MÉTODO Y APARATO PARA JUZGAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE CÉLULAS CANCEROSAS.

Método y aparato para juzgar la presencia o ausencia de células cancerosas Campo de la invención La presente invención se refiere a un método y aparato para diagnosticar la presencia o ausencia de células cancerosas en una muestra que contiene células recogidas de un paciente, particularmente de un paciente que se sospecha que tiene metástasis de cáncer. Antecedentes El examen de la presencia o ausencia de células cancerosas en una muestra recogida de un paciente puede ser un indicador para el diagnóstico de metástasis de cáncer en un tejido u órgano a partir del cual se recoge la muestra. Para diagnosticar la presencia o ausencia de células cancerosas en una muestra, se han usado, de manera convencional, citodiagnósticos histológicos tales como tinción de Papanicolau. En este método, sin embargo, existen problemas tales como la diferencia en los resultados del diagnóstico debido a la experiencia de una persona que realiza el diagnóstico, la necesidad de un largo periodo de tiempo para realizar el examen y similar. Por consiguiente, se han realizado ampliamente estudios sobre diagnóstico patológico molecular de cáncer por LAMP (método de amplificación isotérmica mediada por bucle y PCR (reacción en cadena de la polimerasa). El diagnóstico patológico molecular puede realizarse detectando un gen marcador de cáncer contenido en un tejido y una célula (por ejemplo, un ARNm de una proteína expresada específicamente en una célula cancerosa (en lo sucesivo en el presente documento, denominado también simplemente marcador de cáncer)). Por ejemplo, se sabe que los ARNm de la citoqueratina 19 (CK19) y del antígeno carcinoembrionario (CEA) son eficaces como genes marcadores de cáncer para diagnosticar metástasis nodular linfática del cáncer de mama. También se sabe que un ARNm de CEA es eficaz como un marcador de cáncer para diagnosticar metástasis de cáncer de estómago. Estos marcadores de cáncer son moléculas reconocidas por ser significativamente diferentes en el nivel de expresión entre una muestra normal y una muestra que contiene células cancerosas que lo metastasizan. Un resultado de diagnóstico de la presencia o ausencia de células cancerosas, obtenido en base al nivel de expresión de un marcador de cáncer, puede servir como un indicador para un médico por ejemplo para realizar una diagnosis para detectar metástasis de células cancerosas con respecto a un tejido específico en un paciente. Convencionalmente, cuando se realiza dicho examen molecular, el nivel de expresión a analizar de un marcador de cáncer se somete a conversión (normalización) con respecto al nivel de expresión del mismo por célula debido a la cantidad de células que varía de una muestra a otra. Por tanto, el nivel de expresión normalizado del marcador de cáncer en una muestra se compara con un valor umbral, diagnosticando de este modo la presencia o ausencia de células cancerosas. Específicamente, el nivel de expresión de un gen marcador de cáncer se divide por el nivel de expresión de un gen constitutivo, (es decir, un gen que se calcula que se expresa un nivel constante en muchos tejidos y células), normalizando de esta manera el nivel de expresión del gen marcador de cáncer con el nivel de expresión del gen constitutivo (M. Inokuchi et al., British Journal of Cancer (2003) 891750-1756). La Publicación de Estados Unidos Nº 2007264635 describe un método para obtener información para predecir una recaída de cáncer, que comprende una reacción de amplificación de un gen predeterminado por PCR y medir sus productos de amplificación. Más específicamente, esta publicación describe el diagnóstico de recaída de cáncer de estómago normalizando un resultado de medición con ß-actina en el Ejemplo 4 y diagnosticando la recaída sin normalización en el Ejemplo 5, respectivamente. Sumario El alcance de la presente invención se define únicamente por las reivindicaciones adjuntas y no se ve afectado en ningún grado por las declaraciones de este sumario. La presente invención proporciona un método para diagnosticar si existe o no una célula cancerosa en una muestra que incluye una célula obtenida de un paciente, que comprende: una etapa de obtención para obtener un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen marcador de cáncer y un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen constitutivo; una primera etapa de comparación para comparar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador del cáncer con un primer valor umbral; una etapa de normalización para normalizar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer basándose en el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo, cuando el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer es menor que el primer valor umbral en la primera etapa de comparación; una segunda etapa de comparación para comparar el valor normalizado obtenido a partir de la etapa de normalización con un segundo valor umbral y una etapa de juicio para diagnosticar si existen o no células cancerosas en la muestra basándose en un resultado de comparación de la primera etapa de comparación o la segunda etapa de comparación. 