F0 para todas las cepas de virus ND. Parece que las moléculas de virus virulentos para pollos pueden ser escindidas por una proteasa huésped o proteasas encontradas en una extensa gama de células y tejidos, difundiéndose de este modo en el huésped entero, dañando los órganos vitales, si bien las moléculas F0 en los virus de una baja virulencia están restringidas en su sensibilidad a proteasas huésped resultante en la restricción de estos virus para crecer sólo en determinados tipos de célula huésped. La mayoría de los virus de ND que son patogénicos para pollos poseen la secuencia 112R/K-R-Q-K/R-R116 en el término C de la proteína F2 y F (fenilalanina) en el residuo 117, el término N de la proteína F 1, mientras que los virus de baja virulencia poseen secuencias en la misma región de 112G/E-K/R-Q-G/E-R116 y L (leucina) en el residuo 117. Parece ser el requisito de por lo menos un par de aminoácidos básicos en los residuos 116 y 115 más una fenilalanina en el residuo 117 y un aminoácido básico (R) en 113 si el virus debe mostrar virulencia frente a pollos. A base de estos hallazgos moleculares, la clasificación veterinaria de los virus ND ya no está dividida en tres, sino más bien en dos grupos: patogénicos y apatogénicos.

Parece que la gran mayoría de aves son susceptibles a una infección con los virus de ND de virulencia tanto elevada como baja para pollos, si bien los indicios clínicos vistos en pájaros infectados con el virus ND varían enormemente y son dependientes de factores tales como: el virus, la especie huésped, la edad del huésped la infección con otros organismos, el estrés medioambiental y el estado inmunológico. En algunas circunstancias, la infección con los virus extremadamente virulentos puede resultar en una elevada mortalidad repentina con relativamente pocos indicios clínicos. Por lo tanto, los indicios clínicos son variables e influenciados por otros factores de modo que ninguna pueda considerarse como patognomónico.

La enfermedad de Newcastle se define como una infección de aves causada por un virus del paramixovirus aviar del serotipo 1 (APMV-1) que cumple uno de los siguientes criterios de virulencia:

A) El virus posee un índice de patogenicidad intercerebral (ICPI) en pollos de un día (Gallus gallus) de 0, 7 ó mayor.

B) Los aminoácidos básicos múltiples han sido demostrados en el virus (bien directamente o bien por deducción) en el término C de la proteína F2 y la fenilalanina en el residuo 117, que es el término N de la proteína F1. El término "aminoácidos básicos múltiples" se refiere a por lo menos tres residuos de arginina o lisina entre los residuos 113 y 116. La falla de demostrar el patrón característico de los residuos de aminoácidos, tal como se describió arriba, supondría la caracterización del virus clonado por un ensayo IPCI. En esta definición, los residuos de aminoácidos son... [Seguir leyendo]

1. Un clon del virus de la enfermedad de Newcastle que abarca la secuencia de nucleótido del ADN de Seq. Id. No. 1

o según se depositó con la European Collection of Cell Cultures como Accesión número 06112101 el 21 de noviembre de 2006.

2. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer que causa la muerte de las células tumorales

o bien de una forma preventiva de terapia biológica de cáncer que destruye células cancerosas nacientes o residuales o que reduce el riesgo del desarrollo de lesiones metastásicas.

3. El uso conforme a la reivindicación 2 en el que el tratamiento con el virus es combinado con la quimioterapia, la radioterapia (radiación a, Ã? o Y, radiación de rayos X, radiación de partículas) , inmunoterapia o intervención quirúrgica.

4. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de condiciones neoplásicas sensibles a la interferona, especialmente melanoma, linfomas (non-Hodgkins) , leucemias (leucemia mieloide crónica, leucemia de células pilosas) , cáncer de mama, carcinoma de vejiga, carcinoma de células renal, cáncer de cabeza y nuca, tumores carcinoides, cánceres del conducto biliar, cáncer pancreático, mieloma múltiple, sarcoma Kaposi, así como condiciones virales y autoinmunológicas sensibles a interferona y no neoplásicas, tales como esclerosis múltiple, condylomata acuminata, hepatitis, herpes, artritis reumática, enfermedad de Behcet, enfermedad pulmonar idiopática, estomatitis aftosa, osteoporosis maligna grave, cáncer cervical o SARS.

5. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para la reducción de la percepción del color en un paciente con cáncer.

6. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para la reducción de efectos secundarios de la quimioterapia en un paciente con cáncer tratado con agentes quimioterapéuticos, siendo el medicamento conteniendo el clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 administrado al paciente de cáncer antes, junto con o después del agente quimioterapéutico.

7. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para la reducción de la radionecrosis en un paciente con cáncer tratado con radiación, siendo el medicamento conteniendo el clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 administrado al paciente de cáncer antes, junto con o después de la radioterapia.

8. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para la reducción de efectos secundarios incluyendo las secuelas agudas o crónicas de la radioterapia en un paciente con cáncer tratado con radiación, siendo el medicamento conteniendo el clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 administrado al paciente de cáncer antes, junto con o después de la radioterapia.

9. El uso de un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para mejorar la calidad de vida en un paciente con cáncer.

10. Una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer que abarca como ingrediente activo un clon del virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación 1 junto con aditivos fisiológicamente aceptables.

11. Un virus de la enfermedad de Newcastle conforme a la reivindicación que es purificado y congelado.