EXPRESIÓN DE TCL1 EN LA LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA (LLC) REGULADA POR MIR-29 Y MIR-181.

Expresión de TCL1 en la leucemia linfocítica crónica (LLC) regulada por MIR-29 y MIR-181 La presente invención se financió, total o parcialmente, con subvenciones del NIH, número de subvención/contrato PO1 CA81534. El Gobierno tiene ciertos derechos sobre la presente invención. Antecedentes de la invención La leucemia linfocítica crónica (LLC-B) es la leucemia humana más frecuente en todo el mundo, constituyendo aproximadamente 10.000 casos nuevos todos los años en EE.UU. 1 El encogen TOL1 (leucemia de células T/linfoma 1) se descubrió como diana de frecuentes reorganizaciones cromosómicas en 14q31.2 en las leucemias de células T maduras. 2 Anteriormente se ha dado a conocer que los ratones transgénicos que expresan TCL1 en las células B desarrollan LLC-B. 3 En el presente documento, el inventor cree ahora que la alteración de la regulación de TCL1 puede ser un acontecimiento causal en la patogenia de la LLC-B, ya que el inventor ha demostrado también que el TCL1 es un co-activador de la oncoproteína Akt, una molécula crucial en la transducción de las señales antiapoptosis en las células B y T. 4 En un informe reciente se ha sugerido que una expresión elevada de TCL1 en la LLC humana se correlaciona con un estado de VH sin mutar y positividad para ZAP70, lo que sugiere que la LLC dirigida por TCL1 es una forma agresiva de LLC-B. 5 Uno de los factores genéticos más significativos asociados con un mal pronóstico de la LLC-B es la deleción en el cromosoma 11q. 6 Los microARN son una familia grande de genes no codificadores altamente conservados que se piensa que están implicados en la regulación génica temporal y específica de tejido. 7 Recientemente, los inventores han demostrado que los perfiles de expresión de los microARN se pueden usar para distinguir las células B normales de las células de LLC-B malignas y que las firmas de microARN están asociadas con el pronóstico y la progresión de la leucemia linfocítica crónica. 8,9 El documento WO 2005/118806 divulga que miR-181b se expresa a niveles elevados en muestras de leucemia linfocítica crónica (LCC) en comparación con los controles sanos y divulga además que los miARN que constantemente se ha observado que están regulados por disminución o por aumento en pacientes con LLC se podrían usar para diagnosticar pacientes y que estos miARN representan posibles dianas para desarrollo terapéutico. Actualmente no se dispone de ningún procedimiento de éxito universal para el tratamiento o la prevención de la LLC- B. El curso del tratamiento a menudo se selecciona en base a varios parámetros pronósticos, incluido un análisis de marcadores tumorales específicos. A pesar de la considerable investigación sobre terapias para la LLC-B, la LLC sigue siendo difícil de diagnosticar y tratar con eficacia y la mortalidad observada en los pacientes indica que se necesitan mejoras en el diagnóstico, tratamiento y prevención de la enfermedad. Sumario de la invención La presente invención se basa, en parte, en la identificación de una firma específica de cáncer de leucemia linfocítica crónica de miARN que se expresan de forma diferencian en las células del cáncer de mama, con respecto a las células normales control. De acuerdo con esto, la invención abarca procedimientos de diagnóstico, tenga un sujeto, o esté en riesgo de desarrollar, leucemia linfocítica crónica (LLC-B), que comprende medir el nivel de al menos un producto génico de miR en una muestra de ensayo de dicho sujeto, en el que una alteración en el nivel del producto génico de miR en la muestra de ensayo, respecto al nivel de un producto génico de miR correspondiente en una muestra control, es indicativo del sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, LLC-B. En ciertas realizaciones, al menos un producto génico de miR es miR-29 o miR-181. En ciertas realizaciones, el al menos un producto génico de miR es miR-29b y/o miR-181b. El nivel del al menos un producto génico de miR se puede medir usando diversas técnicas que son bien conocidas para los expertos en la técnica. En una realización, el nivel del al menos un producto génico de miR se mide usando análisis de transferencia Northern. En otra realización, el nivel del al menos un producto génico de miR en la muestra de ensayo es menor que el nivel del correspondiente producto génico de miR en la muestra control. Asimismo, en otra realización, el nivel del al menos un producto génico de miR en la muestra de ensayo puede ser mayor que el nivel del correspondiente producto génico de miR en la muestra control. La invención también proporciona procedimientos de diagnóstico de una LLC-B asociada con uno o más marcadores 2   pronósticos en un sujeto, que comprende medir el nivel de al menos un producto génico de miR en una muestra de LLC-B de dicho sujeto, en el que una alteración en el nivel del al menos un producto génico de miR en la muestra de ensayo, respecto al nivel de un producto génico de miR correspondiente en una muestra control, es indicativo del sujeto que tiene LLC-B asociada con el uno o más marcadores pronósticos. En una realización, el nivel del al menos un producto génico de miR se mide mediante transcripción inversa del ARN de una muestra de ensayo obtenida del sujeto para proporcionar un conjunto de oligodesoxinucleótidos diana; hibridación de los oligodesoxinucleótidos diana con una micromatriz que comprende oligonucleótidos sonda específicas del miARN, para proporcionar un perfil de hibridación para la muestra de ensayo; y, comparación del perfil de hibridación de la muestra de ensayo