MÉTODO DE PRONÓSTICO Y DIAGNÓSTICO DE LA ESTENOSIS AÓRTICA QUE COMPRENDE LA ALFA-1-ANTIQUIMIOTRIPSINA COMO MARCADOR.

Método de pronóstico y diagnóstico de la estenosis aórtica que comprende la {al}-1- antiquimiotripsina como marcador.

La presente invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para la determinación del riesgo de sufrir estenosis aórtica (EA), la presencia de EA y/o el pronóstico del desarrollo de una EA, mediante la detección y/o cuantificación de la proteína {al}-1-antiquimotripsina. Así mismo, la presente invención se refiere a un kit de diagnóstico y pronóstico de la EA.

Método de pronóstico y diagnóstico de la estenosis aórtica que comprende la α-1-antiquimiotripsina como marcador.

La presente invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para la determinación del riesgo de sufrir estenosis aórtica (EA) , la presencia de EA y/o el pronóstico del desarrollo de una EA, mediante la detección y/o cuantificación de la proteína α-1-antiquimotripsina. Así mismo, la presente invención se refiere a un kit de diagnóstico y pronóstico de la EA.

Estado de la técnica anterior

La EA es una enfermedad de elevada prevalencia en los países desarrollados y es la responsable del mayor número de reemplazos valvulares aórticos (Passik et al. Mayo Clin. Proc. 1987; 62: 119-23) . Solamente en Estados Unidos se realizan más de 70.000 reemplazos valvulares aórticos anualmente. El 2-3% de los adultos mayores de 65 años padecen EA calcificada, y alrededor del 25% de estas personas padece esclerosis aórtica (engrosamiento de la válvula aórtica sin obstrucción del flujo de salida del ventrículo izquierdo) (Otto y O’Brien. Heart 2001; 85: 601-602) . Por tanto, se espera un gran aumento de la EA, debido al progresivo envejecimiento de la población que conllevan las mejoras en sanidad.

Durante años, la EA degenerativa ha sido considerada consecuencia inevitable del envejecimiento y se pensaba en ella como un proceso pasivo secundario al depósito de calcio en la válvula aórtica. En la actualidad, aunque no se conoce con certeza su etiología, diversos autores han señalado que comparte los mismos factores de riesgo que la aterosclerosis, ya que la EA es más frecuente en pacientes con hipercolesterolemia, hipertensión arterial, tabaquismo y diabetes (Nalini et al. Circulation 2003; 107:2181-84) .

Además, recientemente se han encontrado similitudes histológicas entre la válvula aórtica estenótica y la placa de ateroma, lo que ha llevado a la hipótesis de que la EA degenerativa es un proceso inflamatorio similar al aterosclerótico. En diferentes trabajos, se ha demostrado que la válvula aórtica desarrolla aterosclerosis con posterior depósito de calcio y expresión de marcadores específicos de matriz ósea, como la osteopondina (Stewart et al. J Am Coll Cardiol. 1997;

29: 630-4, Emile et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1997; 17: 547-52, Kevin et al. Circulation. 1995; 92: 2163-68, Srivatsa et al. J Clin Invest. 1997; 99: 996-1009, Feldman et al. Cathet Cardiovasc Diagn. 1993; 29: 1-7, Fernández-González et al. Tex Heart Inst J. 1997; 24: 232) . De igual forma se ha documentado que la disfunción endotelial, con acumulación de lípidos y proteínas (apolipoproteína (apo) B, apo (a) y apoE) (O’Brien et al. 1996; 16: 523-32, Mohler et al. Circulation. 2001; 103: 1522-8) juega un papel importante en el inicio de la EA, así como el estrés oxidativo con modificación de las enzimas del óxido nítrico juega también un papel relevante (Arumugam et al. J Cardiovasc Surg. 1995; 10: 610-1, Rajamannan et al. J Am Coll Cardiol. 2003; 41: 842) . Sin embargo, algunos datos sugieren que su mecanismo patogénico no es igual que el de la aterosclerosis; así, en adultos con EA severa solamente el 50% presenta enfermedad arterial coronaria significativa. A su vez, la mayoría de los pacientes con enfermedad arterial coronaria no presentan EA (Otto y O’Brien. Heart 2001; 85: 601-602) . Además, algunos estudios dirigidos a evaluar el efecto de las estatinas en la EA degenerativa han descrito disminución de la enfermedad coronaria sin cambio en la progresión de la EA degenerativa (Rossebo et al. N Engl J Med. 2008. 25; 359: 1343-56, Cowell et al. N Engl J Med. 2005. 9;

352: 2389-97, Chan et al. Circulation 2010; 121: 306-14) .

