PROCEDIMIENTOS PARA LA ADAPTACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE A UN ANTÍGENO O INMUNÓGENO.

Procedimientos para la adaptación de la respuesta inmune a un antígeno o inmunógeno REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos Nº 60/534.923, presentada el 7 de enero de 2004. FINANCIACIÓN GUBERNAMENTAL La invención descrita en este documento contó con el apoyo, en su conjunto o en parte, de la Subvención R31/CCR922413-01; R31/CCR924378-01 de los Centros de Control y Prevención de Enfermedades. El gobierno de Estados Unidos tiene ciertos derechos sobre la invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El desarrollo de vacunas preventivas y terapéuticas eficaces frente a una diversidad de agentes (tales como microorganismos infecciosos) es un objetivo importante para el control de enfermedades en todo el mundo. En muchos casos, la vacuna más eficaz se dirige específicamente al portal de entrada más común para los microorganismos, las superficies mucosas del cuerpo, incluyendo los conductos nasales, los pulmones, los tractos reproductores y el intestino. La inmunicidad protectora frente a patógenos específicos se consigue por respuestas inmunes humorales, celulares y mucosales. Las respuestas humorales o de anticuerpos son importantes en la neutralización de patógenos y pueden ser muy eficaces en algunas enfermedades infecciosas. Los anticuerpos circulan en la sangre, y proporcionan una medida del total de las respuestas inmunes humorales. La inmunidad mediada por células, específicamente la implicación de los linfocitos T citotóxicos (CTL) es necesaria para la inmunidad protectora frente a muchos patógenos intracelulares y el cáncer. La inmunidad localizada en las superficies mucosas de los conductos nasales, los pulmones, los tractos reproductores y el intestino también es crucial para producir respuestas inmunes eficaces frente a patógenos que acceden al cuerpo a través de estos sitios. El sello distintivo de las respuestas inmunes mucosales eficaces es la producción local del anticuerpo de IgA secretor en las superficies mucosas. La IgA también circula por la sangre y sus niveles en ésta proporcionan una estimación sobre el total de las respuestas inmunes de las mucosas. La IgG mucosal también es importante en la neutralización de ciertos patógenos. La inmunización repetida puede dar como resultado respuestas inmunes mejoradas y puede conferir una protección aumentada. Una inmunización primaria establece un nivel base de inmunidad y puede conducir al desarrollo de linfocitos de memoria T y B. Una inmunización secundaria en un momento posterior puede movilizar estos linfocitos de memoria y conducir a respuestas inmunes mayores y más específicas. La mayor parte de las respuestas inmunes se regulan por linfocitos T, que inician y conforman la naturaleza de la respuesta. A medida que las respuestas inmunes maduran, los linfocitos T CD4 + pueden polarizarse hacia respuestas inmunes de T colaboradores de tipo 1 (Th1) o T colaboradores de tipo 2 (Th2). El sello distintivo de las respuestas de tipo Th1 y Th2 es el patrón predominante de las citocinas que están presentes. Las respuestas de Th1 se caracterizan por altos niveles de IFN- y bajos niveles de IL-4 e IL-10, mientras que las repuestas de Th2 se caracterizan por bajos niveles de IFN- y altos niveles de IL-4 e IL-10. Estas citocinas juegan una función importante en la determinación de las capacidades funcionales de los linfocitos T. Las repuestas de tipo Th2 conducen a la producción preferida de anticuerpos de la subclase IgG1, con poca o sin generación de CTL. Las respuestas de tipo Th1 conducen a la producción preferida de anticuerpos de la subclase IgG2a y la inducción de CTL que pueden matar de forma eficaz células infectadas con virus u otros organismos. La Tabla A que se muestra a continuación resume las características inmunológicas de las respuestas inmunes polarizadas de Th1 y Th2. Las respuestas polarizadas de Th1 se generan típicamente durante infecciones con virus o bacterias. Por el contrario, las respuestas polarizadas de Th2 se observan a menudo en infección es parasitarias, en