Un anticuerpo monoclonal humanizado purificado aislado o el fragmento de éste que comprende una VH que comprende una secuencia de aminoácidos de sec.

con núm. de ident.: 106 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.: 111, donde dicho anticuerpo se une un antígeno CD19 humano.

Anticuerpos anti-CD19 humanizados y su uso en el tratamiento de tumores, trasplantes y enfermedades autoinmunes.

1. Introducción

La presente invención se refiere a anticuerpos anti-CD19 humanos, humanizados, o quiméricos que se unen al antígeno CD19 humano. La presente invención se dirige también a composiciones que comprenden anticuerpos anti-CD19 humanos, humanizados o quiméricos que pueden mediar una o más de las siguientes: la citotoxicidad mediada por células dependiente de complemento (CDC) , la citotoxicidad mediada por células dependiente de antígeno (ADCC) , y la muerte celular programada (apoptosis) . La presente invención se refiere además a composiciones que comprenden anticuerpos anti-CD19 humanos, humanizados, o quiméricos del isotipo humano IgG1 y/o IgG3, así como a composiciones que comprenden anticuerpos anti-CD19 humanos, humanizados o quiméricos del isotipo humano IgG2 y/o IgG4 que pueden mediar la ADCC, la CDC, o la apoptosis humana.

La presente invención además se dirige a métodos para el tratamiento de trastornos o enfermedades de las células B en humanos, que incluyen las neoplasias malignas de las células B, por medio del uso de los anticuerpos terapéuticos anti-CD19 humanos, humanizados o quiméricos que se unen al antígeno CD19 humano. La presente invención se dirige a métodos para el tratamiento y prevención de la enfermedad autoinmune, así como el tratamiento y la prevención de la enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) , el rechazo humoral, y el trastorno linfoproliferativo post-trasplante en receptores de trasplantes humanos por medio del uso de anticuerpos terapéuticos anti-CD19 humanos, humanizados, o quiméricos que se unen al antígeno CD19 humano.

2. Antecedentes

Las células B expresan una amplia gama de moléculas de superficie celular durante su diferenciación y proliferación. Algunos ejemplos incluyen los marcadores de la superficie de los leucocitos CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 y CD86. Estos marcadores generalmente se sugieren como dianas terapéuticas para el tratamiento de los trastornos o enfermedades de las células B tales como las neoplasias malignas de células B, las enfermedades autoinmunes y el rechazo del trasplante. Los anticuerpos que se unen específicamente a ellos se desarrollaron, y algunos se probaron como agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades y trastornos.

Por ejemplo, las terapias basadas en el anticuerpo monoclonal quimérico o radiomarcado (AcM) dirigido contra la molécula de superficie celular CD20 específico para las células B maduras y sus homólogos malignos demostraron ser un eficaz tratamiento in vivo para el linfoma no-Hodgkin (Tedder y otros, Immunol. Today 15:450-454 (1994) ; Press y otros, Hematology: 221-240 (2001) ; Kaminski y otros, N. Engl. J. Med. 329:459-465 (1993) ; Weiner, Semin. Oncol. 26:43-51 (1999) ; Onrust y otros, Drugs 58:79-88 (1999) ; McLaughlin y otros, Oncology 12:1763-1769 (1998) ; Reff y otros, Blood 83:435-445 (1994) ; Maloney y otros, Blood 90:2188-2195 (1997) ; Malone y otros, J. Clin. Oncol. 15:3266-3274 (1997) ; Anderson y otros, Biochem. Soc. Transac. 25:705-708 (1997) ) . También se encontró que la terapia con el anticuerpo monoclonal anti-CD20 es parcialmente eficaz en la atenuación de las manifestaciones de la artritis reumatoide, el lupus eritematoso sistémico, la púrpura trombocitopénica idiopática y la anemia hemolítica, así como de otras enfermedades autoinmunes (Silverman y otros, Arthritis Rheum. 48:1484-1492 (2002) ; Edwards y otros, Rheumatology 40:1-7 (2001) ; De Vita y otros, Arthritis Rheumatism 46:2029-2033, (2002) ; Leandro y otros, Ann. Rheum. Dis. 61:883-888 (2002) ; Leandro y otros, Arthritis Rheum. 46:2673-2677 (2001) ) . El anticuerpo anti-CD20 (IgG1) , Rituxan, se usó con éxito en el tratamiento de ciertas enfermedades tales como la púrpura trombocitopénica inmune del adulto, la artritis reumatoide y la anemia hemolítica autoinmune (Cured y otros, WO 00/67796) . A pesar de la eficacia de estas terapias, la depleción de las células B es menos eficaz cuando las células B no expresan o expresan bajos niveles de CD20, (por ejemplo, en las células pre-B o las células B inmaduras) o pierden la expresión del CD20 después de la inmunoterapia de CD20 (Smith y otros, Oncogene 22:7359-7368 (2003) ) .

