Composición farmacéutica para su utilización en un procedimiento destinado a potenciar la angiogénesis en un tejido diana de mamífero asociado a una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por mala circulación,

extremidades isquémicas y heridas crónicas, comprendiendo dicha composición farmacéutica un vector de expresión vírico o no vírico que codifica una secuencia nucleotídica que puede expresar una proteína Src, que presenta cualquier resto de aminoácido en el codón 527 excepto tirosina, serina o treonina

Campo técnico

La presente invención se refiere generalmente al campo de la medicina, y se refiere específicamente a procedimientos y composiciones para modular la angiogénesis de tejidos que utilizan la proteína tirosina cinasa Src, variantes de Src y a los ácidos nucleicos que las codifican.

Antecedentes

La angiogénesis es un proceso de vascularización tisular que implica el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos en un tejido, y se hace asimismo referencia al mismo como neovascularización. El procedimiento está mediado por la infiltración de células endoteliales y células de músculo liso. El procedimiento se cree que procede en alguna de las tres formas: los vasos pueden brotar de vasos preexistentes, el desarrollo de nuevos vasos puede surgir de células madre (vasculogénesis) o pequeños vasos existentes pueden aumentar de diámetro. Blood et al., Bioch. Biophys. Acta, 1032:89-118 (1990).

La angiogénesis es un proceso importante en el desarrollo de los recién nacidos, pero es también importante en la cicatrización de heridas y en la patogenia de una gran variedad de enfermedades clínicas incluyendo la inflamación de tejidos, artritis, crecimiento tumoral, retinopatía diabética, degeneración macular por neovascularización de la retina y enfermedades similares. Estas manifestaciones clínicas asociadas a la angiogénesis se denominan enfermedades angiogénicas. Folkman et al., Science, 235:442-447 (1987). La angiogénesis está generalmente ausente en tejidos de adultos o maduros, aunque se produce en la cicatrización de heridas y en el ciclo del crecimiento del cuerpo lúteo. Véase, por ejemplo, Moses et al., Science, 248:1408-1410 (1990).

Se ha propuesto que la inhibición de la angiogénesis sería una terapia útil para restringir el crecimiento tumoral. La inhibición de la angiogénesis ha sido propuesta por (1) inhibición de la liberación de “moléculas angiogénicas” tales como FGFb (factor de crecimiento de fibroblastos básico), (2) neutralización de moléculas angiogénicas, tales como mediante la utilización de anticuerpos anti-βbFGF, (3) utilización de inhibidores de receptor de vitronectina αvβ3 y (4) inhibición de la respuesta de células endoteliales a estímulos angiogénicos. Esta última estrategia ha recibido atención, y Folkman et al., Cancer Biology, 3:89-96 (1992), han descrito varios inhibidores de la respuesta a las células endoteliales, incluyendo el inhibidor de colagenasa, los inhibidores de recambio de la membrana basal, esteroides angioestáticos, inhibidores de la angiogénesis procedente de hongos, factor 4 de plaquetas, trombospondina, fármacos para la artritis tales como D-penicilamina y tiomalato de oro, análogos de la vitamina D3, interferón alfa y similares que pueden utilizarse para inhibir la angiogénesis. Para inhibidores adicionales propuestos de angiogénesis, véase Blood et al., Bioch. Biophys. Acta, 1032:89-118 (1990), Moses et al., Science, 248:14081410 (1990), Ingber et al., Lab. Invest., 59:44-51 (1988) y patentes US nº 5.092.885, nº 5.112.946, nº 5.192.744, nº 5.202.352, nº 5.753.230 y nº 5.766.591. Ninguno de los inhibidores de la angiogénesis descritos en las referencias anteriores implica las proteínas Src.

Para que se produzca angiogénesis, las células endoteliales deben degradarse en primer lugar y atravesar la membrana basal del vaso sanguíneo de manera similar a la utilizada por las células tumorales durante la invasión y la formación de la metástasis.