respuestas alérgicas y por vacunas de proteínas administradas por vía intramuscular basadas en alumbre convencionales que se usan en seres humanos. La genética también puede determinar el tipo de respuesta inmune generada. Por ejemplo, las respuestas de Th1 predominan en la cepa C57BL/6 de ratón, mientas que las respuestas de Th2 predominan en la cepa Balb/c de ratón. Las respuestas inmunes también pueden contener tanto componentes de Th1 como Th2, proporcionando protección mediante brazos tanto humorales como mediados por células de la respuesta inmune. La determinación directa de las frecuencias de las células productoras de citocinas se realiza mediante el uso de ELISPOT (ensayos de PUNTOS Inmunoabsorbentes Ligados a Enzimas) o mediante tinción inmunofluorescente para revelar la producción de citocina intracelular. Las proporciones de IgG1:IgG2a en suero también son un criterio ampliamente aceptado y seguido para determinar los tipos de T colaboradores (Tabla A). Una proporción de IgG1 con respecto a IgG2a para obtener una respuesta de Th1 y Th2 equilibrada ha de estar entre 0,5 y 2,0. 2   Tabla A: Características de respuestas de Th1 y Th2 de linfocitos T polarizados Respuestas inmunes Respuestas inmunes de tipo Th1 Respuestas inmunes de tipo Th2 Inmunidad humoral IgG1/IgG2a en suero <0,5 IgG1/IgG2a en suero >2,0 Secreción de citocinas de linfocitos T IFN-, IL-10 e IL-4 IL-10 e IL-4, IFN-, CTL Altas Bajas o ausente Cepas prototipo de ratón C57BL/6 Balb/c Como se usa en este documento, "respuesta de T colaboradores de tipo 1" y "respuesta de Th1" se usan de forma intercambiable para referirse a una gama de respuestas de animales huésped que incluyen una o más, normalmente todas, las características enumeradas en la columna central de la Tabla A anterior. Estas características incluyen una proporción de IgG1:IgG2a de no más de 0,5; secreción de IFN- aumentada (y otras citocinas Th1) por linfocitos T colaboradores 1 y secreción de IL-10 y IL-4 reducida (y otras citocinas Th2) por linfocitos T colaboradores 2; y una alta actividad de CTL. De forma similar, como se usa en este documento, "la respuesta de T colaboradores de tipo 2" y "respuesta de Th2" se usan de forma intercambiable para referirse a una gama de respuestas de animales huésped que incluyen una o más, normalmente todas, las características enumeradas en la columna derecha de la Tabla A anterior. Estas características incluyen una proporción de IgG1:IgG2a de no más de 2,0; secreción de IFN- reducida (y otras citocinas Th1) por linfocitos T colaboradores 1 y secreción de IL-10 y IL-4 aumentada (y otras citocinas Th2) por linfocitos T colaboradores 2; y una baja o ninguna actividad de CTL. La administración de la vacuna toma una diversidad de formas, dependiendo del agente que se va a administrar y la vía de administración. Los sistemas de administración de vacunas a menudo se diseñan para administrar vacunas a áreas específicas del cuerpo. En el tracto gastrointestinal es importante que la vacuna no se degrade o elimine antes que haya tenido la oportunidad de ejercer un efecto localizado o de pasar al torrente sanguíneo o de interactuar con tejido linfoide en el entorno local. En el tracto nasofaríngeo, es importante que la vacuna permanezca en la proximidad de las células absortivas; también es importante que los antígenos permanezcan en contacto con las células linfoides antes de que el antígeno se lave a través del tracto nasal o se ingiera. Además, es importante que el antígeno, vehículo y el estimulador inmune se coadministren en un solo complejo. Tradicionalmente, la inmunización se ha realizado administrando organismos o células enteras inactivados, extractos de microorganismos o células, o componentes aislados de aquellos, tales como antígenos proteicos o peptídicos. La inmunización se ha realizado por administración oral, intranasal (IN) o intramuscular (IM) de organismos vivos atenuados. Típicamente, a los seres humanos y los animales se les inyectan dichas composiciones e presencia de conservantes, adyuvantes y otros excipientes por vía intramuscular o subcutánea para provocar la inmunidad protectora