PROCEDIMIENTO DE EVITAR CONDENSACIÓN DE VIRUS: CÉLULAS INHIBIENDO LA FUNCIÓN DE LA REGIÓN DE INICIACIÓN DE CONDENSACIÓN EN LOS VIRUS ARN QUE TIENEN PROTEÍNAS DE ENVOLTURA FUSOGÉNICAS DE MEMBRANA DE CLASE I.

Procedimiento de evitar condensación de virus: células inhibiendo la función de la región de iniciación de condensación en los virus ARN que tienen proteínas de envoltura fusogénicas de membrana de clase I La presente solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de los Estados Unidos de Número de Serie 60/169,066 presentada el 4 de noviembre de 2.003. Campo de la invención La presente invención se refiere a péptidos para usar en evitar o inhibir infección vírica por el virus influenza de una célula (evitando por lo tanto la entrada del genoma vírico dentro del citoplasma celular, una etapa requerida para infección vírica). La presente invención proporciona composiciones y usos de las mismas en evitar infección por virus influenza interfiriendo con su región de iniciación de condensación (FIR). Introducción Todos los virus deben unirse a, e invadir, sus células objetivo para multiplicarse. Para virus animales provistos de envoltura, incluyendo virus ARN que tienen proteínas de membrana de Clase I (virus de Tipo I), el procedimiento implica (a) unión del virión a la célula objetivo, (b) condensación de la membrana del virus con la membrana plasmática o con una membrana celular interna, (c) desestabilización de la envoltura vírica y de la membrana celular en la zona condensada para crear un poro de condensación, (d) transferencia del ARN vírico a través del poro y (e) modificación de la función celular por el ARN vírico. La fusión de la membrana vírica y la envoltura celular, etapas (b) y (c) anteriores, está mediada por la interacción de una glucoproteína transmembrana vírica (proteína de condensación) con proteínas de superficie y membranas de la célula objetivo. Estas interacciones causan cambios conformacionales en la proteína de condensación que dan como resultado la inserción de un péptido vírico dentro de la membrana de la célula objetivo. Esta inserción está seguida por cambios conformacionales adicionales en la proteína de condensación que llevan a proximidad cercana a la envoltura celular y a las membranas celulares y que dan cono resultado la condensación de las dos bicapas membranosas. Un virus es incapaz de dispersarse y propagarse dentro de su hospedador si este proceso de condensación está alterado. La alteración intencionada de este procedimiento de condensación se puede lograr dirigiendo péptidos y peptidomiméticos homólogos a secuencias de proteínas de condensación, anticuerpos que reconocen la proteína de condensación y otros factores que actúan contra la proteína de condensación. Antecedentes de la invención Similaridades estructurales entre proteínas de condensación de Clase I de virus ARN. La hemaglutinina 2 (HA2) del virus influenza, un ortomixovirus, es la proteína de condensación de virus de ARN de Clase I prototípica y contiene un dominio hidrófobo aminoterminal, referido como el péptido de condensación, que se expone durante la escisión de la proteína precursora de hemaglutinina. Las proteínas de condensación de membrana de virus ARN de diversas familiasincluyendo arenavirus, coronavirus, filovirus, ortomixovirus, paramixovirus y retrovirus, comparten varias características estructurales comunes con HA2 y se han referido como proteínas de condensación vírica de Clase I. Se ha observado que la proteína de condensación del VIH-1, la glucoproteína transmembrana y otras proteínas transmembrana retrovíricas como aquellas de los ortomixovirus y paramixovirus, poseen un dominio peptídico de condensación hidrófoba expuesto durante la escisión de un precursor (gp160) (Gallaher, 1987; Gonzalez-Scarano y cols.. , 1987). En base a estas similitudes y a algoritmos de ordenador que predicen configuraciones de proteínas, se ha sugerido (Gallaher y cols., 1989) que la parte externa (ectodominio, extremo amino) de la proteína transmembrana de VIH-1 y las proteínas transmembrana de otros retrovirus, podrían ajustarse todas al armazón de estructura de HA2 según se determina por cristalografía de rayos X (Wilson, Skehel, y Wiley, 1981). En base a estas observaciones, se espera que las proteínas retrovíricas transmembrana contengan varias características estructurales además del péptido de condensación en común con la estructura conocida de HA2, incluyendo una hélice aminoterminal expandida (hélice N, normalmente una "héptada repetitiva" o "cremallera de leucina"), una hélice carboxiloterminal (hélice C) y un resto aromático proximal al dominio transmembrana. La presencia de al menos cuatro de estos cinco dominios define a una proteína de envoltura vírica como una proteína de condensación de Clase I. Este modelo de proteínas transmembrana retrovíricas se confirmó subsiguientemente por determinaciones estructurales y análisis mutacionales (Chan y cols.. , 1997; Kowalski y cols.. , 1991; Weissenhorn y cols.. , 1997). Están presentes restos estructurales comunes no sólo en proteínas de condensación de ortomixovirus y retrovirus, sino también en aquellas de paramixovirus, filovirus (tales como virus Ébola, EboV) (Gallaher, 1996) y arenavirus (Gallaher, DiSimone, y Buchmeier, 2001). El modelo estructural de Gallaher de la proteína de condensación EboV (GP2) se ha confirmado también por procedimientos cristalográficos de rayos x (Malashkevich y cols.. , 1999; Weissenhom y cols., 1998). El documento WO 94/17826 describe polipéptidos para usar en preparar vacunas contra influenza A e influenza B, incluyendo la proteína HA. Se han comunicado polímeros de 16 unidades de péptidos sintéticos de hemaglutinina (Gelder y cols., 1995). Los péptidos de proteína de hemaglutinina de del 2   virus de la influenza se describen también en el documento 2003/0180328. Figura 1 muestra los cinco dominios, previamente descritos, de las proteínas de condensación de las seis familias de los virus de Tipo I. Las proteínas de condensación se originan en un péptido de condensación hidrófoba, terminan en un péptido ancla e incorporan una hélice alfa aminoterminal expandida (hélice N, usualmente una "héptada repetitiva" o una "cremallera de leucina") una hélice alfa carboxiterminal (hélice C) (Carr y Kim, 1993; Suárez y cols.. , 2000; Wilson, Skehel, y Wiley, 1981), y algunas veces un resto aromático proximal a la envoltura del virión. También se muestra el sexto dominio, la región de iniciación de la condensación (FIR), descubierta por los autores de la presente invención. Inhibición de la condensación en los virus de Tipo I Los intentos anteriores por los autores de la presente invención (Garry) y otros para diseñar péptidos y peptidomiméticos, anticuerpos y otros factores que inhiban condensación en virus tipo se han centrado en el péptido de condensación, la hélice N y la hélice C de las proteínas de condensación. En el caso de los péptidos de condensación, se ha encontrado que análogos de los ortomixovirus y paramixovirus (Richardson, Scheid, y Choppin, 1980) y dominios de péptidos de condensación (Gallaher y cols.. , 1992; Owens y cols.. , 1990; Silburn y cols.. 1998), bloquean la infección vírica, presumiblemente formando heteroagregados inactivos. Se ha encontrado que los péptidos correspondientes a partes de la hélice N y la hélice C son efectivos en inhibir infección vírica tanto in vitro como in vivo. Por ejemplo, un péptido de 17 aminoacídicos correspondiente a la parte carboxiterminal de la hélice N de la proteína de condensación del VIH-1, definida como la región CS3, bloqueó la infección con VIH (Qureshi y cols.. , 1990). Además, otros péptidos inhibidores de hélice N y hélice C se desarrollaron en base al modelo estructural de proteína de condensación (Wild, Greenwell, y Matthews,1993; Wild y cols.. , 1992), incluyendo la el fármaco peptídico anti-VIH-1 de hélice C DP178 (T-20 o FUZEON®). DP178 se solapa con la hélice C y el dominio proximal de ancla aromático e inhibe condensación de virión de VIH-1:célula a concentraciones muy bajas (inhibición del 50% a 1,7 nM) in vivo tras la inyección. En un ensayo clínico, 100 mg/día de DP178 causaron una reducción de aproximadamente 100 veces en la carga de VIH-1 en plasma de individuos infectados (Kilby y cols.. , 1998). Este resultado ha motivado ampliamente la búsqueda de otros péptidos inhibidores de VIH-1 en base a la estructura de proteínas transmembrana (Pozniak, 2001; Sodroski, 1999). Los inhibidores peptídicos de paramixavirus han mostrado también inhibir la replicación vírica (Lambert y cols.. , 1996; Young y cols.. , 1999). Los estudios por Watanabe y colaboradores sugieren que un enfoque similar de marcar como objetivo la hélice N y la hélice C de EboV GP2 puede conducir también a inhibidores útiles (Watanabe y cols.. , 2000). Anticuerpos neutralizantes dirigidos contra partes de los dominios de la proteína de condensación han mostrado también... [Seguir leyendo]

1. Un péptido aislado para usar en tratar gripe, constituido el péptido por una secuencia de SEC ID N.º: 4 o un segmento de 8 a 40 aminoácidos contiguos del mismo, en el que dicho péptido inhibe la infección vírica por el virus influenza. 2. Uso de un péptido según se define en la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para tratar gripe en un paciente. 3. Uso de una composición que comprende una molécula de ADN recombinante que permite a un paciente producir o estimula a un paciente para producir el péptido según se define en la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para tratar gripe en el paciente. 4. Una composición que comprende una molécula de ADN recombinante que permite o estimula a un paciente para producir el péptido según se define en la reivindicación 1 para tratar gripe en el paciente. 5. Un agente de inhibición de condensación vírica que comprende un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos constituida por 8 a 50 residuos de aminoácidos para usar en tratar gripe, en el que el péptido comprende un péptido constituido por 8 a 40 residuos de aminoácidos contiguos de SEC ID N.º: 4. 6. Uso de un agente que inhibe la condensación vírica de la reivindicación 5 para la preparación de un medicamento para tratar gripe en paciente. 33   34   GP2 de virus LASSA Figura 2   S de CoV de SARS Figura 3 36   GP2 de virus Ébola Figura 4 37   HA2 de virus INFLUENZA Figura 5 38   F1 de virus del sarampión Figura 6 39   TM de VIH-1 Figura 7   Figura 8 41   Figura 9 42