Es importante destacar que, aunque se han hecho avances en el conocimiento de los mecanismos involucrados en este proceso, no se está utilizado en la actualidad ningún marcador en el diagnóstico/pronóstico de la EA.

La α-1-antiquimotripsina es una alfa globulina glicoproteína miembro de la familia de las serpinas. La α-1-antiquimotripsina inhibe algunas proteasas como la catepsina y es protectora del daño producido por enzimas proteolíticas. En los últimos años se ha evidenciado la participación de ésta proteína en la enfermedad de Alzheimer y su deficiencia, con enfermedad hepática.

La identificación temprana de pacientes con riesgo de desarrollar una estenosis valvular aórtica es de gran importancia ya que disminuiría la mortalidad y morbilidad asociada a esta enfermedad. La existencia en los servicios hospitalarios de test específicos para el estudio de riesgo de padecer EA, podría ser de gran ayuda para la prevención y posible profilaxis de dicha enfermedad.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona un método de obtención de datos útiles para la determinación de la estenosis aórtica (EA) o del riesgo de padecer EA o de la evolución de una EA de forma rápida, sencilla y eficaz. Así mismo, la presente invención se refiere al uso de un kit para determinar el riesgo de padecer EA o para determinar la presencia de una EA o para predecir la progresión de una EA, en una muestra biológica aislada.

La presente invención proporciona, por tanto, una respuesta a la necesidad de disponer de biomarcadores que permitan el diagnóstico y el pronóstico de la EA.

La presente invención soluciona el problema técnico de encontrar un buen biomarcador para la EA, a ser posible que pueda ser monitorizado en plasma o suero sanguíneo, es decir, que no implique una obtención de la muestra biológica más invasiva.

En la presente invención, cabe destacar un efecto sorprendente: la α-1-antiquimiotripsina presenta niveles elevados en el tejido de válvula aórtica estenótica, en su secretoma así como en el plasma sanguíneo de enfermos con EA, en relación con los niveles de los individuos control.

Así, un primer aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles (en adelante método de la invención) para la determinación de la EA o del riesgo de padecer EA o de la evolución de una EA que comprende:

a) obtener una muestra biológica aislada de un sujeto, y

b) detectar y/o cuantificar el producto de expresión de una secuencia nucleotídica de un gen α-1-antiquimotripsina que codifica para una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 50% de identidad con SEQ ID NO: 1, o un fragmento de dicho producto de expresión, en la muestra obtenida en el paso (a) .

El término “estenosis aórtica (EA) ” tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere a la estenosis de la válvula aórtica, que es una valvulopatía (cardiopatía valvular) caracterizada por el estrechamiento anormal del orificio de la válvula aórtica del corazón. Esta reducción del orificio valvular puede ser congénita o adquirida.

La expresión “determinación de la EA”, tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere, pero no se limita, a la constatación de la presencia de la EA en un sujeto.

La expresión “riesgo de padecer EA”, tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere, pero no se limita, a la predisposición de un sujeto de sufrir o desarrollar una EA. Por tanto, el método se refiere a la obtención de datos útiles para determinar si un sujeto está desarrollando o puede desarrollar una EA.

El término “evolución de la EA”, tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere, pero no se limita, a la progresión de la EA o a la probabilidad de presentar insuficiencia cardíaca o de muerte por insuficiencia cardíaca, así como a la predicción de la respuesta a un determinado tratamiento de la EA.

El término “% de identidad” tal y como se utiliza en la presente descripción, se refiere al % de identidad entre dos secuencias de aminoácidos. El % de identidad es el resultado de contar el número de posiciones a lo largo del alineamiento de dos secuencias donde todos los aminoácidos en la misma posición son idénticos.

