Procedimiento para dirigir células que expresan receptor -3 o -2 del factor de crecimiento de fibroblastos.

Una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina,

para su uso en la dirección de células tumorales que sobreexpresan Receptor-2 de FGF y/o Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-2 de FGF y/o el Receptor-3 de FGF; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

(ii) restos de aminoácidos 28-207 de SEC ID Nº: 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácidos 28-196 de SEC ID Nº: 2;

(ii) restos de aminoácidos 28-175 de SEC ID Nº: 2;

(iii) restos de aminoácidos 28-196 de SEC ID Nº: 4; y

(iv) restos de aminoácidos 28-175 de SEC ID Nº: 4; y

y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula

Procedimiento para dirigir células que expresan receptor -3 ó -2 del factor de crecimiento de fibroblastos Campo técnico La presente invención se refiere en general a composiciones que contienen un componente del factor de crecimiento de fibroblastos-18 como se define en las reivindicaciones, para dirigir una citotoxina a células que expresan receptor3 del factor de crecimiento de fibroblastos o receptor-2 del factor de crecimiento de fibroblastos.

Antecedentes de la invención El mieloma múltiple representa la segunda malignidad hematológica más común, con cerca de 15.000 nuevos casos cada año en los Estados Unidos (Henrick y col., Curr. Opin. Hematol. 5: 254 (1998) ) . La enfermedad se caracteriza por la proliferación maligna de células plasmáticas que implica más del 10% de la médula ósea (George y Sadovsky, Am. Fam. Physician 59:1885 (1999) ) . Las células de mieloma múltiple producen inmunoglobulinas monoclonales que se pueden identificar con electroforesis de proteína en suero u orina. Las manifestaciones clínicas más comunes incluyen dolor óseo, debilidad y fatiga (Kyle, Pathol. Biol. (Paris) 47:148 (1999) ) .

La quimioterapia convencional para mieloma múltiple se introdujo hace más de 30 años y desde entonces, ha habido poca mejora en el índice de supervivencia global (San Miguel y col., Haematologica 84:36 (1999) ) . A pesar de una amplia diversidad de opciones de tratamiento quimioterapéutico y paliativo, el mieloma múltiple es casi invariablemente fatal (Anderson y col., Semin. Hematol. 36 (Supl. 3) : 3 (1999) ) . Aunque la quimioterapia de dosis elevadas seguida por trasplante de células madre produce índices de remisión más elevados, los pacientes rara vez, si acaso alguna vez, se curan mediante un régimen único (Anderson y col., Semin. Hematol. 36 (Supl. 3) : 3 (1999) ) . La recaída es inevitable en todos excepto un pequeño número de casos y para la mayoría de los casos, el tratamiento únicamente produce, en el mejor de los casos, periodos de remisión con morbilidad y mortalidad relacionada con el tratamiento mínima (Smith y Newland, QJM 92: 11 (1999) ) . La supervivencia promedio total para todas las etapas de mieloma múltiple es de aproximadamente 3 años (Henrick y col., Curr. Opin. Hemetol. 5: 254 (1998) ; George y Sadovsky, Am. Fam. Physician 59: 1885 (1999) ) .

El documento WO 98/16644 describe homólogos de factores de crecimiento de fibroblastos (FGF) .

El documento WO 90/12597 describe conjugados de factores de crecimiento de fibroblastos (FGF) .

Hu Mickey CT y col., Molecular and Cellular Biology, Vol.18, Nº 10, octubre de 1998, págs 6063-6074, describen proliferación hepática e intestinal estimulada por FGF-18.

Colt-Fresno PM y col., Oncogene (16 de enero de 1997) Vol. 14 (2) , páginas 243-247, describen la actividad citolítica de una toxina de difteria/mitotoxina de FGF-6 sobre líneas de células tumorales humanas.

Por consiguiente, todavía existe una necesidad de procedimientos y composiciones mejorados para tratar el mieloma múltiple.

La presente invención proporciona una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina, para su uso en la dirección de células tumorales que sobreexpresan Receptor2 de FGF y/o Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al receptor de FGF-2 y/o el receptor de FGF-3; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácidos 28-207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácidos 28-207 de SEC ID Nº : 4; y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácidos 28-196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácidos 28-175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácidos 28-196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácidos 28-175 de SEC ID Nº : 4.

