Uso de un adenovirus de replicación defectuosa y un virus adeno-asociado en la preparación de un medicamento útil en un régimen de inmunización,

comprendiendo el régimen la administración del virus adeno-asociado con anterioridad a la administración del adenovirus de replicación defectuosa, comprendiendo el adenovirus de replicación defectuosa un primer casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto, y comprendiendo el virus adeno-asociado (AAV) un segundo casete de expresión heteróloga que comprende secuencia de ácido nucleico que codifica el producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El adenovirus es un virus con ADN de doble cadena, con un tamaño de genoma de aproximadamente 36 kilobases (kb), que ha sido ampliamente utilizado para aplicaciones de transferencia de gen debido a su capacidad para conseguir una transferencia de gen altamente eficiente en una diversidad de tejidos objetivo, y a su gran capacidad transgén. Convencionalmente, los genes E1 de adenovirus son borrados y sustituidos por un casete transgén consistente en el promotor de elección, secuencias de cADN del gen de interés y una señal poliA, dando como resultado un virus recombinante de replicación defectuosa.

Los adenovirus tienen una morfología característica con un cápside icosaédrico consistente en tres proteínas principales, hexón (II), pentón base (III) y una fibra con protuberancias (IV), junto con un número de otras proteínas menores, VI, VIII, IX, IIIa y IVa2 [C. Russell, J. Gen Virol., 81: 2573-2604 (Nov. 2000)]. El genoma de virus es un ADN lineal, de doble cadena, que tiene repeticiones terminales invertidas (ITRs), con una proteína terminal fijada covalentemente a las terminaciones 5'. El ADN de virus está asociado íntimamente a la proteína VII altamente básica y a un pequeño péptido denominado mu. Otra proteína, V, está empaquetada con este complejo de proteína de ADN y proporciona un enlace estructural para el cápside por medio de la proteína VI. El virus contiene también una proteasa codificada en el virus, la cual es necesaria para procesar algunas de las proteínas estructurales para producir un virus infeccioso maduro.

Se han descrito adenovirus recombinantes para el suministro de moléculas a células anfitrión, para inducir una respuesta inmune. Véase la Patente US núm. 6.083.716, la cual proporciona vectores adenovirales a partir de adenovirus de dos chimpancés, C1 y C68 (también denominado Pan 9), y la Publicación de Patente Internacional núm. WO 02/33645 [Vectores derivados de Pan 5, Pan6, Pan7].

Lo que se necesita en el campo de las vacunas es un procedimiento de inmunización que induzca una fuerte respuesta inmune con respuestas mínimas para el portador de vacuna.

Sumario de la Invención

Los procedimientos divulgados incluyen suministrar secuencialmente uno o más gen(es) heterólogo(s) seleccionado(s) a un paciente mamífero por medio de un vector adenoviral y un vector de virus adeno-asociado. Cada uno de los vectores expresa el mismo producto inmunogénico o antigénico o un producto de reacción cruzada.

El procedimiento divulgado proporciona un incremento de la respuesta inmune al producto portado por los vectores virales.

Estas y otras realizaciones y ventajas de la invención se describen con mayor detalle en lo que sigue.

Breve Descripción de los Dibujos

La Figura 1 ilustra las respuestas IgG totales al GP de EboZ tras imprimación y potenciación heterólogas. Ratones B10Br fueron inmunizados IM con 5x1010, 5x109 ó 5x108 partículas/ratón de vector H5GP. Seis semanas más tarde, los ratones fueron potenciados IM con 5x1010 copias de genoma/ratón de vector AAV2/1GP. Se recogió suero a partir de 3 ratones de cada grupo y se agrupó en un momento cualquiera de entre 42 días después de la inyección (pre-potenciación), o 1 semana después de la potenciación, o 2 semanas después de la potenciación, según se indica en la Figura. Las respuestas IgG totales al GP fueron medidas mediante ELISA.