Se ha publicado anteriormente que la angiogénesis depende de la interacción entre las integrinas vasculares y las proteínas de la matriz extracelular. Brooks et al., Science, 264:569-571 (1994). Además, se publicó que la muerte celular programada (apoptosis) de las células vasculares angiógenas se inicia por la interacción, que estaría inhibida por determinados antagonistas de la integrina vascular α,β3. Brooks et al., Cell, 79:1157-1164 (1994). Más recientemente, se ha publicado que la unión de la metaloproteinasa-2 de la matriz (MMP-2) al receptor de vitronectina (α,β3) puede inhibirse utilizando antagonistas de α,β3., y de este modo inhibir la función enzimática de la proteinasa. Brooks et al., Cell, 85:683-693 (1996).

El documento WO 98/16638 se refiere a ligandos que incluyen secuencias de aminoácidos que se unen a por lo menos dos dominios de una proteína diana, en la que ligandos particularmente preferidos incluyen los que se dirigen a los dominios 2 y 3 de la homología Src de las proteínas eucarióticas tirosina cinasas.

Marx, M. y Dorsch, O. (Kidney Int., 1997, Vol. 51(1):110-8) dan a conocer que c-src ejerce efectos reguladores sobre la proliferación de células del mesangio, la organización citoesquelética, proteasas de la matriz y diferenciación.

Russel R. et al.(Proc. Natl. Acad. Sci., USA.,1991, Vol. 88:10696-10700) publican que la fosforilación del terminal carboxilo de pp-60c-src, producto del protooncogen c-src, en Tyr-527 suprime la actividad de tirosina cinasa y la transformación potencial.

Irby R. et al. (Surgical Forum,1998, Vol. 49:395-396) dan a conocer una implicación de Src en la iniciación y evolución del cáncer de colon.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a la modulación de la angiogénesis en tejidos por la tirosina cinasa Src, además en la presente memoria se denomina genéricamente Src, como se define en las reivindicaciones.

Se contemplan las composiciones y utilizaciones para modular la angiogénesis en un tejido asociada a una enfermedad. Una composición que comprende una cantidad moduladora de angiogénesis de una proteína Src debe administrarse al tejido para ser considerada una enfermedad que responde a la modulación de la angiogénesis. La composición que proporciona la proteína Src puede contener proteína purificada, fragmentos de proteína biológicamente activa, proteína Src, fragmentos de proteína o proteínas de fusión de los mismos producidos por recombinación o vectores de expresión de gen/ácido nucleico para expresar una proteína Src.

Cuando la proteína Src se inactiva o inhibe, la modulación es una inhibición de la angiogénesis. Cuando la proteína Src está activa o activada, la modulación es una potenciación de la angiogénesis.

El tejido que va a tratarse puede ser cualquier tejido en el que se desee la modulación de la angiogénesis. Para la inhibición de la angiogénesis, es útil tratar el tejido enfermo en el que se produce la neovascularización perjudicial. Los tejidos ejemplificativos incluyen tejido inflamado, tumores sólidos, metástasis, tejidos que experimentan restenosis y tejidos similares.

Para la potenciación, es útil tratar a los pacientes con extremidades isquémicas en las que existe una escasa circulación en las extremidades de diabéticos u con otras enfermedades. Pueden tratarse también los pacientes con heridas crónicas que no cicatrizan y por lo tanto podrían beneficiarse del aumento en la proliferación de células vasculares y neovascularización.

Resulta particularmente preferida la utilización de la proteína Src que contiene una secuencia de aminoácidos modificada como se describe en la presente memoria. Varias proteínas Src modificadas particularmente útiles y la expresión de las mismas se describen en la presente memoria.

La presente invención comprende además una composición farmacéutica para estimular la angiogénesis en un tejido diana de mamífero que comprende un vector de transferencia génica vírico o no vírico que contiene un ácido nucleico y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable; teniendo dicho ácido nucleico un segmento de ácido nucleico que codifica una proteína Src, teniendo dicha proteína Src algún resto de aminoácido en el codón 527 excepto tirosina, serina o treonina.