Por tanto, la presente invención proporciona composiciones para su uso como se ha definido en las reivindicaciones, que se dirigen a células humorales que expresan receptor-2 ó 3 del factor de crecimiento de fibroblastos. La presente invención también proporciona la inhibición de la proliferación celular usando tales composiciones. Estos y otros aspectos de la invención serán evidentes tras la referencia a la siguiente descripción detallada.

La familia del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) consiste en al menos dieciocho miembros diferentes, que generalmente actúan como mitógenos para un amplio espectro de tipos celulares (Basilico y col., Adv. Cancer Res.

59: 115 (1992) ; Fernig y col., Prog. Growth Factor Res. 5: 353 (1994) ) . Por ejemplo, FGF básico (también conocido como FGF-2) es mitógeno in vitro para células endoteliales, células de músculo liso vascular, fibroblastos y en general para células de origen mesodérmico o neuroectodérmico, incluyendo miocitos cardíacos y esqueléticos (Gospodarowicz y col., J. Cell. Biol. 70: 395 (1976) ; Gospodurowicz y col., J. cell Biol. 89: 568 (1981) ; Kardami, J. Mol. Cell. Biochem. 92: 124 (1990) ) . Diversos miembros de la familia de FGF también estimulan efectos no mitógenos, incluyendo liberación endotelial aumentada de activador de plasminógeno tisular, estimulación de síntesis de matriz extracelular, quimiotaxis de células endoteliales, expresión inducida de genes contráctiles fetales en cardiomiocitos y respuesta hormonal de la pituitaria potenciada (Baird y col., J. Cellular Physiol. 5: 101 (1987) ; Parker y col., J. Clin. Invest 85: 507 (1990) ) .

Deisher y col., publicación internacional Nº WO98/16644, describieron el descubrimiento de una nueva secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido homólogo de FGF que comparte homología con FGF-8 y FGF-17 (Hoshikawa y col., Biochem Biophys. Res. Comm. 244: 187 (1998) ) . El análisis de secuencia de una molécula de ADNc que codifica el nuevo FGF, denominada "zFGF5", reveló la secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 1, que incluye una fase de lectura abierta que codifica 207 aminoácidos (SEC ID Nº : 2) que comprende un polipéptido maduro de 180 aminoácidos (resto 28 a resto 207 de SEC ID Nº : 2) . El alineamiento múltiple de zFGF5 con otros polipéptidos de FGF conocidos reveló un bloque de porcentaje de identidad significativo correspondiente al resto de aminoácido Cys127 con el resto de aminoácido Tyr138 de SEC ID Nº : 2. El análisis de la distribución de tejido del ARNm humano que corresponde a este ADN novedoso mostró que la expresión fue más elevada en tejido cardíaco fetal y tejido cardíaco adulto, seguido por niveles de expresión evidentes pero disminuidos en pulmón fetal, músculo esquelético, tejidos de músculo liso tales como intestino delgado, colon y tráquea.

Un ADNc de zFGF5 murino se clonó usando la reacción en cadena de la polimerasa con una biblioteca de ADNc de embrión de ratón como un molde y cebadores oligonucleotídicos diseñados a partir de los extremos 5' y 3' del ADNc de zFGF5 humano (Deisher y col., publicación internacional Nº WO98/16644) . La secuencia polinucleotídica de zFGF5 murina se muestra en SEC ID Nº : 3 y la secuencia de aminoácidos correspondiente se muestra en SEC ID Nº : 4. A nivel de aminoácido, los polipéptidos murino y humano son aproximadamente el 98% idénticos, con los siguientes tres cambios de aminoácidos: resto de aminoácido 26 es valina en la secuencia humana y alanina en la secuencia murina, el resto de aminoácido 183 es prolina en la secuencia humana y alanina en la secuencia murina y el resto de aminoácido 207 es alanina en la secuencia humana y glicina en la secuencia murina. Ya que los veintiséis restos de aminoácido de ambas secuencias aparecen en la secuencia señal secretora, existen únicamente dos diferencias de aminoácido en los polipéptidos maduros.

La nueva forma de FGF también se ha descrito por Hu y col., Mol. Cell. Biol. 18: 6063 (1998) , Ohbayashi y col., J. Biol. Chem. 273: 18161 (1998) y Hu y col., Oncogene 18: 2635 (1999) ) . Siguiendo la convención de nomenclatura de FGF, estos grupos designaron el nuevo polipéptido como "FGF-18". Por consiguiente, zFGF5 se denomina en el presente documento FGF-18.

