Células reguladoras CD4+CD25+ específicas para el injerto de células hematopoyéticas y la tolerancia inmunitaria.

Composición farmacéutica que comprende:

- células T reguladoras CD4+CD25+ específicas de uno o varios antígenos menores de histocompatibilidad;

y

- células madre que no son células madre directamente procedentes de embriones humanos; ventajosamente hematopoyéticas, portadoras, como mínimo, de dicho antígeno.

Células reguladoras CD4+CD25+ específicas para el injerto de células hematopoyéticas y la tolerancia inmunitaria La invención se refiere a células T reguladoras CD4+CD25+ específicas de un antígeno menor y más precisamente, a su asociación con células madre hematopoyéticas en un compuesto farmacéutico, así como su utilización como medicamento para aumentar la tolerancia inmunitaria de un huésped histocompatible, comprendiendo con respecto transgénicos.

La terapia de sustitución de genes ha suscitado un gran interés para el tratamiento de diferentes enfermedades metabólicas y de desórdenes genéticos tales como las distrofias musculares o la hemofilia. No obstante, es muy importante evitar respuestas inmunes perjudiciales. Se han hecho esfuerzos considerables para mejorar los procedimientos de suministro de los genes buscando los vectores menos inmunógenos, promotores tejidoespecíficos así como vías y dosis de inyección apropiadas (1, 2) . No obstante, estos sistemas se encuentran enfrentados al riesgo de crear una situación de ignorancia inmune, en el que una inflamación secundaria o las señales de patógenos de proximidad pueden inducir un rechazo inmune de los productos de gen terapéutico (3) . La inducción de la tolerancia periférica utilizando co-tratamientos inmunosupresivos o el bloqueo transitorio de vías de co-estimulación, desarrollados inicialmente para el transplante o las aplicaciones de autoinmunidad se han trasladado con éxito a la terapia génica (4, 5) , pero estos procedimientos vienen acompañados de una marcada toxicidad, aumentando los riesgos de enfermedad cardiovascular, infecciones oportunistas y tumores malignos en el hombre. Son necesarios sistemas de tolerancia específica con respecto a transgénicos para bloquear el rechazo inicial y para inducir una tolerancia a largo plazo con respecto a los transgénicos, sin afectar las funciones inmunes generales de los pacientes. Estos requisitos se satisfacen expresando los transgénicos de interés en un sistema hematopoyético antes de las intervenciones de terapia génica.

El quimerismo hematopoyético mixto con la tolerancia donante específica consistente asociada al mismo, puede ser utilizado en el transplante de órganos (6) y el tratamiento de enfermedades autoinmunes (7) . El quimerismo hematopoyético mixto ha sido utilizado recientemente para inducir tolerancia con respecto a proteínas específicas transfiriendo genes en células madre hematopoyéticas (CSH) autólogas para la terapia génica (8) . No obstante, su inducción estable requiere una inmunodepresión de larga duración y un acondicionamiento mieloablativo para evitar el rechazo del injerto y para crear un espacio en el interior del microambiente de la médula huésped. De este modo, un transplante de médula ósea requiere una mieloablación parcial asociada a una inmunodepresión para conseguir el quimerismo hematopoyético mixto necesario.

Dosis elevadas de células de médula ósea (MO) pueden superar la accesibilidad limitada de los nichos disponibles (9, 10) . No obstante, incluso en el caso de trasplantes óptimos de MO compatibles para las moléculas de histocompatibilidad HLA, antígenos de histocompatibilidad menores (AgMH) pueden provocar un rechazo inmune (11, 12) , requiriendo una inmunodepresión mantenida. Transgenes extraños expresados en las células del sistema hematopoyético (CSH) constituyen antígenos de histocompatibilidad menores que pueden comprometer la aceptación del transplante de CSH.

Entre los grupos de linfocitos T reguladores, las células T CD4+CD25+ (Tregs) , controladas por el factor de transcripción forkhead Foxp3, son particularmente prometedoras para la inducción de tolerancia en transplantes (12, 13) , puesto que pueden prevenir la enfermedad del injertante contra el huésped (14, 15) e inhibir el rechazo del aloinjerto de MO en los receptores irradiados de manera subletal (16) . Si bien el reconocimiento de antígenos (17) se sospecha que está implicado en la regulación inmune por los Tregs, su forma de acción in vivo no se ha aclarado todavía. Las modalidades de empleo de esta población celular para las aplicaciones terapéuticas potenciales están todavía por definir.

El problema técnico que se propone resolver la presente invención es, por lo tanto, encontrar un tratamiento alternativo al tratamiento inmunodepresivo mieloablativo tradicional que se considera largo, pesado y potencialmente peligroso con respecto a riesgos de infección y riesgos tumorales que genera de manera general en el receptor.

Dentro del marco de la presente invención, la solicitante ha demostrado el potencial inmunodepresivo antígeno-específico de una clase particular de células Y reguladoras, que constituye una alternativa para el acondicionamiento del receptor a efectos de, por ejemplo, un transplante. Por lo tanto, un acondicionamiento simple con esta población celular permite aumentar a largo plazo la tolerancia inmunitaria de un huésped histocompatible.