con un perfil de hibridación generado a partir de una muestra control. Una alteración en la señal del al menos un miARN es indicativa del sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, LLC-B. La invención también abarca procedimientos de tratar la LLC en un sujeto, en los que la regulación de la señal del al menos un miARN, respecto a la señal generada a partir de la muestra control, está alterada (p. ej., regulada por disminución, regulada por aumento). En ciertas realizaciones, una micromatriz comprende oligonucleótidos sonda específicos de miARN para uno o más miARN seleccionados del grupo que consiste en miR29 o miR-181 y combinaciones de los mismos. La invención también abarca procedimientos de diagnóstico, tenga un sujeto, o estén en riesgo de desarrollar, una LLC-B asociada con uno o más marcadores pronósticos adversos en un sujeto mediante transcripción inversa del ARN de una muestra de ensayo obtenida del sujeto para proporcionar un conjunto de oligodesoxinucleótidos diana; hibridación de los oligodesoxinucleótidos diana con una micromatriz que comprende oligonucleótidos sonda específicas del miARN, para proporcionar un perfil de hibridación para la muestra de ensayo; y, comparación del perfil de hibridación de la muestra de ensayo con un perfil de hibridación generado a partir de una muestra control. Una alteración en la señal es indicativa del sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, el cáncer. La invención también abarca procedimientos de tratar la LLC-B en un sujeto que tiene una LLC-B en la que al menos un producto génico de miR está regulado por disminución o regulado por aumento en las células cancerosas del sujeto con respecto a las células control. Cuando el al menos un producto génico de miR está regulado por disminución en las células cancerosas, el procedimiento comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos un producto génico de miR aislado, de modo que la proliferación de las células cancerosas en el sujeto está inhibida. Cuando el al menos un producto génico de miR está regulado por aumento en las células cancerosas, el procedimiento comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de al menos un compuesto para inhibir la expresión del al menos un producto génico de miR aislado, de modo que la proliferación de las células cancerosas en el sujeto está inhibida. En ciertas realizaciones, el al menos un producto génico de miR aislado se selecciona de miR-29, miR-181 y combinaciones de los mismos. En realizaciones relacionadas, la invención proporciona procedimientos de tratar la LLC-B en un sujeto, que comprende: determinar la cantidad del al menos un producto génico de miR en células de LLB-C, respecto a las células control; y alterar la cantidad del producto génico de miR expresado en las células de LLC-B mediante: Administración al sujeto una cantidad eficaz de al menos un producto génico de miR aislado, si la cantidad del producto génico de miR expresado en las células cancerosas es inferior a la cantidad de producto génico de miR expresado en las células control; o administración al sujeto de una cantidad eficaz de al menos un compuesto para inhibir la expresión del al menos un producto génico de miR, si la cantidad del producto génico... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de diagnóstico, tenga un sujeto, o esté en riesgo de desarrollar, leucemia linfocítica crónica (LLC-B), que comprende medir el nivel de al menos un producto génico de miR-29b y un producto génico de miR- 181b en una muestra de ensayo de dicho sujeto, en el que una disminución en el nivel del producto génico de miR- 209b y una disminución en el nivel del producto génico de miR-181b en la muestra de ensayo, respecto al nivel del correspondiente producto génico de miR-29b y del producto génico de miR-181b en una muestra control es indicativo del sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, LLC-B. 2. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el nivel de los productos génicos de miR-29b y miR-181b se miden usando análisis de transferencia Northern. 3. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el nivel de al menos el producto génico de miR- 29b y del producto génico de miR-181b se mide mediante un procedimiento que comprende: (1) transcripción inversa de ARN desde una muestra de ensayo obtenida del sujeto para proporcionar un grupo de oligodesoxinucleótidos diana: (2) hibridar los oligodesoxinucleótidos diana con una micromatriz que comprende sondas oligonucleotídicas específicas de miARN para al menos miR-29b y miR-181b, para proporcionar un perfil de hibridación para la muestra de ensayo; y (3) comparar el perfil de hibridación de la muestra de ensayo con un perfil de hibridación generado a partir de una muestra control. en el que una disminución en la señal de al menos es indicativa del sujeto que tiene, o está en riesgo de desarrollar, LLC-B. 4. Una composición farmacéutica para tratar la LLC-B, que comprende al menos un producto génico de miR-29n aislado y un producto génico de miR-181b aislado, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 5. Un procedimiento de identificación de un agente anti-LLC-B, que comprende proporcionar un agente de ensayo a una célula y medir el nivel de al menos un producto génico de miR-29b y un producto génico de miR-181b asociado con menores niveles de expresión en células de LLC-B, en el que un incremento del nivel del producto génico de miR-19b y del producto génico de miR-181b en la célula, respecto a una célula control adecuada, es indicativo de que el agente de ensayo es un agente anti-LLC-B.-{}- 19     21   22   23   24     26   27   28