La presente invención comprende el uso de WNT1 como biomarcador en la monitorización,

pronóstico y/o en el diagnóstico de nefropatías crónicas. Aporta métodos de prognósis y de diagnosis in Vitro y kits para su ejecución. Así mismo la presente invención comprende el uso de WNT1 en la búsqueda de principios activos para la fabricación de un medicamento para terapias de nefropatías crónicas y método para realizar dicha búsqueda

WNT1 como biomarcador de daño renal.

Campo de la invención

La presente invención se encuadra en el campo de las herramientas clínicas para la diagnosis y monitorización de la función renal de pacientes de insuficiencia renal crónica (Chronic Renal Failure, CRF). Especialmente aquellos que han sufrido terapia de trasplante.

Antecedentes de la invención

La insuficiencia renal crónica (CRF) consiste en una pérdida lenta y progresiva de la función renal, caracterizada por un bajo índice de Filtrado Glomerular (Glomerular Filtration Rate, GFR). Cuando la insuficiencia renal es muy grave (End Stage Renal Disease, ESRD), se requiere terapia de sustitución que puede consistir bien en diálisis, bien en trasplante, renal.

La terapia de trasplante renal es una alternativa de éxito que puede prolongar la vida del paciente hasta más de 15 años en algunos casos. Sin embargo, los riesgos y complicaciones son múltiples. A pesar de que las pruebas de compatibilidad de tejidos se han perfeccionado en los últimos años, es necesario desarrollar en paralelo una terapia inmunodepresiva continua con el objetivo de prevenir rechazos agudos o crónicos que puedan llevar al fallo de la función renal del órgano trasplantado. Tras un trasplante, niveles elevados de creatinina en suero son indicativos de fallo en la función del riñón trasplantado. Sin embargo, el método de la creatinina no es ni sensible ni específico. En consecuencia, el desarrollo de herramientas de monitorización de la función renal de los riñones trasplantados y de evaluación de la supervivencia del injerto se ha convertido en una necesidad clínica La nefropatía crónica de trasplante (Chronic Allograft Nephropathy, CAN), caracterizada por fibrosis intersticial y atrofia tubular, es la mayor causa de pérdida del órgano trasplantado. La CAN tiene una etiología multifactorial dónde se implican tanto factores immunológicos (rechazo del aloinjerto) y factores no immunológicos, especialmente la nefrotoxicidad por inhibidores de la calcineurina. Hoy en día se dispone de diversas herramientas de monitorización en forma de kit de diagnóstico que permiten detectar el rechazo al órgano trasplantado en base a la actividad especifica del sistema inmune del paciente. Por ejemplo, la solicitud WO 2004074815 Al enseña un método para evaluar el riesgo de fallo funcional o rechazo de un órgano trasplantado a partir de una muestra de sangre o biopsia de tejido que consiste en determinar el nivel de expresión de uno o más genes que codifican para proteínas relacionadas con la inflamación. De manera similar, en la solicitud de patente WO 2006099421 A1 se describen métodos para evaluar la evolución del órgano trasplantado, identificar la presencia de daño funcional como por ejemplo la nefropatía crónica de trasplante e identificar la severidad y clase del rechazo agudo (Acute Rejection, AR) Los métodos descritos en ella comprenden la detección, a nivel de ácido nucleico o proteína en sangre o biopsia, de al menos un gen especificado en las tablas 1 y 2. En la tabla 2 se especifican los 30 genes predictivos para dichos métodos utilizando sangre o tejido procedente de biopsia renal Notablemente todos estos genes están relacionados con la actividad del sistema inmune. Se corresponden bien con genes inducibles por citokinas o quimioquinas, bien con genes que forman parte del complejo MHC, genes del complemento, o inmunoglobulinas. Los 479 genes de la tabla 3 representan en conjunto un ejemplo de "Chip de trasplante" que incluye tanto los genes de las tablas 1 y 2 como otros genes característicos de las nefropatías de trasplantes (AR, CAN). También se incluyen entre ellos genes control y genes moduladores de la función normal del sistema inmune, identificadas en una revisión bibliográfica.

El tipo de herramientas clínicas citadas arriba requieren métodos invasivos de obtención de muestras que. Por ejemplo, biopsias que comportan una morbilidad asociada no despreciable además de suponer un coste económico importante. Una alternativa a las muestras de sangre o tejido, es la muestra de orina; sin embargo, no existen hoy por hoy herramientas clínicas fiables para diagnosticar el estado del órgano trasplantado a partir de muestras de orina. En el caso del riñón trasplantado, se han desarrollado técnicas sensibles para detectar la presencia en orina de proteínas relacionadas con el proceso de inflamación. El trabajo del equipo del Dr. Nickerson, en Canadá, ha adaptado la tecnología proteonómica para detectar proteínas urinarias asociadas con AR (Schaub et al., J Am Soc Nephrol. 2004 Jan; 15 (1): 219-27). Algunas empresas interesadas en la tecnología biomédica están invirtiendo esfuerzos también en esta dirección (WO 07121922 A2 y WO 07104537 A2, Am J Transplant. 2005 Oct; 5(10):2479-88; CA 2473814 A1). Estas solicitudes y estudios contemplan la posibilidad de detectar biomarcadores relativos a la función del sistema inmune en orina, sin embargo no existen métodos clínicos comerciales fiables que utilicen esta tecnología. Esto es debido a que, aunque la tecnología proteonómica tiene el potencial de clarificar aspectos complejos de procesos patofisiológicos y de revelar nuevos biomarcadores, el estado actual del proteoma urinario de las patologías del trasplante renal está todavía lejos de conseguir tales objetivos (Schaub et al., Contrib Nephrol. 2008; 160:65-75).