2 E08163947 07-12-2011   La presente invención también proporciona un método para diagnosticar si existe o no una célula cancerosa en una muestra que incluye una célula obtenida de un paciente, que comprende: una etapa de obtención para obtener un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen marcador de cáncer y un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen constitutivo; una primera etapa de comparación para comparar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer con un primer valor umbral; una etapa de normalización para normalizar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer basándose en el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo, cuando el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer es menor que el primer valor umbral en la primera etapa de comparación; una segunda etapa de comparación para comparar el valor normalizado obtenido a partir de la etapa de normalización con un segundo valor umbral; y una etapa de diagnóstico para diagnosticar si existen células cancerosas o no en la muestra basándose en un resultado de comparación de la primera etapa de comparación o la segunda etapa de comparación. La presente invención también proporciona un aparato para diagnosticar si existe o no una célula cancerosa en una muestra que incluye una célula obtenida de un paciente, que comprende: una parte de medición para medir la muestra para obtener un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen marcador del cáncer y un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen constitutivo en la muestra; y un controlador que incluye una memoria bajo control de un procesador, almacenando la memoria instrucciones que permiten al procesador realizar operaciones, que comprenden: una etapa de obtención para obtener el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador de cáncer y el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo; una primera etapa de comparación para comparar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador del cáncer con un primer valor umbral; una etapa de normalización para normalizar el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador del cáncer basándose en el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo; una segunda etapa de comparación para comparar el valor normalizado obtenido a partir de la etapa de normalización con un segundo valor umbral; una etapa de diagnóstico para diagnosticar si existen células cancerosas o no en la muestra basándose en resultados de comparación de la primera etapa de comparación y la segunda etapa de comparación; y una etapa de producción para producir un veredicto obtenido a partir de la etapa de diagnóstico. La presente invención también proporciona un aparato para diagnosticar si existen células de cáncer o no en una muestra que incluye una célula obtenida de un paciente, que comprende: una parte de medición para medir la muestra para obtener un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen marcador de cáncer y un valor relacionado con un nivel de expresión de un gen constitutivo en la muestra; y un controlador que incluye una memoria bajo el control de un procesador, almacenando la memoria instrucciones que permitan al procesador realizar operaciones, que comprenden: una etapa de obtención para obtener el valor relacionado con el nivel de expresión del gen marcador del cáncer y el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo; una primera etapa de comparación para comparar el valor... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar la existencia o no de una célula cancerosa en una muestra que incluye una célula obtenida de un paciente, realizándose el método usando un aparato de medición por amplificación de ácidos nucleicos, que comprende: - una etapa de medición para medir un valor relacionado con el nivel de expresión de antígeno carcinoembrionario (CEA) y un valor relacionado con el nivel de expresión de un gen constitutivo; determinándose dichos niveles de expresión por medición de un producto de amplificación derivado de una amplificación de ácido nucleico; - una primera etapa de comparación para comparar el valor relacionado con el nivel de expresión de CEA con un primer valor umbral, siendo dicho primer valor umbral un valor igual o menor que el valor del nivel de expresión de CEA en una muestra en la que se ha confirmado que contiene células cancerosas y mayor que el valor del nivel de expresión de CEA en una muestra en la que se ha confirmado que no contiene células cancerosas; - una etapa de normalización para normalizar el valor relacionado con el nivel de expresión de CEA basándose en el valor relacionado con el nivel de expresión del gen constitutivo; - una segunda etapa de comparación para comparar el valor normalizado obtenido de la etapa de normalización con un segundo valor umbral, siendo dicho segundo valor umbral un valor igual o menor que un valor normalizado obtenido normalizando el valor del nivel de expresión de CEA en una muestra en la que se ha confirmado que contiene células cancerosas por el valor de un gen constitutivo en dicha muestra y superior a un valor normalizado obtenido normalizando el valor del nivel de expresión de CEA en una muestra que se ha confirmado que no contiene células cancerosas; y - una etapa de diagnóstico para diagnosticar la existencia o no de células cancerosas en la muestra basándose en los resultados de la comparación de la primera etapa de comparación y la segunda etapa de comparación. 2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la etapa de diagnóstico determina la existencia de la célula cancerosa en la muestra, cuando el valor relacionado con el nivel de expresión de CEA no es inferior al primer valor umbral y/o cuando el valor normalizado no es inferior al segundo valor umbral. 3. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la primera etapa de diagnóstico determina la existencia de la célula cancerosa en la muestra, cuando el valor relacionado con el nivel de expresión de CEA no es inferior al primer valor umbral. 4. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la segunda etapa de diagnóstico determina la existencia de la célula cancerosa en la muestra, cuando el valor normalizado no es inferior al segundo valor umbral. 5. El método de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la etapa de diagnóstico determina la existencia de la célula cancerosa en la muestra cuando al menos una de las etapas seleccionadas entre la primera etapa de diagnóstico de la reivindicación 3 y la segunda etapa de diagnóstico de la reivindicación 4 determina la existencia de la célula cancerosa en la muestra, no siendo el valor relacionado con el nivel de expresión de CEA inferior al primer valor umbral y no siendo el valor normalizado inferior al segundo valor umbral. 22 E08163947 07-12-2011   23 E08163947 07-12-2011   24 E08163947 07-12-2011   E08163947 07-12-2011   26 E08163947 07-12-2011   27 E08163947 07-12-2011   28 E08163947 07-12-2011   29 E08163947 07-12-2011   E08163947 07-12-2011