Descripción Detallada de la Invención

La invención se refiere a un procedimiento para inducir específicamente una respuesta inmune mediante administración de un vector de virus adeno-asociado (AAV). Cada uno de los vectores virales contiene un casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias reguladoras de control con expresión directa del producto. En una realización, los productos codificados son del mismo orden para proporcionar un efecto de imprimación/ potenciación del producto, que induce inmunidad al patógeno del que se deriva el producto o a un patógeno de reacción cruzada. Sin embargo, los elementos de control regulador y otros elementos virales pueden ser diferentes en los adenovirus administrados. En otra realización, los productos codificados difieren, pero proporcionan un efecto de reacción cruzada.

Inesperadamente, los inventores han encontrado que se observa una respuesta significativa específica al antígeno en un régimen que incluye administración secuencial mediada de rAd y mediada de rAAV del antígeno. Sin pretender quedar vinculados por la teoría, se estima que se puede observar una respuesta de células T incrementada, dependiendo del antígeno y de la vía de administración.

Así, el procedimiento incluye administración secuencial de un vector adenoviral portador de un casete de expresión heteróloga y de un vector AAV portador de un casete de expresión heteróloga, según se describe en la presente memoria. Según se utiliza en la presente memoria, la administración secuencial abarca el suministro de un vector adenoviral seguido del suministro de un vector AAV, es decir, en períodos de tiempo separados uno del otro. La administración secuencial abarca además el suministro de un vector AAV seguido del suministro de un vector adenoviral. El procedimiento abarca también la coadministración de un vector adenoviral y de un vector AAV, es decir, la administración simultánea o en una relación de proximidad cercana en el tiempo de cada uno con el otro, tanto si se formulan conjuntamente como por separado. En una realización, el suministro secuencial del producto antigénico puede ser efectuado incluso con la coadministración de diferentes vectores debido a la cinética de la expresión de antígeno a través de uno de los vectores, del uso de un promotor inducible, o de cualquier otro sistema de expresión activable.

En una realización, el régimen de inmunización proporciona la administración de múltiples vectores adenovirales en combinación con la administración secuencial de un vector AAV según se describe en la presente memoria. En otra realización, el régimen proporciona la administración de un vector adenoviral con la administración secuenciada de múltiples vectores AAV. Todavía en otra realización, el régimen proporciona la administración secuencial de múltiples vectores adenovirales en combinación con múltiples vectores AAV.

Un régimen que incluye la administración de más de un vector adenoviral utiliza típicamente un primer vector adenoviral que tiene una proteína de cápside de un primer serotipo, y la administración de al menos un vector adenoviral adicional que tiene una proteína de cápside que es inmunológicamente distinta a la del (de los) vector(es) adenoviral(es) anterior(es).

Según se utiliza en la presente memoria, una proteína de cápside es inmunológicamente distinta de la proteína de otro cápside si puede ser administrada a un sujeto en ausencia de una respuesta inmune que impida la infección con una segunda proteína de cápside (por ejemplo, una respuesta de anticuerpo de neutralización de clarificación). De manera adecuada, las proteínas de cápside de un(os) vector(es) de potenciación son procedentes de una fuente serológicamente distinta de la proteína de cápside del (de los) vector(es) previamente administrado(s) (imprimación). Sin embargo, en otras realizaciones, las proteínas de cápside de los vectores de imprimación (y opcionalmente, de potenciación), pueden ser administrados sin relación con la distintividad serológica, si los epítopes de anticuerpo naturales de las proteínas de cápside están enmascarados, modificados, o neutralizados de otro modo (por ejemplo, mediante coadministración de una molécula exógena).

De forma similar, un régimen que incluye la administración de más de un vector AAV utiliza típicamente un primer vector AAV que tiene una proteína de cápside de un primer serotipo y la administración de al menos un vector AAV adicional que tiene una proteína de cápside que es inmunológicamente distinta a la(s) del (de los) vector(es) AAV anteriores.

