Uso de cepas de Leishmania DHSP70-II como vacuna.La presente invención se refiere al uso de organismos del género Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II,

para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de la leishmaniasis en un mamífero, más preferiblemente en un perro, y más preferiblemente en un humano. También se refiere a las composiciones farmacéuticas que contienen dichos organismos, y a su uso en la elaboración de vacunas frente a la leishmaniasis

Uso de cepas de Leishmania Δhsp70-II como vacuna.

La presente invención se encuentra dentro del campo de la biología molecular y la medicina, y se refiere a una línea de Leishmania defectiva para los dos alelos del gen HSP70-II (línea Δhsp70-II), a una composición que comprende organismos de dicha línea, y al uso de dicha composición como vacuna.

Estado de la técnica anterior

Los organismos protistas del género Leishmania son los agentes causales de un amplio grupo de enfermedades conocidas como leishmaniosis o más correctamente según la SNOAPAD (Standard Nomenciature of Animal Parasites and Diseases), leishmaniasis. Esta enfermedad presenta cuadros clínicos y epidemiológicos diversos, afecta a unos 12-14 millones de personas en todo el mundo, y cada año aparecen entre 1,5 y 2 millones de nuevos casos (Murray et al., 2005. Lancet 366:1561-1577). Según la OMS, actualmente amenaza a 350 millones de personas en 88 países diferentes, principalmente en zonas tropicales y subtropicales, pero los enfermos se encuentran, principalmente, en los países en vías de desarrollo (Sudán, India, Bangladesh, Nepal y Brasil). Estos organismos tienen un ciclo de vida digenético, alternante entre una fase de vida libre, promastigotes flagelados en mosquitos de los géneros Phlebotomus (en el viejo mundo) y Lutzomyia (en América), y amastigotes no flagelados intracelulares que se multiplican en el interior de macrófagos de mamíferos hospedantes. La transmisión desde los insectos vectores ectodérmicos (poiquilotérmicos) a los hospedadores mamíferos, implica un "shock" térmico, que parece actuar como una señal de diferenciación celular (Zilberstein & Shapira, 1994. Annu Rev Microbiol 48:449-470). En este contexto, el estudio de la respuesta al shock térmico, y los mecanismos de regulación controlados por las proteínas HSP, pueden dilucidar los mecanismos de diferenciación de estos protozoos.

Los organismos vivos responden al estrés por calor, y otros tipos de estrés, sintetizando un set de proteínas altamente conservadas, las heat-shock proteins (HSPs) (Lindquist & Craig, 1988. Annu Rev Genet 22:631-677). Sin embargo, las HSPs también juegan un papel importante en la células no sometidas a estrés, al estar involucradas en el plegamiento, ensamblaje, localización intracelular, secreción, activación, y degradación de muchas proteínas (Feder & Hofmann, 1999. Annu Rev Physiol 61:243-282). Tanto HSP70 como HSP90 interaccionan con muchos otros componentes de vías de señalización que regulan el crecimiento y desarrollo. En este sentido, la relación molecular entre HSPs y las proteínas señalizadoras es crítica para el correcto funcionamiento de estas vías: por ejemplo, los niveles relativos de estas proteínas han demostrado ser importantes, puesto que una deficiencia o un exceso de HSPs han dado lugar a un crecimiento aberrante, desarrollo de malformaciones y muerte celular (Mayer & Bukau, 2005. Cell Mol Life Sci 62:670-684).

Hasta la fecha HSP70 es la proteína más conservada presente en todos los organismos. Entre sus numerosas funciones, HSP70 protege a las células de los efectos deletéreos de los plegamientos incorrectos y de la agregación de proteínas. Los autores de la presente invención han demostrado que los loci del gen HSP70-II se encuentran conservados en varias especies de Leishmania (L. infantum, L. major, L. tropica, L mexicana, L amazonensis) (Folgueira, et al., 2007. Parasitology 134, 369-377).

Actualmente se ha producido un incremento de casos de leishmaniasis humanas en individuos inmunosuprimidos, en fase avanzada de infección por VIH, cuyas defensas inmunológicas están muy debilitadas. En España, y otros países de la cuenca mediterránea, la especie predominante es L. infantum, cuya infección produce principalmente afecciones viscerales. El perro doméstico está considerado como el principal reservorio de L. infantum en la región mediterránea, desempeñando un papel clave en la transmisión del parásito a seres humanos a través del flebótomo. En países como España, donde la enfermedad es endémica en los perros, casi todo el mundo padece una infección latente, de manera que cuando una persona padece una bajada de defensas, como en el caso del sida y otras inmunodeficiencias, la Leishmania hasta entonces latente empieza a prosperar en el organismo. En Europa, el 25% de los infectados con el virus del sida padece a la vez una infección de leishmania. Además, la leishmaniasis canina constituye un problema en sí mismo, ya que cerca del 50% de los perros infectados desarrolla una sintomatología clínica que en la mayoría de los casos conduce a la muerte del animal, debido a la ineficacia de los métodos de tratamiento y a la toxicidad de sus efectos secundarios.

