Procedimiento in vitro de detección de una hipertensión arterial pulmonar (HAP),

o de un riesgo de desarrollar una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C en una muestra biológica procedente de un paciente, siendo la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C indicadora de una HAP o de un riesgo de desarrollar una HAP.

Procedimiento de diagnóstico de la hipertensión arterial pulmonar.

La presente invención se refiere al diagnóstico y al seguimiento de una hipertensión arterial pulmonar.

Estado de la técnica:

La hipertensión arterial pulmonar (HAP) es una patología rara responsable de la aparición de descompensación cardiaca derecha que puede dar lugar la muerte. La HAP se define por la puesta en evidencia por cateterismo derecho de una presión arterial pulmonar media superior o igual a 25 mm de Hg en reposo o a 30 mm de Hg con esfuerzo en ausencia de subida de la presión capilar pulmonar (Rubin, 1997) . La aparición de una HAP es la consecuencia de una obstrucción crónica de las pequeñas arterias pulmonares secundaria a la proliferación de células endoteliales, de células musculares lisas vasculares y de fibroblastos (Dorfmuller et al, 2003) . En particular, durante la HAP severa, se forma una capa de miofibroblastos y de matriz extracelular que se localiza entre el endotelio y el limitante elástico interno, denominada neoíntima, que es característica de esta afección.

La HAP puede aparecer en la evolución de patologías de componente autoinmune que son los conectivos, en particular, la esclerodermia sistémica (Hachulla el al, 2005) , el síndrome de Sharp y el lupus eritematoso sistémico. Además, durante la HAP idiopática, se encuentra de vez en cuando otros estigmas de autoinmunidad, a saber anticuerpos antinucleares o anticuerpos antitiroglobulina.

Se relacionó la presencia de anticuerpos anticélulas endoteliales (Tamby et al, 2005) y de anticuerpos antifibroblastes (Tamby et al, 2006) durante la HAP idiopática o se asoció a la esclerodermia sistémica. Sin embargo no se estudió el valor predictivo de estos anticuerpos en la aparición de la HAP y la función potencial de los fenómenos autoinmunes en la patogenia de la HAP idiopática sigue siendo incierta (Mouthon et al, 2005) .

En la mayoría de los casos, la HAP se detecta cuando el paciente presenta una disnea de fase III o IV. Cuando se sigue al paciente por una enfermedad crónica como la esclerodermia sistémica, la HAP se detecta por una ecografía cardiaca anual.

Sin embargo, un ensayo simple y fiable de detección de una HAP falta siempre, y sería preciosa para un diagnóstico lo más precoz posible, que permitiría establecer rápidamente estrategias terapéuticas para mejorar el estado del paciente y sus posibilidades de supervivencia.

Resumen de la invención:

La invención proporciona ahora un procedimiento in vitro de detección de una HAP, o de un riesgo de desarrollar una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C (TN-C) en una muestra biológica procedente de un paciente, siendo la presencia de anticuerpos anti-TN-C indicadora de una HAP o de un riesgo de desarrollar una HAP.

Preferentemente, la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C en la muestra biológica se compara con un valor de control, la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C en una cantidad superior al valor de control siendo indicadora de una HAP o de un riesgo de desarrollar una HAP.

Otro objeto de la invención es un procedimiento in vitro de pronóstico o de seguimiento de una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-TN-C en una muestra biológica procedente de un paciente, en distintos tiempos, siendo el aumento de la cantidad de anticuerpos anti-TN-C a lo largo del tiempo indicativo de una agravación de la HAP.

Otro objeto de la invención es un procedimiento in vitro de evaluación de la eficacia de un tratamiento hacia una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-TN-C en una muestra biológica procedente de un paciente, en distintos tiempos antes, a lo largo o después del tratamiento, siendo la disminución de la cantidad de anticuerpos anti-TN-C a lo largo del tiempo indicativo de una mejora de la HAP.

Descripción detallada de la invención:

La TN-C se expresa en el interior y alrededor de los vasos sanguíneos en el pulmón fetal (Rettig et al, 1994) , pero no se expresa a continuación ya en las arterias pulmonares adultas normales (Jones et al, 1996) . Por otra parte, la pérdida de señalización mediante BMPRII, en el origen de un defecto de células T reguladoras que pueden predisponer a la aparición de una HAP (Nicoles et al, 2005) , puede también inducir la expresión de la TN-C in vivo y sobre células vasculares en cultivo (Ihida-Stansbur y et al, 2006) . Sobre esta base, los inventores emitieron la hipótesis que pacientes que tienen una HAP pueden desarrollar una respuesta inmune dirigida contra la TN-C. Por eso decidieron buscar anticuerpos anti-TN-C en el suero de pacientes afectados por la HAP.

Los inventores así pudieron poner de relieve una correlación entre la aparición de una HAP y la producción de anticuerpos anti-TN-C. Sobre esta base, proponen un procedimiento in vitro de diagnóstico o de pronóstico de una HAP, o de un riesgo de desarrollar una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-TN-C en una muestra biológica procedente de un paciente. Los anticuerpos anti-TN-C detectados son preferentemente immunoglobulinas G (IgG) .