Existen cuatro receptores de FGF extracelulares conocidos y los mismos son todos tirosina quinasas. En general, los miembros de la familia FGF se unen a todos los receptores de FGF conocidos, sin embargo, formas de FGF específicas se unen a receptores... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina, para su uso en la dirección de células tumorales que sobreexpresan Receptor-2 de FGF y/o Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-2 de FGF y/o el Receptor-3 de FGF; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4; y y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula.

2. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 2 o SEC ID Nº : 4.

3. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que la citotoxina se selecciona entre proteínas inactivadoras de ribosomas, inmunomoduladores, fármacos quimioterapéuticos, inhibidores de tirosina quinasa, quelantes, compuestos de boro, compuestos fotoactivos, isótopos radiactivos, ribonucleasas, DNasa 1, enterotoxina-A estafilocócica, toxina de difteria, exotoxina de Pseudomonas y endotoxina de Pseudomonas.

4. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 es un fragmento funcional de FGF-18 que comprende los restos de aminoácidos 28 a 196 de SEC ID Nº : 2.

5. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 es un fragmento funcional de FGF-18 que comprende los restos de aminoácidos 28 a 175 de SEC ID Nº : 2.

6. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 comprende restos de aminoácidos 28 a 207 de SEC ID Nº : 4.

7. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 es un fragmento funcional de FGF-18 que comprende los restos de aminoácidos 28 a 196 de SEC ID Nº : 4.

8. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el polipéptido de FGF-18 es un fragmento funcional de FGF-18 que comprende los restos de aminoácidos 28 a 175 de SEC ID Nº : 4.

9. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en la que el polipéptido de FGF-18 y la citotoxina están unidos covalentemente entre sí.

10. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en la que la composición comprende un conjugado de FGF-18.

11. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en la que el conjugado de FGF-18 es un conjugado de FGF-18-saporina.

12. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en la que la composición comprende una proteína de fusión de dirección de FGF-18.

13. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en la que la proteína de fusión de dirección de FGF-18 comprende una citotoxina seleccionada entre el grupo que consiste en proteína inactivadora de ribosomas de tipo I, proteína inactivadora de ribosomas de tipo II, inmunomodulador, ribonucleasa, DNasa 1, enterotoxina-A estafilocócica, toxina de difteria, exotoxina de Pseudomonas y endotoxina de Pseudomonas.

14. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en la que el polipéptido de FGF-18 está unido a la superficie de un liposoma y en la que la citotoxina está encapsulada en el liposoma.

15. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en la que la citotoxina se selecciona entre el grupo que consiste en proteína inactivadora de ribosomas, inmunomodulador, fármaco quimioterapéutico, inhibidor de tirosina quinasa, quelante, compuesto de boro, agente fotoactivo e isótopo radiactivo.

16. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para su uso en el tratamiento de cánceres epiteliales.

17. Una composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 16, en la que dichos cánceres epiteliales se seleccionan entre carcinoma de vejiga o carcinoma de cérvix.

18. Una composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-15, para su uso en el tratamiento de mieloma múltiple, osteosarcoma o carcinoma de tiroides.

19. Una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina, para su uso en el tratamiento de acondroplasia relacionada con sobreexpresión de Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-3 de FGF; y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4.

20. Una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina para su uso en el tratamiento de ateroesclerosis relacionada con sobreexpresión de Receptor-2 de FGF y Receptor3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-3 de FGF; y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4.

21. Uso de una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina, para la preparación de un medicamento para dirigirse a células tumorales que sobreexpresan Receptor-2 de FGF y/o Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-2 de FGF y/o el Receptor-3 de FGF; y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4.

22. Uso de una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo y una citotoxina, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de acondroplasia relacionada con sobreexpresión del Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-3 de FGF; y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4.

23. Uso de una composición que comprende un polipéptido de FGF-18 o un fragmento funcional del mismo, y una citotoxina para la preparación de un medicamento para tratar ateroesclerosis relacionada con la sobreexpresión de Receptor-2 de FGF y Receptor-3 de FGF, en la que el polipéptido de FGF-18 o fragmento funcional dirige la composición al Receptor-2 de FGF y el Receptor-3 de FGF; y en la que la citotoxina es capaz de causar la muerte de una célula o es capaz de inhibir el crecimiento de una célula; y en la que el polipéptido de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 2; y

(ii) restos de aminoácido.

2. 207 de SEC ID Nº : 4, y

en la que el fragmento funcional de FGF-18 comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en:

(i) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 2;

(ii) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 2;

(iii) restos de aminoácido.

2. 196 de SEC ID Nº : 4; y (iv) restos de aminoácido.

2. 175 de SEC ID Nº : 4.