En la materia se describen anticuerpos monoclonales murinos anti-CD19, por ejemplo, el HD37 (IgG1, kappa) (Dako North America, Inc, Carpinteria, CA) , el BU12 (Callard y otros, J. Immunology, 148 (10) :2983-7 (1992) ) , el 4G7 (IgG1) (Meeker y otros, Hybridoma, 3 (4) :305-20 (1984, Winter) ) , el J4.119 (Beckman Coulter, Krefeld, Alemania) , el B43 (PharMingen, San Diego, CA) , el SJ25C1 (BD PharMingen, San Diego, CA) , el FMC63 (IgG2a) (Zola y otros, Immunol.Cell.Biol. 69 (PT6) : 411-22 (1991) ; Nicholson y otros, Mol. Immunol., 34:1157-1165 (1997) ; Pietersz y otros, Cancer Immunol. Immunotherapy, 41:53-60 (1995) ) , el 89B (B4) (IgG1) (Beckman Coulter, Miami, FL; Nadler y otros, J. Immunol., 131:244-250 (1983) ) , y/o el HD237 (IgG2b) (Cuarto Taller Internacional sobre Antígenos de Diferenciación de Leucocitos Humanos, Viena, Austria, 1989; Pezzutto y otros, J. Immunol., 138 (9) :2793-2799 (1987) ) . Los anticuerpos anti-CD19 o conjugados de éstos también mostraron un potencial terapéutico en diversos modelos animales de trastornos y enfermedades de las células B (Falvell y otros, Br. J. Hematol. 134 (2) :157-70 (2006) ; Vallera y otros, Clin. Cancer Res. 11 (21) :7920-8 (2005) ; Yazawa y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 102 (42) :15178-83 (2005) ) .

En particular, se describe el uso de los anticuerpos CD19 humanizados para el tratamiento de enfermedades de células B tales como el linfoma, la leucemia, o las enfermedades autoinmunes (ver, Hansen, publicación de la solicitud de patente de los Estados Unidos núm. 2005/0070693) .

A pesar de los recientes avances en la terapia del cáncer, las neoplasias malignas de células B, tales como los subtipos de células B de los linfomas no-Hodgkin y la leucemia linfocítica crónica, son los principales contribuyentes de muertes relacionadas con cáncer. En consecuencia, existe una gran necesidad de regímenes terapéuticos adicionales y mejorados para el tratamiento de las neoplasias malignas de células B.

Ahora se sabe que tanto la inmunidad celular (mediada por células T) como la humoral (mediada por células B, anticuerpos) juegan un papel importante en el rechazo del injerto. Si bien la importancia de la inmunidad mediada por células T en el rechazo del injerto está bien establecida, el papel fundamental de la inmunidad humoral en el rechazo agudo y crónico se puso de manifiesto sólo recientemente. En consecuencia, la mayoría de los avances en el tratamiento y prevención del rechazo del injerto se desarrollaron a partir de agentes terapéuticos que se dirigen a la activación de las células T. El primer anticuerpo monoclonal terapéutico que la FDA aprobó para el tratamiento del rechazo del injerto fue el anticuerpo monoclonal murino Orthoclone-OKT3™ (muromonab-CD3) , dirigido contra el receptor de células T CD3. Al OKT3 se unieron un número de otros anticuerpos dirigidos contra linfocitos, que incluyen los anticuerpos monoclonales anti-CD52 Campath ®, Campath-1G, Campath-1H (alemtuzumab) , y Campath-1M) , y preparaciones de anticuerpos policlonales anti-timocitos (conocida como globulina antitimocito, o "ATG", también llamada "timoglobina" o "timoglobulina") . Otros anticuerpos de células T, aprobados para la prevención del rechazo del trasplante incluyen el anticuerpo monoclonal quimérico Simulect ™ (basiliximab) y el anticuerpo monoclonal humanizado Zenapax ™ (daclizumab) , ambos se dirigen al receptor de IL-2 de alta afinidad de células T activadas.