Definiciones La Tenascina C (o TN-C) es una glicoproteína de la matriz extracelular. Se conoce también bajo el nombre de hexabraquion o citotactina. Se recoge una secuencia de la TN-C humana en anexo (SEQ ID nº 1) .

El término “muestra biológica” se refiere a cualquier muestra biológica procedente de un paciente. Ejemplos de muestras incluyen líquidos biológicos, biopsias de los tejidos orgánicos. De manera preferente, la muestra puede ser de sangre, de suero, de saliva, de orina o de esperma. De manera más preferente, la muestra biológica es una muestra de sangre o de suero.

El término “paciente” se refiere a cualquier sujeto susceptible de ser ensayado. Preferentemente se trata de un humano, pero el término incluye a cualquier otro mamífero, tal como perros, gatos, roedores, ganado, caballos, monos, etc. El paciente puede ser ensayado cualquiera que sea su sexo o su edad. El paciente puede ser un sujeto de riesgo, ser asintomático o presentar signos precoces o avanzadas de una HAP. Por ejemplo, el paciente puede ser un sujeto predispuesto a desarrollar una HAP, en particular un sujeto que lleva uno o varios cambios en el gene codificador para BMPRII.

El término “diagnóstico” significa la identificación de la patología o la evaluación del estado de severidad de la patología.

El término “pronóstico” significa la evaluación del riesgo de agravación, y de sus consecuencias.

El término “valor de control” se refiere a un valor basal que corresponde a la media de los valores obtenidos con la muestra biológica de sujetos sanos, no afectados por una HAP o una enfermedad susceptible de implicar una HAP. Puede tratarse de un valor estadístico de referencia.

Para evaluar la evolución de la patología, puede ser útil ensayar a un paciente y controlar el efecto de un tratamiento o la evolución de la patología, ensayando de nuevo al paciente, por ejemplo de varios meses de intervalo. En este caso, los resultados del segundo ensayo se comparan con los resultados del primer ensayo, así como a menudo al valor denominado “control”.

Una cantidad de anticuerpos anti-TN-C “superior al valor de control” significa generalmente un aumento estadísticamente significativo, por ejemplo de al menos dos desviaciones estándares por encima de la media de las densidades ópticas de las reactividades IgG del conjunto de los sujetos sanos.

Por “antígeno de captura”, se entiende un antígeno, preferentemente fijado sobre una fase sólida, que es capaz de retener el anticuerpos anti-TN-C presente en una muestra biológica, por enlace afin. El antígeno de captura se puede marcar.

El término “marcado” se refiere tanto a un marcado directo (por medio de enzimas, radioisótopos, fluorocromos, compuestos luminiscentes, etc…) como a un marcado indirecto (por ejemplo, por medio de anticuerpos ellos mismos marcados de manera directa o con la ayuda de reactivos de un “par de afinidad” marcado, tal cual, pero no exclusivamente, el par avidina marcada-biotina, etc…) .

Dosificación de... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro de detección de una hipertensión arterial pulmonar (HAP) , o de un riesgo de desarrollar una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C en una muestra biológica procedente de un paciente, siendo la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C indicadora de una HAP o de un riesgo de desarrollar una HAP.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el cual la muestra biológica es una muestra de sangre o de suero.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el cual la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C en la muestra biológica se compara con un valor de control, siendo la presencia de anticuerpos anti-Tenascina C en una cantidad superior al valor de control indicadora de una HAP o de un riesgo de desarrollar una HAP.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el cual la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C viene determinada por un inmunoensayo.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el cual el inmunoensayo es una dosificación ELISA.

6. Procedimiento según la reivindicación 4 ó 5, que incluye la puesta en contacto de una muestra biológica con una proteína que incluye el fragmento de aminoácidos 181 a 290 de la secuencia Tenascina C humana tal como se representa en SEQ ID N: 1.

7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el cual el paciente es un humano.

8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual el paciente sufre de una esclerodermia sistémica.

9. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual el paciente sufre de un síndrome de Sharp.

10. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual el paciente sufre de un lupus eritematoso sistémico.

11. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual el paciente sufre de una HAP idiopática.

12. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual la HAP se asocia a una hipertensión portal, a una cardiopatía congénita o a una infección por el virus de la immunodeficiencia humana (VIH) , o es una hipertensión pulmonar post embólica.

13. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual el paciente es un sujeto predispuesto a desarrollar una HAP, siendo dicho sujeto preferentemente portador de una o varias mutación (ones) en el gen codificador para BMPRII.

14. Procedimiento in vitro de pronóstico o seguimiento de una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C en una muestra biológica procedente de un paciente, en distintos tiempos, siendo el aumento de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C a lo largo del tiempo indicativa de una agravación de la HAP.

15. Procedimiento in vitro de evaluación de la eficacia de un tratamiento para una HAP, que incluye la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C en una muestra biológica procedente de un paciente, en distintos tiempos antes, a lo largo o después del tratamiento, siendo la disminución de la cantidad de anticuerpos anti-Tenascina C a lo largo del tiempo indicativa de una mejora de la HAP.

Densidad óptica relativa

Figura 1

Sujeto Sano

Supervivencia acumulada (negativa)

Eventos (negativo)

Supervivencia acumulada (positiva)

Eventos (positivo)

Tiempo (meses)

Figura 2