Combinación de un adenovirus oncolítico y un bloqueador de canal de calcio y su uso para el tratamiento del cáncer.

Combinación que comprende dos componentes: (a) el primer componente es una composición farmacéutica que comprende un bloqueador de canal de calcio junto con excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables; y (b) el segundo componente es una composición farmacéutica que comprende un adenovirus oncolítico junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable, así como su uso para administración separada o secuencial para el tratamiento del cáncer.También comprende el uso del bloqueador de canal de calcio en la combinación como potenciador de la actividad oncolítica del adenovirus

Combinación de un adenovirus oncolítico y un bloqueador de canal de calcio y su uso para el tratamiento del cáncer.

La presente invención está relacionada con la biología del cáncer. En particular, la presente invención se refiere a una combinación de un adenovirus oncolítico y un bloqueador de canal de calcio, la cual es efectiva en el tratamiento del cáncer.

Estado de la técnica

Los adenovirus oncolíticos representan una alternativa prometedora para el tratamiento del cáncer. Cuando se administra un adenovirus oncolítico, éste se replica de manera selectiva en las células tumorales. La posterior lisis de las células infectadas provoca la liberación de la progenie viral al medio extracelular y la progenie viral liberada se disemina lateralmente hacia células vecinas tumorales no infectadas. Como consecuencia de este mecanismo, se produce un efecto amplificador (multiplicativo) de la dosis viral inicial.

Sin embargo se han detectado ciertas limitaciones que repercuten negativamente en la diseminación del adenovirus lo cual, a su vez, afecta de manera negativa a la eficacia oncolítica de estos adenovirus.

En particular, cuando el adenovirus se administra por vía sistémica, el adenovirus se elimina rápidamente del torrente sanguíneo, lo que reduce la cantidad de virus disponible para la infección del tumor. Además, una vez han difundido al interior de la masa tumoral, los adenovirus oncolíticos deben hacer frente a las barreras físicas impuestas por el estroma tumoral (zona del tumor carente de células tumorales) y a la activación del sistema inmune (que provoca la destrucción de partículas víricas).

Adicionalmente, la diseminación intratumoral del adenovirus está seriamente limitada por la velocidad de liberación del virus al medio extracelular. La liberación del virus al medio extracelular no se inicia hasta las etapas más tardías del ciclo viral, cuando la expresión de la proteína ADP (en inglés "adenovirus death proten") se acumula en una cantidad suficiente como para promover la liberación de la progenie del interior de la célula hospedadora. A pesar de que el mecanismo de lisis celular y liberación de partículas víricas no se conoce con exactitud, distintas hipótesis sugieren que la proteína ADP funciona modificando los depósitos intracelulares de calcio (cfr. Tollefson A. E. et al., "The E3-11,6-kDa adenovirus death protein (ADP) is required for efficient cell death: characterization of cells infected with adp mutants", Virology. 1996; vol. 220(1), pp. 152-62; Doronin K. et al., "Overexpression of the ADP (E3-11,6K) protein increases cell lysis and spread of adenovirus", Virology 2003; vol. 305(2), pp. 378-87). Cada vez se dispone de más evidencias que sugieren que muchos virus inducen la muerte de la célula infectada y la liberación de su progenie mediante la alteración de la concentración intracelular de calcio (Ruiz M. C. et al., "Role of Ca²⁺ in the replication and pathogenesis of rotavirus and other viral infections", Cell calcium, 2000, vol. 28(3), pp. 137-49).

Con el fin de mejorar la diseminación de los adenovirus oncolíticos se han diseñado distintas estrategias. En este sentido, se ha propuesto la expresión de transgenes tales como proteasas (cfr. Ganesh S. et al., "Intratumoral coadministration of hyaluronidase enzyme and oncolytic adenoviruses enhances virus potency in metastatic tumor models", Clin. Cancer Res., 2008, vol. 14(12), pp. 3933-3941), que provocan la disrupción del tejido conectivo, o proteínas fusogénicas. Sin embargo, la inserción de transgenes en el marco del genoma adenoviral está limitada por el tamaño (tanto del genoma adenoviral como del transgén), y requiere la compatibilidad de la expresión de dicho transgén en el ciclo replicativo del adenovirus. Como alternativa se ha descrito la inclusión de mutaciones puntuales específicas o deleciones parciales en el gen E1B/19K (7), la sobre-expresión de la proteína ADP a través de deleciones parciales o completas de la unidad transcripcional E3 del adenovirus (cfr. Toth K. et al., "An oncolytic adenovirus vector combining enhanced cell-to-cell spreading, mediated by the ADP cytolytic protein, with selective replication in cancer cells with deregulated wnt signaling", Cancer research, 2004, vol. 64(10), pp. 3638-3644), o la mutación truncante de la región C-terminal de la proteína viral i-leader.