De acuerdo con un primer aspecto, la invención se refiere, por lo tanto, a un compuesto farmacéutico que comprende:

- células T reguladoras CD4+ CD25+ específicas, como mínimo, de un antígeno menor de histocompatibilidad, y

- células madre ventajosamente hematopoyéticas portadoras, como mínimo, de dicho antígeno.

En principio, se debe precisar que en la siguiente descripción, la invención se refiere a la introducción de células o tejidos en huéspedes histocompatibles. Esto implica que el injerto y el huésped poseen un sistema de histocompatibilidad principal (HLA) idéntico y son, por lo tanto, haploidénticos. Se habla entonces de un homoinjerto.

En este caso, la reacción e incluso el rechazo del injerto por el huésped está relacionado con la presencia, en los CSH injertados de antígenos no HLA llamados antígenos menores de histocompatibilidad (AgMH) , específicos del injerto (y por lo tanto, del donante) y divergentes o incluso ausentes en el huésped (receptor) . Estos antígenos menores que proceden tanto de proteínas intracelulares como de proteínas de superficie se presentan en el contexto de moléculas del sistema HLA.

A título de ilustración, la transferencia de células o de tejidos macho en un huésped hembra, por lo tanto, histocompatible, es susceptible de poner en marcha una reacción inmunitaria dada la presencia de antígenos menores macho en las células o el tejido. Estos antígenos macho son codificados con el cromosoma Y y son preferentemente las proteínas DBY, UTY o SMCY. Estos antígenos específicos presentan la ventaja de ser expresados correctamente (eficaces) y bien conservados (poco polimorfismo) en los diferentes individuos, lo que hace de ellos antígenos llamados universales.

El principio activo de una composición farmacéutica, según la invención, reside en las células T reguladoras CD4+ CD25+ específicas, como mínimo, de un antígeno AgMH, tal como el que se ha definido anteriormente. En otros términos, células T reguladoras son capaces de reconocer específicamente este AgMH por el intermediario de su receptor T o de cualquier otro mecanismo de reconocimiento específico.

Las células T reguladoras (Treg) corresponden a una subpoblación de los linfocitos T-células de la sangre implicadas en el buen funcionamiento del sistema inmunitario, capaces de neutralizar en la periferia la acción destructora de los linfocitos T auto-reactivos. Estas células reguladoras están implicadas en la prevención de la puesta en marcha de reacciones inmunes auto-reactivas que se encuentran en la base de las patologías autoinmunes. Las células T reguladoras CD4+ CD25+ son fácilmente identificadas, aisladas y purificadas gracias a la presencia de los marcadores CD4 y CD2. Se caracterizan igualmente por el hecho de que expresan específicamente el factor de transcripción Foxp3, recientemente evidenciado en esta población celular.

Se comprende por "específicas de un antígeno" el hecho de que las células T expresan receptores de superficie TCR apropiados para reconocer y para interaccionar con, como mínimo, un epítopo del antígeno AgMH. De manera equivalente, se dice que las células T están dirigidas contra dichos antígenos.

Estas células Treg son apropiadas para reconocer, como mínimo, un antígeno. Ello significa que pueden ser monoespecíficas, reconociendo un epítopo de un antígeno. De manera alternativa, pueden estar dirigidas contra varios antígenos AgMH del donante. Se puede prever igualmente dirigir estas células contra varios epítopos distintos de un mismo antígeno.

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1. Composición farmacéutica que comprende:

- células T reguladoras CD4+CD25+ específicas de uno o varios antígenos menores de histocompatibilidad; y

- células madre que no son células madre directamente procedentes de embriones humanos; ventajosamente hematopoyéticas, portadoras, como mínimo, de dicho antígeno.

2. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1, caracterizada porque las células T reguladoras CD4+ CD25+ son monoespecíficas.

3. Composición farmacéutica, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque las células T reguladoras CD4+ CD25+ y/o las células madre son autólogas.

4. Composición farmacéutica, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque el antígeno menor es un antígeno menor macho, preferentemente escogido entre el grupo que comprende DBY, UTY y SMCY.

5. Composición farmacéutica, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque las células madre son traducidas por un vector portador de un gen que codifica el antígeno menor.

6. Composición farmacéutica, según una de las reivindicaciones anteriores, caracterizada porque las células madre llevan, por lo menos un transgén, ventajosamente introducido y con ayuda de un vector vírico.

7. Composición farmacéutica, según una de las reivindicaciones anteriores como composición de combinación para una utilización simultánea, separada o escalonada en el tiempo en terapia celular o génica.

8. Utilización de una composición farmacéutica, según una de las reivindicaciones 1 a 7, para la preparación de un medicamento destinado a aumentar la tolerancia inmunitaria en un huésped histocompatible.

9. Utilización, según la reivindicación 8, caracterizada porque la tolerancia inmunitaria es aumentada en vistas de la expresión estable del transgén.

10. Utilización, según la reivindicación 8 ó 9, caracterizada porque la tolerancia es aumentada a efectos de transplante de un tejido procedente de un donante portador de, como mínimo, dicho antígeno.

11. Utilización, según la reivindicación 10, caracterizada porque el transplante del tejido es un transplante de piel.