Procedimiento para la irradiación de concentrados de trombocitos en recipientes flexibles con luz ultravioleta.

Procedimiento para la inactivación de patógenos y/o leucocitos en concentrados de trombocitos que comprendelas etapas de:

- proporcionar concentrados de trombocitos obtenidos a partir de sangre de donante y/o mediante aféresis mecánicaque se encuentran en cada caso en bolsas de exposición planas permeables a UV flexibles, que están compuestospor una pluralidad de unidades que pueden manipularse individualmente y almacenadas por separado (TK),

- someter los TK a una irradiación con luz ultravioleta (UV), caracterizado porque

- las bolsas de exposición se llenan hasta menos del 30% del volumen de llenado máximo de las bolsas deexposición y

- las bolsas de exposición se mueven durante la irradiación con luz UV, de modo que el contenido de la bolsa deexposición se hace circular y debido al movimiento se forman zonas de grosor de capa variable, comprendiendo laluz UV utilizada radiación UVC de desde menos de 280 nm hasta 200 nm.

Procedimiento para la irradiación de concentrados de trombocitos en recipientes flexibles con luz ultravioleta

El objeto de la invención es un procedimiento para la inactivación de patógenos, tales como bacterias y virus, y/o de leucocitos en concentrados de trombocitos (TK) mediante irradiación con luz ultravioleta.

El documento US 4.952.812 enseña irradiar concentrados de trombocitos contaminados con leucocitos con longitudes de onda de desde 280 hasta 320 nm. Los glóbulos blancos de la sangre pierden en este caso esencialmente su capacidad para provocar una reacción inmunitaria. Para ello se sujetan y se irradian en un aparato bolsas flexibles planas con los concentrados de trombocitos, para formar grosores de capa uniformes.

El documento WO 20051089816 A1 da a conocer un procedimiento y un dispositivo para el tratamiento de líquidos biológicos en recipientes o aparatos de flujo que contiene sustancias fotoactivas con radiación electromagnética para reducir los patógenos. No se enseñan longitudes de onda inferiores a 280 nm, ni bolsas de sangre llenas ligeramente.

Se conoce que la aplicación terapéutica de preparaciones sanguíneas conlleva el riesgo de que los receptores de la preparación sanguínea se infecten con virus y bacterias. Se mencionan por ejemplo los virus de la hepatitis B (VHB) y la hepatitis C (VHC) así como los agentes patógenos del SIDA VIH-1 y VIH-2. Siempre existe riesgo cuando durante la producción de la preparación no se aplica ninguna etapa para la inactivación o eliminación de dichos patógenos.

La luz ultravioleta (UV) se diferencia según la longitud de onda. En el sentido de esta solicitud se realiza la siguiente definición: UVA: de menos de 400 a 320 nm, UVB: de menos de 320 a 280 nm y UVC de menos de 280 a 200 nm. Se conoce que mediante irradiación con luz ultravioleta (UV) de onda corta, es decir en la banda de ondas por debajo de aproximadamente 320 nm (UVB y UVC) , pueden inactivarse tanto virus como bacterias, por ejemplo en el plasma sanguíneo o en preparaciones sanguíneas celulares. Por encima de 320 nm la energía de la radiación es demasiado reducida como para inactivar microorganismos y virus. Con respecto a los métodos químicos, fotoquímicos y fotodinámicos para la inactivación de patógenos, la mera irradiación con luz UV tiene básicamente la ventaja de ser eficaz por sí sola y no requerir la adición de productos químicos reactivos o sustancias fotoactivas.

Los aditivos de este tipo o sus productos de descomposición o fotoproductos requieren a menudo una eliminación posterior, puesto que son tóxicos o mutagénicos. Además pueden provocar en la preparación tratada la aparición de estructuras neoantigénicas, cuando se unen a proteínas plasmáticas y superficies celulares. Por regla general los aditivos de este tipo no pueden eliminarse completamente, al menos su eliminación requiere un esfuerzo adicional. Las etapas de trabajo adicionales de este tipo pueden perjudicar además la calidad de las preparaciones esterilizadas. La más eficaz para la inactivación de patógenos directa es la UVC. Sin embargo tiene la desventaja de que sólo penetra en disoluciones que contienen proteínas, tales como plasma sanguíneo o suspensiones turbias (por ejemplo TK) hasta una profundidad de penetración muy reducida.