La importancia de la inmunidad humoral en el rechazo del injerto se pensó inicialmente que se limitaba al rechazo hiperagudo, en el que el receptor del injerto posee anticuerpos HLA anti-donante antes del trasplante, lo que resulta en una rápida destrucción del injerto en ausencia de un eficaz régimen terapéutico de supresión de anticuerpos. Recientemente se puso de manifiesto que la inmunidad humoral es también un factor importante para mediar el rechazo tanto agudo como crónico. Por ejemplo, las observaciones clínicas demostraron que la supervivencia del injerto en pacientes capaces de desarrollar aloanticuerpos anti-HLA de clase I o clase II (también referidos como " aloanticuerpos anti-MHC ") se redujo en comparación con la supervivencia del injerto en pacientes que... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humanizado purificado aislado o el fragmento de éste que comprende una VH que comprende una secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.: 106 y un dominio VL que comprende una secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.: 111, donde dicho anticuerpo se une un antígeno CD19 humano.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde dicho anticuerpo tiene el complejo de cadenas de azúcar enlazadas a Nglucósido unido a la región Fc en la que la fucosa no se une a N-acetilglucosamina en el extremo reductor de la cadena de azúcar.

3. El anticuerpo de la reivindicación 2, donde dicho anticuerpo media eficazmente la actividad ADCC in vitro frente a las líneas celulares Karpas-422, Karpas-1106P, y DB pero no frente a la línea celular Granta-519.

4. El anticuerpo de la reivindicación 2, donde dicho anticuerpo es capaz de depletar las células B en un modelo animal, donde dichas células B se seleccionan de un grupo que consiste de: células B circulantes, células B de la sangre, células B esplénicas, células B de la zona marginal, células B foliculares, células B peritoneales, y/o células B de médula ósea, donde dicha depleción reduce los niveles de células B al menos 50% siete días después de la administración de 2.5 mg/kg de dosis de dicho anticuerpo.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde dicho anticuerpo es una variante de Fc, donde dicha variante de Fc tiene una afinidad alterada para uno o más ligando Fc seleccionado del grupo que consiste de: C1q, FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA y FcyRIV.

6. El anticuerpo de la reivindicación 5, donde dicha variante de Fc tiene una afinidad por el receptor de Fc FcyRIIIA que es al menos aproximadamente 5 veces menor que la de una molécula comparable, y donde dicha variante de Fc tiene una afinidad por el receptor de Fc FcyRIIB que está dentro de aproximadamente 2 veces la de una molécula comparable.

7. El anticuerpo de la reivindicación 6, donde dicha variante de Fc comprende las mutaciones que resultan en una mayor actividad ADCC.

8. Un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de sec. con núm. de ident.: 106 o sec. con núm. de ident.: 111.

9. Una célula aislada que expresa el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.

10. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en el tratamiento una enfermedad o trastorno de células B en un humano, donde dicha enfermedad o trastorno se selecciona de un grupo que consiste de: tumor maligno de células B, enfermedad autoinmune, trastorno autoinmune, rechazo humoral en un paciente humano trasplantado, enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) y trastorno linfoproliferativo posterior al trasplante en el receptor humano trasplantado.

12. La cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 11, donde dicho tratamiento comprende la depleción de las células B seleccionadas del grupo que consiste de: células B circulantes, células B de la sangre, células B esplénicas, células B de la zona marginal, células B foliculares, células B peritoneales, células B de la médula ósea, células B progenitoras, células pro-B tempranas, células pro-B tardías, células pre-B grandes, células pre-B pequeñas, células B inmaduras, células B maduras, células B estimuladas por el antígeno , y/o células plasmáticas.

13. La cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 12, donde dicha depleción reduce los niveles de células B al menos aproximadamente 20%, y donde dicha depleción persiste durante un período de tiempo de al menos 1 semana.