Dependiendo de las vías de administración deseadas, un experto en la materia puede seleccionar un régimen apropiado. Por ejemplo, un pico de respuesta inmune se observa por lo general alrededor de 10 a 14 días después de un suministro mediado de Ad. Sin embargo, la potenciación a continuación de este pico puede generar un segundo pico. De ese modo, puede resultar... [Seguir leyendo]

1. Uso de un adenovirus de replicación defectuosa y un virus adeno-asociado en la preparación de un medicamento útil en un régimen de inmunización, comprendiendo el régimen la administración del virus adeno-asociado con anterioridad a la administración del adenovirus de replicación defectuosa,

comprendiendo el adenovirus de replicación defectuosa un primer casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto, y

comprendiendo el virus adeno-asociado (AAV) un segundo casete de expresión heteróloga que comprende secuencia de ácido nucleico que codifica el producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto.

2. Una combinación de un adenovirus de replicación defectuosa y un virus adeno-asociado, para su uso en un régimen de inmunización, comprendiendo el régimen la administración del virus adeno-asociado con anterioridad a la administración del adenovirus de replicación defectuosa,

comprendiendo el adenovirus de replicación defectuosa un primer casete de expresión heteróloga que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto, y

comprendiendo el virus adeno-asociado (AAV) un segundo casete de expresión heteróloga que comprende secuencia de ácido nucleico que codifica el producto para inducir una respuesta inmune bajo el control de secuencias de control regulatorias que dirigen la expresión del producto.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la combinación de acuerdo con la reivindicación 2, en los que las secuencias regulatorias del primer y segundo casetes de expresión del adenovirus de replicación defectuosa y del virus adeno-asociado, difieren.

4. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que las secuencias regulatorias del virus adeno-asociado comprenden un promotor inducible.

5. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el régimen comprende además suministrar un agente de inducción al sujeto.

6. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 5, en los que el régimen comprende la administración del agente de inducción al sujeto a continuación de la administración del AAV.

7. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 5, en los que el régimen comprende la administración del agente de inducción al sujeto a continuación de la administración del adenovirus.

8. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el adenovirus comprende además un borrado en la región seleccionada en el grupo de regiones de adenovirus consistente en las regiones E2, E3, E4, L1, L2, L3, L4 y L5.

9. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el casete de expresión del adenovirus se localiza en el sitio de una región E1.

10. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el primer casete de expresión del adenovirus y/o el segundo casete de expresión del virus adeno-asociado, se localizan en la región E3 borrada.

11. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el adenovirus es un serotipo seleccionado en el grupo consistente en C5, C6, C7, C68 y C1.

12. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el régimen comprende la administración del adenovirus oralmente, intranasalmente o intramuscularmente.

13. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el AAV es un serotipo seleccionado en el grupo consistente en AAV1 y AAV8.

14. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el régimen comprende la administración del AAV intramuscularmente.

15. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el régimen comprende además administrar una vacuna de ADN.

16. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 15, en los que el régimen comprende la administración de la vacuna de ADN con anterioridad al vector adenoviral o al vector de AAV.

17. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el régimen comprende además la administración de una vacuna a base de proteína.

18. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 17, en los que el régimen comprende el suministro de la vacuna a base de proteína después del vector adenoviral.

19. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 17, en los que el régimen comprende el suministro de la vacuna a base de proteína después del vector de AAV.

20. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 17, en los que el régimen comprende el suministro de la vacuna a base de proteína después del vector adenoviral y del vector de AAV.

21. El uso o la combinación de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en los que el vector de AAV tiene un cápside modificado que comprende un péptido o un polipéptido heterólogo que incrementa la antigenicidad del vector de AAV.

22. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 21, en los que el cápside modificado comprende una proteína vp2 que tiene un péptido fusionado en su terminación N.

23. El uso o la combinación de acuerdo con la reivindicación 21, en los que el cápside modificado comprende una proteína vp1 modificada que tiene un péptido insertado en la misma.