La UVC se utilizó durante la Segunda Guerra Mundial y aún poco después para esterilizar plasma sanguíneo y disoluciones de albúmina, sobre todo para inactivar los virus de la hepatitis. Por aquel entonces se conducía la disolución por un aparato de flujo como una película delgada pasando por una fuente de luz UVC. El método demostró no ser suficientemente seguro y se abandonó (Kallenbach NR, Cornelius PA, Negus D, et al. Inactivation of viruses by ultraviolet light. Curr Stud Hematol Blood Transfus 1989, 56, 70-82) .

Hoy en día se utilizan procedimientos que funcionan según el mismo principio desarrollados adicionalmente, para esterilizar preparaciones de proteínas plasmáticas terapéuticas. En todos los casos se pretendía o se pretende tratar volúmenes más grandes, es decir mezclas de plasmas o disoluciones de proteínas de hasta algunos cientos de litros e incluso más (Hart H, Reid K, Hart W. Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin. Vox Sang 1993;64 (2) :82-8. y Chin S, Williams B, Gottlieb P, et al. Virucidal short wavelength ultraviolet light treatment of plasma and factor VIII concentrate: protection of proteins by antioxidants; Blood 1995;86 (11) :4331-6) .

Para esterilizar una pluralidad de unidades individuales de TK, que se obtienen a partir de donaciones de sangre o mediante aféresis mecánica, con un volumen de en todo caso hasta algunos cientos de ml, dichos aparatos de flujo no son adecuados. Pero precisamente esto es lo que se necesita en la práctica diaria en un banco de sangre.

La UVB es igualmente microbiocida y virucida, aunque no en la misma medida que la UVC. Penetra algo mejor en disoluciones que contienen proteínas y suspensiones turbias que la UVC, pero sin embargo su profundidad de penetración, por ejemplo en plasma o TK, también se establece sólo en el intervalo de pocos milímetros. Se sometió a prueba la irradiación con UVB, para inactivar en TK linfocitos T, que son considerablemente más sensibles a UV que los virus o bacterias. Con esto pretendía evitarse una aloinmunización frente a antígenos de HLA extraños para el organismo en los receptores de las preparaciones, lo que puede provocar que los receptores se vuelvan resistentes a transfusiones adicionales de TK (Andreu G, Boccaccio C, Lecrubier C, et al. Ultraviolet irradiation of platelet concentrates: feasibility in transfusion practice. Transfusion 1990;30 (5) :401-6 y Pamphilon DH. The rationale and use of platelet concentrates irradiated with ultraviolet-B light. Transfus Med Rev 1999;13 (4) :323-33) .

Sin embargo, el método no se impuso porque la filtración de leucocitos desarrollada casi al mismo tiempo representa una alternativa con una eficacia similar pero más favorable desde el punto de vista del esfuerzo económico y de trabajo (Leukocyte reduction and ultraviolet B irradiation of platelets to prevent alloimmunization and refractoriness to platelet transfusions. The Trial to Reduce Alloimmunization to Platelets Study Group. N Engl J Med 1997; 337 (26) :1861-9;) .

Igualmente se describió que los virus en suspensiones de trombocitos pueden inactivarse mediante la irradiación con luz UVB monocromática (longitud de onda 308 nm) . A este respecto se utilizó un láser Excimer; el volumen de muestra ascendió a algunos ml (Prodouz KN, Fratantoni JC, Boone EJ, Bonner RF. Use of laser-UV for inactivation of virus in blood products. Blood 1987;70 (2) :589-92) . Aparentemente no pudo superarse esta escala. Verdaderamente no se conoce ningún procedimiento de la bibliografía, con el que puedan descontaminarse virus o bacterias en TK completos de manera exclusiva mediante la irradiación con luz UV (es decir UVB o UVC) .

Los TK se obtienen mediante tromboaféresis mecánica de donantes individuales o también a partir de donaciones de sangre, mezclándose los trombocitos de varias donaciones de sangre (en general de 4-6) . El volumen de los TK que pueden obtenerse según esto se encuentra en general entre aproximadamente 200 y 350 ml. Pero también se preparan TK a partir de donaciones de sangre individuales, cuyo volumen es correspondientemente menor (entre aproximadamente 40 y 80 ml) . Tanto en los TK mezclados como en los de aféresis los trombocitos están suspendidos o bien en plasma sanguíneo o en medios de almacenamiento especiales con un contenido en plasma residual de desde aproximadamente el 30 hasta el 40%. Los TK se almacenan en bolsas de plástico permeables al gas planas a 20-24ºC.