en vacunas normales pediátricas o de adultos de uso común. La inmunización parenteral raramente es capaz de provocar una respuesta inmune mucosal eficaz que de como resultado la producción de anticuerpos, particularmente, la producción de inmunoglobulina A (IgA), lo que es importante como una primera barrera de defensa para la invasión de microorganismos. Actualmente, sólo los virus o bacterias vivos atenuados son capaces de inducir una respuesta inmune protectora en seres humanos o animales cuando se administran por vía oral o por vía intranasal. Hasta la fecha, se han desarrollado muy pocas vacunas... [Seguir leyendo]

1. Una preparación primaria para administración intramuscular que comprende un ácido nucleico que codifica un antígeno: y una preparación secundaria para administración intranasal que comprende el antígeno encapsulado en liposomas, para provocar una respuesta inmune en un animal en el que la administración de la preparación secundaria produce una respuesta inmune que comprende: (1) un aumento en el nivel en suero de la IgA específica de antígeno en comparación con el nivel en suero de la IgA específica de antígeno anterior a la administración de la preparación secundaria y, (2) un aumento en comparación con un animal no tratado en la proporción de linfocitos T citotóxicos CD8- IFN+ específicos del antígeno tanto en el pulmón como en el bazo. 2. La composición de la reivindicación 1, en la que la respuesta inmune provocada tiende a una respuesta Th1 en un animal huésped. 3. La composición de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la respuesta inmune deseada es frente a un patógeno y el antígeno es un antígeno específico de patógeno. 4. La composición de la reivindicación 1, en la que los liposomas en la preparación secundaria tienen una media de aproximadamente 0,5-5 µm de tamaño. 5. La composición de la reivindicación 3, en la que la respuesta inmune confiere inmunidad frente al patógeno. 6. La composición de la reivindicación 5, en la que la respuesta inmune protege a los animales de la exposición por dicho patógeno. 7. La composición de una de las reivindicaciones 3-6, en la que el patógeno es un virus. 8. La composición de la reivindicación 7, en la que el virus es VHB, y el antígeno específico de patógeno es HBsAg. 9. La composición de la reivindicación 8, en la que el animal es un ser humano. 10. La composición de la reivindicación 1, en la preparación secundaria no contiene un adyuvante distinto de liposomas. 11. Un kit para provocar una respuesta inmune en un animal huésped que comprende: a) un primer componente inmunizante para administración intramuscular que comprende un ácido nucleico que codifica un antígeno; b) un segundo componente inmunizante para administración intranasal que comprende el antígeno encapsulado en liposomas; c) una instrucción para un usuario para administrar al animal el primer componente inmunizante seguido de la administración del segundo componente inmunizante para provocar una respuesta inmune en el animal. 12. El kit de la reivindicación 11, en el que la respuesta inmune deseada es frente a un patógeno y el antígeno es un antígeno específico de patógeno. 13. El kit de la reivindicación 11, en el que los liposomas en el segundo componente inmunizante tienen una media de aproximadamente 0,5-5 µm de tamaño. 14. El kit de la reivindicación 12 o la reivindicación 13, en el que el patógeno es un virus. 15. El kit de la reivindicación 14, en el que el virus es VHB, y el antígeno específico de patógeno es HBsAg. 16. El kit de una de las reivindicaciones 11-15 en el que el animal es un ser humano. 17. El kit de la reivindicación 11, en el que el segundo componente inmunizante no contiene un adyuvante distinto de liposomas. 18. La composición de la reivindicación 1, en la que la preparación secundaria consiste en un antígeno encapsulado en liposomas en un disolvente adecuado. 19. El kit de la reivindicación 11, en el que el segundo componente inmunizante consiste en un antígeno encapsulado en liposomas y un disolvente adecuado.   36   37   38   39     41   42   43   44     46   47   48   49     51   52   53   54