Atendiendo a los síntomas clínicos de la enfermedad, las leishmaniasis han sido clasificadas en 5 tipos: leishmaniasis visceral o kala-azar, cutánea o Botón de Oriente, cutáneo-difusa, muco-cutánea o espundia, y leishmaniasis dérmica post kala-azar. Estas formas han sido clasificadas en base a criterios clínicos y son causadas por al menos 15 especies diferentes.

Actualmente no existe ningún método profiláctico eficaz y los tratamientos quimioterapéuticos no poseen la eficacia deseable. Desde mediados del siglo pasado se usan drogas que requieren administración parenteral y prolongados tratamientos, presentando además, una serie de reacciones adversas que dificultan su utilización (cardiotoxicidad con electrocardiogramas anormales, pancreatitis, etc.). Entre los fármacos utilizados como primera línea de tratamiento se encuentran los antimoniales pentavalentes (SSG (Sodium stibogluconate) y Meglumina antimoniato). Como segunda línea (cuando el paciente no responde a los primeros) existe la Amfotericina B y la Aminosidina. Un problema adicional, puesto que los enfermos se encuentran principalmente en países en desarrollo, es el elevado precio de los tratamientos, que en ocasiones lleva a su incumplimiento y a la aparición de resistencias.

Aunque existen principios activos de origen vegetal y sintéticos con actividad leishmanicida prometedora y baja toxicidad (péptidos, moléculas orgánicas de síntesis etc), pero hasta ahora por si solos, no son capaces de eliminar totalmente al parásito. Y pese a que diversas vacunas se encuentran en diferentes etapas de desarrollo, actualmente no hay ninguna vacuna aprobada contra la enfermedad. Existe, por tanto, la necesidad de desarrollar una vacuna capaz de generar una respuesta que integre activación celular y producción de anticuerpos con un cierto balance hacia una respuesta de tipo 1.

Descripción de la invención

Los autores de la presente invención han desarrollado una línea de L. infantum deficiente para el gen HSP70-II (línea Δhsp70-II), caracterizada porque su virulencia está atenuada, no presentando variaciones en la misma, y por que es capaz de generar inmunidad en un mamífero, tanto frente a la leishmaniasis provocada por L. infantum como por L. major.

Como se ha dicho previamente, los loci del gen HSP70-II se encuentran conservados en otras especies de Leishmania (L. infantum, L. chagasi, L. major, L. tropica, L. mexicana, L. braziiiensis y L. amazonensis), y, por tanto, mutantes de estas especies que presenten delecionado el gen HSP70-II podrían ser empleados como vacunas frente a las distintas leishmaniasis.

Los organismos de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II, pueden usarse para generar inmunidad en un mamífero frente a leishmaniasis. Así pues, un primer aspecto de la invención se refiere al uso de organismos de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II, de ahora en adelante organismos de Leishmania de la invención, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de la leishmaniasis.

Los organismos del género Leishmania pertenecen al Superreino Eukaryota, Orden Kinetoplastida, Familia Trypanosomatidae.

Los métodos para delecionar un determinado gen en el genoma de un organismo son conocidos en el estado de la técnica. Generalmente, los métodos de deleción implican varios pasos de clonación, y comprenden la construcción de un cassette de deleción que contiene un cassette de expresión para un gen marcador flanqueado con secuencias de pares... [Seguir leyendo]

1. Uso de organismos de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de la leishmaniasis en un mamífero.

2. Uso de organismos de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II según la reivindicación anterior, donde los organismos que tienen delecionado el gen HSP70-II pertenecen a una especie de Leishmania que se selecciona de la lista que comprende: Leishmania infantum, L. chagasi, L. major, L. tropica, L. mexicana, L. braziliensis y/o L. amazonensis.

3. Uso de organismos de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde los organismos que tienen delecionado el gen HSP70-II pertenecen a la especie Leishmania infantum.

4. Uso de organismos de Leishmania según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el mamífero es el perro.

5. Uso de organismos de Leishmania según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el mamífero es el hombre.

6. Uso de organismos de Leishmania según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde la leishmaniasis es causada por parásitos de la especie L. infantum.

7. Composición farmacéutica que comprende un organismo de Leishmania que tienen delecionado el gen HSP70-II.

8. Composición farmacéutica según la reivindicación anterior, donde el organismo de Leishmania se encuentra en forma de promastigote.

9. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 7-8 que además comprende excipientes y/o adyuvantes farmacológicamente aceptables.

10. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, para su uso como medicamento.

11. Uso de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de la leishmaniasis.

12. Uso de la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de la leishmaniasis en un mamífero.

13. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 12, donde el mamífero es el hombre.

14. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 12, donde el mamífero es el perro.