Como se ha mencionado más arriba, los signos característicos de CAN son fibrosis intersticial y atrofia tubular. Sabemos que la etiología de la CAN radica, en parte, el rechazo al trasplante. Pero no disponemos de herramientas directas que detecten daño temprano en el tejido injertado, especialmente mediante técnicas no invasivas como el análisis de orina. Uno de los problemas derivados de la utilización de biomarcadores relativos a la actividad del sistema inmune, es que no posibilitan la distinción entre una infección aguda y un rechazo. Además, estos métodos no reflejan directamente el estado de la función renal y no pueden aplicarse en la evaluación de pacientes que conserven su riñón nativo.

Así, en el día a día de la práctica clínica, el principal problema del profesional es no disponer de suficientes herramientas no invasivas de diagnóstico que revelen la existencia de daño renal. Existen, como hemos visto, herramientas que detectan rechazo en función de la actividad del sistema inmune, pero con técnicas invasivas

Sorprendentemente, los inventores de la presente solicitud han identificado en análisis de orina un marcador específico de fibrosis. El análisis de muestras de pacientes de trasplante de riñón mediante la técnica proteonómica de 2D-DIGE ha revelado la presencia distintiva de la proteína WNT1 en la orina de aquellos pacientes que sufren una nefropatía crónica de trasplante. La proteína WNT1 no se expresa en el riñón adulto, pero durante el desarrollo induce al mesénquima. metanéfrico a diferenciarse en epitelio tubular y glomerular (Herzlinger et al., 1994; Dev. Biol. 166:815-818) y podría estar implicado en procesos de fibrosis y atrofia tisular en pulmón (Königshoff et al., PLoS ONE. 2008 May 14; 3(5):e2142).

La presente invención proporciona, por tanto, una nueva herramienta clínica no invasiva que permite una medida directa del daño tisular del riñón en una etapa temprana mediante el análisis de una muestra de orina del paciente.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: La Figura muestra el detalle de la detección mediante Western-blot, de la proteína wnt-1. Para la detección de la wnt-1 se han escogido dentro de los pacientes que cumplían los criterios de inclusión en el estudio dos muestras aleatorias de cada grupo. La figura a) corresponde al detalle de dos pacientes trasplantados renales sin NCT (NCT 0), b) corresponde al detalle de dos pacientes trasplantados renales con NCT incipiente (NCT I) ye) corresponde al detalle de dos pacientes trasplantados renales con NCT avanzada (NCT II-III). NCT: Nefropatía crónica del trasplante.

Figura 2: La figura muestra las imágenes proporcionadas por el software de análisis de imágenes DeCyder® (GE Healthcare). El área delimitada por la linea corresponde al punto de la proteína identificada como wnt-1. Puede observarse que la altura del área aumenta a medida que aumenta la severidad de la NCT, este aumento del área se corresponde con un aumento de la cantidad de la proteína en la orina. La figura a) corresponde al detalle de pacientes trasplantados renales sin NCT (NCT 0), b) corresponde al detalle de pacientes trasplantados renales con NCT incipiente (NCT I)... [Seguir leyendo]

1. Uso de WNT1 como biomarcador en el pronóstico del deterioro de la función renal y/o en el diagnóstico de nefropatías asociadas a dicho deterioro.

2. Uso según la reivindicación 1 donde la función renal o la nefropatía son de un riñón trasplantado.

3. Método para el pronóstico del deterioro de la función renal y/o para el diagnóstico de nefropatías asociadas a dicho deterioro que comprende la determinación de la presencia o ausencia del biomarcador WNT1 o un fragmento del mismo en una muestra biológica aislada de un paciente.

4. Método según la reivindicación 3 donde la muestra biológica es orina, sangre, suero o biopsia de tejido y que comprende la determinación de la presencia o ausencia de la proteína, el ARN o el ADN de WNT1 o un fragmento de los mismos.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 3 o 4 donde el paciente ha sufrido terapia de trasplante renal.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 3-5 que comprende la cuantificación del biomarcador WNT1.

7. Método para el diagnóstico in vitro una nefropatía crónica de trasplante que comprende:

a) Cuantificación de WNT1 o un fragmento del mismo en una muestra biológica aislada de un paciente.

b) Comparación de la cantidad de WNT1 en la muestra del paso a) con la cantidad de WNT1 en muestras aisladas de individuos sanos.

Donde la presencia o el aumento relativo de la cantidad de WNT1 son indicativos de deterioro en la función renal.

8. Método según la reivindicación 7 donde la muestra biológica es una muestra de orina.

9. Kit para la monitorización prognosis y/o el diagnóstico del deterioro de la función renal o nefropatías asociadas a dicho deterioro que comprende al menos una molécula o composición capaz de unirse y reconocer una secuencia seleccionada de entre SEQ ID No: 1, SEQ ID No: 2, SEQ ID No: 3 o un fragmento de las mismas, opcionalmente marcada para su detección.

10. Kit para la monitorización, prognosis y/o el diagnóstico del deterioro de la función renal o nefropatías asociadas a dicho deterioro que comprende el biomarcador WNT1 o un fragmento del mismo.

11. Uso del kit de la reivindicación 9 ó 10 en la búsqueda de principios activos para la fabricación o el desarrollo de medicamentos destinados al tratamiento de enfermedades derivadas de procesos de fibrogénesis,

12. Método para la búsqueda de principios activos para la fabricación o el desarrollo de medicamentos que comprende un ensayo de unión de dicho principio activo a WNT1.

13. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 9 ó 10 donde la nefropatía asociada al deterioro de la función renal es una nefropatía de trasplante.

14. Uso de WNT1 o un fragmento del mismo en la fabricación y/o selección de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una nefropatía.

15. Uso según la reivindicación 14 donde la nefropatía es una nefropatía crónica de trasplante.