Sería deseable esterilizar los TK en bolsas de este tipo con luz UV. Sin embargo existe a este respecto el problema mencionado de que las preparaciones son casi impermeables a la luz UV. Esto pretende ilustrarse mediante el siguiente ejemplo de cálculo: si se prevé UVB para la esterilización y se supone un volumen de TK de aproximadamente 300 ml, además de una profundidad de penetración de la radiación UVB de 1 mm así como la exposición de ambos lados de la bolsa, una bolsa de exposición adecuada debería tener una superficie de al menos 1500 cm2.

En el caso de los patógenos se trata en particular de virus y/o bacterias.

Las bolsas de exposición pueden agitarse con un agitador orbital, agitador... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la inactivación de patógenos y/o leucocitos en concentrados de trombocitos que comprende las etapas de:

- proporcionar concentrados de trombocitos obtenidos a partir de sangre de donante y/o mediante aféresis mecánica que se encuentran en cada caso en bolsas de exposición planas permeables a UV flexibles, que están compuestos por una pluralidad de unidades que pueden manipularse individualmente y almacenadas por separado (TK) ,

- someter los TK a una irradiación con luz ultravioleta (UV) , caracterizado porque

- las bolsas de exposición se llenan hasta menos del 30% del volumen de llenado máximo de las bolsas de exposición y

- las bolsas de exposición se mueven durante la irradiación con luz UV, de modo que el contenido de la bolsa de exposición se hace circular y debido al movimiento se forman zonas de grosor de capa variable, comprendiendo la luz UV utilizada radiación UVC de desde menos de 280 nm hasta 200 nm.

2. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición, debido al movimiento, presentan zonas de regiones irradiadas, para las que resultan regularmente de manera temporal grosores de capa inferiores a 1 mm, moviéndose las bolsas de exposición mediante agitación, basculación

o mediante rotación.

3. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el movimiento, en particular la amplitud del movimiento, tiene lugar de modo que dentro de los TK se forman regiones irradiadas, en las que los grosores de capa son regularmente de manera temporal inferiores a 0, 5 mm, moviéndose las bolsas de exposición mediante agitación, basculación o mediante rotación.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición presentan un lado inferior y un lado superior, y la suma de las superficies del lado inferior y del lado superior, que puede o pueden estar en contacto con el contenido de la bolsa, asciende a más del 90 por ciento en superficie, preferiblemente a más del 99 por ciento en superficie, de la superficie total interna del contenido de la bolsa.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la irradiación comprende además radiación UVB de desde menos de 320 nm hasta 280 nm y preferiblemente está compuesta de manera exclusiva por irradiación con longitudes de onda de desde menos de 280 nm hasta 200 nm y menos de 320 nm a 280 nm.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque cada unidad se prepara a partir de muestras de hasta como máximo 8 donantes, preferiblemente de hasta como máximo 6 donantes y en particular cada unidad procede de un donante.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el TK contiene al menos 1x108 trombocitos por ml, preferiblemente al menos 5x108 trombocitos por ml.

8. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque la irradiación con UVB tiene lugar con una energía lumínica de desde 0, 3 hasta 5 J/cm2, preferiblemente de 0, 5 a 2, 5 J/cm2.

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la irradiación con UVC tiene lugar con una energía lumínica de desde 0, 01 hasta 2 J/cm2, preferiblemente de 0, 1 a 1 J/cm2.

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque los TK

(a) contienen plasma y un medio de almacenamiento adecuado, ascendiendo el contenido en plasma preferiblemente a más del 20% en peso y/o

(b) contienen un medio de almacenamiento acuoso tamponado.

11. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque los TK están libres de sustancias fotoactivas.

12. Procedimiento según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición se sostienen de manera móvil en un aparato, en el que se mueven y se irradian las bolsas de exposición, y en particular

no se sujetan entre dos superficies, por ejemplo placas de vidrio o plástico permeables a UV.

13. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición presentan una altura de llenado media de menos de 10 mm, preferiblemente menos de 5 mm, y, debido al movimiento, se generan constantemente valles de onda, que tienen grosores de capa de menos de la mitad de la

altura de llenado media, preferiblemente grosores de capa de menos de 1 mm o incluso menos de 0, 1 mm.

14. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición se mueven durante la irradiación constantemente con una amplitud de desde 0, 2 hasta 8 cm al menos en la dirección x y dado el caso también en la dirección y (dirección y perpendicular a la dirección x) e independientemente de ello la frecuencia de la variación de la dirección del movimiento de agitación asciende a de

0, 5 a 10 Hz.

15. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque las bolsas de exposición están llenas durante la irradiación hasta como máximo el 20% de su volumen de llenado máximo.