Procedimiento para la obtención de una composición rica en hidroxitirosol a partir de agua de vegetación.

Procedimiento para la producción de una composición que es rica en hidroxitirosol,

el cual comprende:

(a) Producir un agua de vegetación a partir de aceitunas;

(b) Añadir una cantidad suficiente de ácido al agua de vegetación para obtener un valor pH entre 1 y 5; así como

(c) Incubar el agua de vegetación acidificada durante un período de por lo menos dos meses hasta que por lomenos el 75 % de la oleuropeína, primitivamente presente en el agua de vegetación, se haya convertido en elhidroxitirosol.

Procedimiento para la obtención de una composición rica en hidroxitirosol a partir de agua de vegetación

(0001) La presente invención se refiere a una fracción fenólica de un grupo de componentes, presentes en plantas del olivo, conocido como hidroxitirosol (3, 4-dihidroxi- feniletanol) . Más concretamente, la invención proporciona tanto un extracto de aceituna - que contiene el hidroxitirosol, con reducidas cantidades de oleuropeína y de tirosol, ó que está sustancialmente exento de éstos - como asimismo proporciona un procedimiento para la obtención de este extracto.

Armstrong, B. K. y Doll, R. Revista Internacional del Cáncer No.15, 617-631 (1975) ; Bartsch, H. y otros, Revista Carcinogénesis No. 20, 2209-2218 (1999) ; Braga, C. y otros, Revista Cáncer No. 82, 448-453 (1998) ; Chan, J. M. y otros, Seminarios de Biología del Cáncer No. 8, 263-273 (1998) ;

d´Amicis, A. y Farchi, S. en Avances en Nutrición y Cáncer No. 2 (Zappia V. y otros Eds.) 67-72 Academia Kluwer/Editorial Plenum, Nueva York (1999) ; Deiana, M. y otros, Revista Medicina Biología de Radicales Libres No. 26, 762-769 (1999) ; de la Puerta, R. y otros, Revista Bioquímica Farmacológica No. 57, 445-449 (1999) ; Ficarra, P. y otros, Revista Fármacos No. 46, 803-815 (1991) ; Gerber, M. Epidemiología de Dieta y Cáncer, Editorial M. J. Hill, 263-275 (1994) ; Kohyama, N. y otros, Revista Ciencias Biológicas, Biotecnología, Bioquímica No. 61, 347-350 (1997) ; Kuller, L. H., Revista de Asociación Dietética Americana No. 97, 9-15 (1997) ; La Vecchia, C. y otros, Revista Europea de Prevención de Cáncer No. 7, 461-464 (1998) ; Manna C. y otros, Cartas F.E.B.S. No. 470, 341-344 (2000) ;

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Visioli, F. y otros, Cartas F.E.B.S. No. 468, 159-160 (2000) ; Visioli, F. y Galli, C., Revista Nutrición No. 56, 142-147 (1998) .

(0002) Se ha descubierto que una elevada cantidad de grasa alimenticia está implicada en el desarrollo de varias enfermedades (Owen y otros, 2000c) . La arteriosclerosis (Kuller, 1997) , las enfermedades coronarias (Gerber, 1994) , el cáncer de mama (La Vecchia y otros, 1998) , el cáncer de próstata (Chan y otros, 1999) , el cáncer de ovarios (Risch y otros, 1994) y el cáncer de colon (Armstrong y Doll, 1975) han sido relacionados todos con una elevada cantidad en grasas dietéticas. La evidencia pone de manifiesto, sin embargo, que no es solamente la cantidad, sino también el tipo de la grasa alimenticia que es importante en la etiología de algunos cánceres ( Bartsch y otros, 1999) .

(0003) El aceite de oliva, principal componente de grasa en la dieta mediterránea, ha sido relacionado con una menor incidencia en las enfermedades coronarias (Owen y otros, 2000b; Parthasarathy y otros, 1990; Mattson y Grundy, 1985) y en ciertos tipos de cáncer (d´Amicis y Farchi, 1999; Braga y otros, 1998; Martín-Moreno y otros, 1994) . Varios laboratorios han informado que la hidrólisis de la oleuropeína fenólica del aceite de oliva, y de otros elementos de esta familia, conduce a unos pequeños componentes fenólicos con una acusada actividad protectora química (Owen y otros, 2000a; Manna y otros, 2000) . Especialmente el hidroxitirosol fenólico del aceite de oliva previene una oxidación de lipoproteína de baja densidad (LDL) (Visioli y Galli, 1998) , la agregación de plaquetas (Petroni y otros, 1995) e inhibe 5- y 12-lipoxigénesis (de la Puerta y otros, 1999; Kohyama y otros, 1997) . También ha sido descubierto que el hidroxitirosol ejerce un efecto inhibidor sobre la nitración de la tirosina y sobre la 55 modificación básica del ADN dependiente del peroxinitrito (Deiana y otros, 1999) así como actúa contra la citotoxicidad, inducida por especies de oxígeno reactivo en distintos sistemas celulares humanos (Manna y otros, 2000) . Finalmente, unos estudios han demostrado que el hidroxitirosol es absorbido - en función de la dosificación

- en las personas después de su ingestión, indicando así su disponibilidad biológica (Visioli y otros, 2000) .