El producto de expresión o el fragmento del mismo, detectado y/o cuantificado en el paso (b) puede codificar para una secuencia aminoacídica al menos 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 o 95% idéntica a SEQ ID NO: 1.

El término “producto de expresión”, tal y...

1. Método de obtención de datos útiles para la determinación de la estenosis aórtica (EA) o del riesgo de padecer EA o de la evolución de una EA que comprende:

a) obtener una muestra biológica aislada de un sujeto, y

b) detectar y/o cuantificar el producto de expresión de una secuencia nucleotídica de un gen α-1-antiquimotripsina que codifica para una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 50% de identidad con SEQ ID NO: 1, en la muestra obtenida en el paso (a) .

2. Método según la reivindicación 1, donde el producto de expresión detectado y/o cuantificado en el paso (b) es de una secuencia nucleotídica que codifica para una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 70% de identidad con SEQ ID NO: 1.

3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde el producto de expresión detectado y/o cuantificado en el paso (b) es de una secuencia nucleotídica que codifica para la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 1.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 que además comprende comparar los datos obtenidos en

(b) con unos valores estándar para encontrar una desviación significativa.

5. Método según la reivindicación 4 que además comprende atribuir la desviación significativa a la presencia de EA o al riesgo de padecer EA en el sujeto de (a) .

6. Método según las reivindicaciones 1-5, donde la muestra biológica del paso (a) es un fluido biológico.

7. Método según las reivindicaciones 1-6, donde el fluido biológico es sangre o suero o plasma sanguíneo.

8. Método según las reivindicaciones 1-6, donde la muestra biológica del paso (a) comprende células.

9. Método según las reivindicaciones 1-6, donde la muestra biológica del paso (a) comprende un tejido.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde el producto de expresión, de la secuencia nucleotídica del gen α-1-antiquimotripsina es una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 50% o al menos un 70% de identidad con SEQ ID NO: 1, o SEQ ID NO: 1.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde el producto de expresión es detectado por PCR.

12. Método según la reivindicación 10, donde la secuencia aminoacídica es detectada por electroforesis, inmunoensayo, cromatografía, tecnología de microarrays y/o espectrometría de masas.

13. Método según la reivindicación 12 donde la secuencia aminoacídica es detectada por cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem.

14. Uso del producto de expresión del gen de la α-1-antiquimotripsina como marcador: a) para la determinación del riesgo de padecer EA, b) para determinar la presencia de una EA, o c) para predecir la progresión de una EA.

15. Uso de una secuencia aminoacídica de la proteína α-1-antiquimotripsina que tiene al menos un 50% de identidad con SEQ ID NO: 1, como marcador: a) para la determinación del riesgo de padecer EA,

b) para determinar la presencia de una EA, o c) para predecir la progresión de una EA.

16. Uso según la reivindicación 15, donde la secuencia aminoacídica de la proteína α-1-antiquimotripsina tiene al menos un 70% de identidad con SEQ ID NO: 1.

17. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15 ó 16, donde la secuencia aminoacídica de la proteína α-1antiquimotripsina es SEQ ID NO: 1.

18. Uso de un kit que comprende cebadores y/o sondas que hibridan con la secuencia de un gen α-1-antiquimotripsina que codifica para una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 50% o al menos un 70% de identidad con SEQ ID NO: 1, o que codifica para SEQ ID NO: 1, para determinar el riesgo de padecer EA o para determinar la presencia de una EA o para predecir la progresión de una EA, en una muestra biológica aislada.

19. Uso de un kit que comprende anticuerpos capaces de unirse a una secuencia aminoacídica de la α-1-antiquimotripsina que tiene al menos un 50% o al menos un 70% de identidad con SEQ ID NO: 1, o que codifica para SEQ ID NO: 1, para determinar el riesgo de padecer EA o para determinar la presencia de una EA o para predecir la progresión de una EA, en una muestra biológica aislada.

LISTA DE SECUENCIAS

<110> FUHNPAIIN

<120> Método de pronóstico y diagnóstico de la estenosis aórtica que comprende la α-1-antiquimiotripsina como marcador

<130> 2145.5

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 423

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1