Si bien las estrategias indicadas más arriba incrementan la diseminación célula-célula in vitro, y mejoran el potencial terapéutico de los adenovirus oncolíticos in vivo, requieren la manipulación del genoma adenovírico. Además algunas de las modificaciones conllevan efectos potencialmente indeseables en la actividad oncolítica del adenovirus como, por ejemplo, la reducción de la producción viral (observada en los mutantes E1B/19K en algunos tipos celulares) o la pérdida de una o más funciones inmunomoduladoras (en los mutantes de la región E3).

Otro de los problemas asociados con las terapias actuales para el tratamiento del cáncer es la aparición de resistencia de las células tumorales a la quimio- y radioterapia. En este sentido, la solicitud PCT WO2007/103825 indica que la combinación de la quimio- y radioterapia con la terapia basada en el uso de adenovirus oncolíticos puede mejorar la eficacia del tratamiento. Así, en este documento se propone un método para el tratamiento del cáncer en base a la combinación de un primer agente que modula el ciclo celular y un segundo agente que es un agente anticancerígeno.

A pesar de los esfuerzos realizados hasta la fecha, existe todavía la necesidad de encontrar nuevas aproximaciones terapéuticas con una eficacia mejorada en el tratamiento del cáncer.

Explicación de la invención

Los investigadores de la presente invención han descubierto que los bloqueadores de canales de calcio (también conocidos como "antagonistas del calcio"), mejoran la diseminación intratumoral de los adenovirus oncolíticos. Los resultados obtenidos demuestran que estos compuestos (y, en particular el verapamilo) incrementan la citotoxicidad del adenovirus oncolítico in vitro e incrementa la actividad antitumoral del mismo en dos modelos xenógrafos distintos de tumores humanos in vivo. Ventajosamente, estas mejoras en la citotoxicidad (análisis in vitro) y actividad tumoral (análisis in vivo) no afectan negativamente a la selectividad del adenovirus por la célula tumoral ni a la síntesis de proteínas de fase temprana y tardía.

Así, en un primer aspecto la presente invención se refiere a una combinación que comprende dos componentes: (a) el primer componente comprende un bloqueador de canal de calcio junto con excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables; y (b) el segundo componente comprende un adenovirus oncolítico junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones de la presente invención se pueden administrar en forma de composiciones inyectables, ya sea como soluciones líquidas o, en el caso de los bloqueadores de canal de calcio, suspensiones. También se pueden administrar formas sólidas del bloqueador de canal de calcio para solución o suspensión, en líquido antes de la inyección. Estas preparaciones también se pueden emulsionar. Una composición típica para este propósito comprende un portador farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de portadores farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones acuosas, excipientes no tóxicos, incluyendo sales, conservantes, tampones y similares. Ejemplos de disolventes son el propilenglicol, aceite vegetal y ésteres orgánicos inyectables tales como el etiloleato. Portadores acuosos incluyen el agua, soluciones acuosas/alcohólicas, soluciones salinas, vehículos parenterales tales como el cloruro de sodio o dextrosa de Ringer. Vehículos intravenosos incluyen reconstituyentes ("replenishers") de fluidos y nutrientes. Los conservantes incluyen agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes o gases inertes. El pH y la concentración exacta de los diversos componentes de la composición farmacéutica se ajustan de acuerdo con parámetros bien conocidos para el experto en la materia.

La combinación de la presente invención se proporciona en forma de dos componentes, en la cual el componente (a) (que incluye el bloqueador de canal de calcio) y el componente (b) (que incluye el adenovirus oncolítico) se envasan separadamente. Por ejemplo, una primera forma de dosis unitaria (p.e. un primer sobre) puede contener el... [Seguir leyendo]

1. Combinación que comprende dos componentes:

(a) el primer componente comprende un bloqueador de canal de calcio junto con excipientes o portadores farmacéuticamente aceptables; y

(b) el segundo componente comprende un adenovirus oncolítico junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. Combinación según la reivindicación 1, en donde el componente (a) se administra una vez al día.

3. Combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el componente (a) se administra posteriormente a la administración del componente (b).

4. Combinación según la reivindicación 3, en donde se administra en primer lugar una única dosis del componente (b) y posteriormente se administra una o varias dosis del componente (a).

5. Combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde tanto el componente (a) como el componente (b) se administran por vía sistémica.

6. Combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el componente (a) se administra por vía oral y el componente (b) se administra por vía intratumoral.

7. Combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde el bloqueador de canal de calcio se selecciona del grupo formado por verapamilo, amlodipino y diltiazem.

8. Combinación según la reivindicación 7, donde el bloqueador del canal de calcio es el verapamilo.

9. Combinación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde el adenovirus contiene una secuencia de DNA humano aislando a un promotor que confiere expresión selectiva a un gen adenoviral.

10. Kit que comprende la combinación definida en cualquiera de las reivindicaciones 1-9 y instrucciones para su uso.

11. Combinación según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para uso separado o secuencial en el tratamiento del cáncer.

12. Bloqueador de canal de calcio para uso como agente potenciador de la actividad antitumoral de un adenovirus oncolítico.