(0004) La producción de aceite de oliva implica, por regla general, la trituración de las aceitunas, incluidos los huesos, para producir una pasta viscosa. Durante este proceso, las aceitunas trituradas son continuamente lavadas con agua, un proceso que es conocido como “malaxación”. A continuación, la pasta es prensada mecánicamente para exprimir el contenido en aceite. Aparte de proporcionar el aceite de oliva, este prensado también exprime el contenido de la pasta en agua. Estas fases del lavado y prensado producen una considerable

65 cantidad de agua que es conocida como “agua de vegetación”.

(0005) Tanto el hueso como la pulpa de las aceitunas son ricos en combinaciones fenólicas, que son solubles en agua. Estas combinaciones son extraídas de las aceitunas durante la malaxación, en función de sus coeficientes de sus partes proporcionales, y las mismas terminan dentro del agua de vegetación. Esto explica porque distintas combinaciones fenólicas - como, por ejemplo, la oleuropeína y sus derivados, producidos en la pulpa de la aceituna - pueden ser encontradas de forma abundante en las aguas de vegetación. De manera similar, también se encuentran con abundancia en las aguas de vegetación unas combinaciones monofenólicas como, por ejemplo,

el tirosol y sus derivados, producidos por los huecos de las aceitunas.

(0006) Debido a la acusada actividad protectora química del hidroxitirosol, es deseable desarrollar un procedimiento que produzca de la aceituna un extracto acuoso con un elevado porcentaje de hidroxitirosol.

(0007) Por un lado, la presente invención abarca un procedimiento para producir una composición rica en hidroxitirosol. Este procedimiento comprende las fases de: (a) Producir el agua de vegetación de las aceitunas, preferentemente de la carne de unas aceitunas deshuesadas; (b) Añadir al agua de vegetación un ácido, en una cantidad suficiente para obtener un valor pH entre 1 y 5, de forma preferente entre 2 y 4; y (c) Incubar el agua de vegetación acidificada durante un período de por lo menos dos meses, normalmente de 6 hasta 12 meses, hasta

que por lo menos un 75 %, de forma preferente por lo menos un 90 % de la oleuropeína, primitivamente presente en el agua de vegetación, se haya sido convertido en el hidroxitirosol.

(0008) Según una forma de realización es así que la incubación es llevada a efecto hasta que el agua de vegetación tenga una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5 :1 hasta 200 :1, preferentemente entre 10 : 1 hasta 100 : 1. Según una forma de realización similar, esta incubación es llevada a efecto hasta que el agua de vegetación tenga una relación de peso entre el hidroxitirosol y el tirosol de 3 : 1 hasta 50 :1, preferentemente de 5 :1 hasta 30 :1.

(0009) El procedimiento puede incluir, además, el fraccionamiento del agua de vegetación incubada para separar

el hidroxitirosol de los otros componente y/ó para secar el agua de vegetación del aislado hidroxitirosol, esto con el fin de producir un extracto seco; procedimiento éste en el que el referido fraccionamiento comprende, después de la mencionada incubación, poner el agua de vegetación acidificada en contacto con un fluido supercrítico así como recuperar la composición, rica en hidroxitirosol, del contactada agua de vegetación, con lo cual la composición, rica en hidroxitirosol, comprende por lo menos un 95 % de peso de hidroxitirosol. Según otra forma para la realización resulta que la composición, rica en hidroxitirosol, comprende por lo menos... [Seguir leyendo]

1ª. Procedimiento para la producción de una composición que es rica en hidroxitirosol, el cual comprende:

(a) Producir un agua de vegetación a partir de aceitunas;

(b) Añadir una cantidad suficiente de ácido al agua de vegetación para obtener un valor pH entre 1 y 5; así como

(c) Incubar el agua de vegetación acidificada durante un período de por lo menos dos meses hasta que por lo menos el 75 % de la oleuropeína, primitivamente presente en el agua de vegetación, se haya convertido en el hidroxitirosol.

2ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) , en el cual la referida incubación es llevada a efecto durante un período de por lo menos 9 meses y hasta que por lo menos el 90 % de la oleuropeína, primitivamente presente en el agua de vegetación, se haya convertido en el hidroxitirosol.

3ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) , en el cual el agua de vegetación es producida a partir de la carne de aceitunas deshuesadas.

4ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 3) , en el cual la incubación es llevada a efecto hasta que el agua de vegetación tenga una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5 : 1 y 200 : 1.

5ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 4) , en el cual la incubación es llevada a efecto hasta que el agua de vegetación tenga una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 10 :1 y 100 : 1.

6ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 3) , en el cual la incubación es llevada a efecto hasta que el agua 25 de vegetación tenga una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 3 : 1 y 50 : 1.

7ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 6) , en el cual la incubación es llevada a efecto hasta que el agua de vegetación tenga una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5 : 1 hasta 30 : 1.

8ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) el cual comprende, además, el fraccionamiento del incubada agua de vegetación con el fin de separar el hidroxitirosol de otros componentes.

9ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) , en el cual el referido ácido es añadido en una cantidad suficiente para producir un valor pH entre 2 y 4.

10ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 8) , en el cual el referido fraccionamiento comprende - después de la mencionada incubación - la puesta del agua de vegetación referida en contacto con un fluido supercrítico así como la recuperación de la mencionada composición, rica en hidroxitirosol, del agua de vegetación contactada; en este caso, la referida composición, rica en hidroxitirosol, comprende por lo menos un 95 % de su peso en hidroxitirosol.

11ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 10) , en el cual la referida recuperación comprende las fases siguientes:

45 (a) Recuperación del mencionado fluido supercrítico, conteniendo este fluido supercrítico el referido hidroxitirosol; así como

(b) Evaporización del mencionado fluido supercrítico con el fin de extraer la referida composición que es rica en hidroxitirosol.

12ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 10) , en el cual la referida puesta en contacto comprende las fases siguientes:

(a) Prever una membrana porosa que tiene sus lados, entre si opuestos, dentro de un módulo que se encuentra

bajo presión; en este caso, la referida membrana sirve como una superficie límite de barrera entre un fluido y un 55 gas denso, y la misma no actúa como un selector para el mencionado hidroxitirosol;

(b) Prever el referido fluido supercrítico dentro del mencionado módulo y por un lado de la referida membrana y prever el agua de vegetación mencionada por el lado opuesto de la referida membrana; así como

(c) Extraer el referido hidroxitirosol a través de toda la mencionada membrana, siendo el mismo impulsado por un gradiente de concentración del referido hidroxitirosol entre el agua de vegetación mencionada y el referido fluido supercrítico.

13ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 12) , en el cual la referida membrana es una membrana de haces de fibras huecas.

65 14ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 10) , en el cual el mencionado fluido supercrítico es el dióxido de carbono.

15ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 10) , en el cual la referida composición, rica en hidroxitirosol,

comprende por lo menos un 95 % de su peso en hidroxitirosol.

16ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 10) , en el cual la referida composición, rica en hidroxitirosol, comprende por lo menos un 99 % de su peso en hidroxitirosol.

17ª. Suplemento dietético que comprende un extracto acuoso de aceitunas que tiene una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5 :1 y 200 : 1.

18ª. Suplemento dietético conforme a la reivindicación 17) , en el cual la relación entre el peso del hidroxitirosol y el 10 peso de la oleuropeína es de 10 : 1 y 100 : 1.

19ª. Suplemento dietético que comprende un extracto acuoso de aceitunas que tiene una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 3 :1 y 50 : 1.

20ª. Suplemento dietético conforme a la reivindicación 18, el cual tiene una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5:1 y 30 : 1.

21ª. Suplemento dietético conforme a la reivindicación 17) , siendo el referido suplemento secado con el fin de producir un extracto polvoriento.

22ª. Suplemento dietético conforme a la reivindicación 17) , teniendo el referido suplemento la forma de una tableta, de una cápsula, de una píldora ó de un aditivo alimenticio dulce.

23ª. Composición que comprende un extracto acuoso de aceitunas que tiene una relación entre el peso del 25 hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 5 :1 hasta 200 : 1.

24ª. Composición conforme a la reivindicación 23) , el cual tiene un relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 10 : 1 hasta 100 : 1.

25ª. Composición conforme a la reivindicación 23) , el cual tiene la forma de polvo seco.

26ª. Composición conforme a la reivindicación 23) , el cual tiene la forma de una tableta, de una cápsula, de una píldora ó de un aditivo alimenticio dulce.

27ª. Composición conforme a la reivindicación 23) el cual comprende, además, un agente seleccionado del grupo que consiste en agentes lubrificantes como, por ejemplo, el talco, el estearato de magnesio y el aceite mineral; agentes humectantes y agentes para la suspensión.

28ª. Composición que comprende un extracto acuoso de aceitunas que tiene una relación entre el peso del 40 hidroxitirosol y el peso del tirosol de 3 :1 hasta 50 : 1.

29ª. Composición conforme a la reivindicación 28) , el cual tiene una relación entre el peso del hidroxitirosol y el peso del tirosol de 5 :1 hasta 30 : 1.

45 30ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) según el cual, y como resultado de la referida incubación, el porcentaje del peso del hidroxitirosol con respecto al porcentaje del peso de la totalidad de las combinaciones fenólicas dentro de la mencionada composición es mayor del 45 %.

31ª. Procedimiento conforme a la reivindicación 1) según el cual el ácido, que es añadido en la fase (b) , es el 50 ácido cítrico ó el ácido clorhídrico.