Está asimismo prevista una composición farmacéutica para inhibir la angiogénesis en un tejido diana de mamífero que comprende un vector de transferencia génica vírico o no vírico que contiene un ácido nucleico y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable; presentando dicho ácido nucleico un segmento de ácido nucleico que codifica una proteína Src que no presenta actividad de cinasa.

Breve descripción de los dibujos

En los dibujos que forman parte de la presente exposición:

La figura 1 es una secuencia de ADNc de c-Src de pollo que es la secuencia de codificación completa con los intrones eliminados... [Seguir leyendo]

1. Composición farmacéutica para su utilización en un procedimiento destinado a potenciar la angiogénesis en un tejido diana de mamífero asociado a una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por mala circulación, extremidades isquémicas y heridas crónicas, comprendiendo dicha composición farmacéutica un vector de expresión vírico o no vírico que codifica una secuencia nucleotídica que puede expresar una proteína Src, que presenta cualquier resto de aminoácido en el codón 527 excepto tirosina, serina o treonina.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicho vector es un vector vírico de transferencia génica y en la que dicha composición contiene además un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicha proteína Src es Src A.

4. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicho tejido presenta mala circulación.

5. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicha composición farmacéutica debe administrarse mediante administración intravenosa, transdérmica, intrasinovial, intramuscular u oral.

6. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicha composición farmacéutica debe administrarse como una sola dosis por vía intravenosa.

7. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que dicha composición farmacéutica comprende además un liposoma.

8. Utilización de una proteína Src que presenta cualquier resto de aminoácido en el codón 527 excepto tirosina, serina o treonina o una secuencia nucleotídica que puede expresar dicha proteína para la preparación de una composición farmacéutica destinada a potenciar la angiogénesis en un tejido asociado a una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por mala circulación, extremidades isquémicas y heridas crónicas.

9. Utilización según la reivindicación 8, en la que dicha proteína Src es Src A.

10. Utilización según la reivindicación 8, en la que dicho tejido presenta una mala circulación.

11. Utilización de una proteína Src inactiva o de una secuencia nucleotídica que puede expresar dicha proteína para la preparación de una composición farmacéutica destinada a inhibir la angiogénesis en un tejido asociado a una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por artritis, artritis reumatoide, tumor sólido, metástasis del tumor sólido, retinopatía, retinopatía diabética, degeneración macular, restenosis y enfermedades inflamatorias.

12. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicha proteína Src inactiva es Src 251 o Src K295M.

13. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho tejido está inflamado y dicha enfermedad es la artritis o la artritis reumatoide.

14. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho tejido es un tumor sólido o una metástasis de tumor sólido.

15. Utilización según la reivindicación 14, en la que la administración de dicha composición farmacéutica se realiza juntamente con la quimioterapia.

16. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho tejido es el tejido retiniano y dicha enfermedad es retinopatía, retinopatía diabética o degeneración macular.

17. Utilización según la reivindicación 11, en la que dicho tejido está en la zona de la angioplastia coronaria y dicho tejido presenta riesgo de restenosis.

18. Utilización según la reivindicación 8 u 11, en la que la administración de dicha composición farmacéutica comprende la administración intravenosa, transdérmica, intrasinovial, intramuscular u oral.

19. Utilización según la reivindicación 8 u 11, en la que la administración de dicha composición farmacéutica comprende una sola dosis por vía intravenosa.

20. Utilización según la reivindicación 8 u 11, en la que dicha composición farmacéutica comprende además un liposoma.

21. Utilización según la reivindicación 8 u 11, en la que dicha composición farmacéutica comprende un vector de expresión retrovírica que puede expresar dicha secuencia nucleotídica.

22. Utilización según la reivindicación 8 u 11, en la que dicha composición farmacéutica comprende un vector de expresión no vírica que puede expresar dicha secuencia nucleotídica.