Péptido con la siguiente secuencia de aminoácidos HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD

Campo de la invención

La presente invención se refiere al uso de una composición farmacéutica que comprende un péptido GLP-2.

Antecedentes de la invención

El glucagón es producido por la célula A pancreática y se libera en respuesta a niveles bajos de glucosa en la sangre. Su lugar de acción principal es el hígado, donde estimula la producción de glucosa. Por tanto, es la hormona principal que contrarresta la insulina en la homeostasis de la glucosa sanguínea (Unger, R. H. y L. OrcI (1990). Glucagon, en: Diabetes Mellitus 4ª ed. New York, Elsevier. pp 104-120).

El glucagón se procesa a partir de un precursor más grande por proteólisis limitada. La clonación molecular del gen de glucagón reveló que el precursor de proglucagón contenía no sólo glucagón sino también dos péptidos de tipo glucagón adicionales llamados GLP-1 y GLP-2. El GLP-1 y GLP-2 están codificados por exones separados, lo que sugiere actividades biológicas diferentes. Más tarde se demostró que el precursor de proglucagón era sometido a procesos diferenciales en los tres tejidos diferentes conocidos por producir proglucagón: la célula A pancreática, la célula L intestinal y en el sistema nervioso central (SNC). El glucagón es así selectivamente separado del precursor en el islote de la célula A, mientras que el GLP-1 y el GLP-2 son selectivamente liberados de la célula L intestinal y el SNC. [publicado en (Unger, RH. y L. Ore¡ (1990). Glucagon, en: Diabetes Mellitus 4ª ed. New York, Elsevier. pp 104-120)]. Se han identificado receptores específicos de GLP-1 (Thorens, B. (1992) Proc. Natl. Acad. USA 89: 86418645) los cuales son claramente diferentes del receptor de glucagón (L. J Jehnek, et al. (1993) Science 259: 16141616) y tienen distribuciones de tejido diferentes (R. V Campos, et al. (1994) Endocrinology 134: 2156-2164). El GLP-1 se libera de la célula L después de una comida y funciona como una hormona incretina (es decir, potencia la liberación de insulina inducida por la glucosa de la célula B pancreática). El receptor de GLP-1 se expresa de esta manera a niveles elevados en la superficie de las células B del islote (K. Moens, et al. (1996) Diabetes 45: 257-261).

Se ha demostrado la inducción a la proliferación epitelial intestinal por el GLP-2 (Drucker, D. J. et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 7911-7916), y se ha descrito el tratamiento de enfermedades gastrointestinales por células cultivadas en un medio de GLP-2 (Drucker, DJ y Keneford, JR., WO 96/32414). Hasta ahora no se había informado sobre ningún receptor de GLP-2.

Péptidos derivados del proglucagón y hábitos alimenticios

Previamente hemos informado sobre la derivación y el establecimiento de glucagonomas anorexigénicos transplantables (O. D. Madsen, et al. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030) así como de insulinomas hipoglucémicos en ratas (O. D. Madsen, et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Se¡. USA 85: 6652-6656). Este tipo de tumores pueden derivarse a partir de un origen clónico común de células MSL pluripotentes (O.D. Madsen, et al. (1986) J. Cell Biol. 103: 20252034) y refleja un proceso de maduración hacia células A y células B de islotes, respectivamente (O.D. Madsen, et al. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030).

La anorexia asociada al glucagonoma es muy grave: tiene una aparición aguda y conduce, tras pocos días, a una parada completa de la ingestión de alimentos. Esta gravedad de anorexia apenas puede compararse con otros tumores experimentales en roedores y sugiere la producción por parte del glucagonoma de un factor de saciedad muy potente que actúa mediante una vía periférica de administración. Previamente se ha demostrado que los glucagonomas anorexigénicos mostraban un proceso no fisiológico que daba como resultado la formación tanto de glucagón como de GLP-1 (O. D. Madsen, et al. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030). Además, una variante del glucagonoma no anorexigénico fue incapaz de procesar el precursor (O.D. Madsen, et al. (1995) Scand. J. Clin, Lab. Invest. 55, supl 220: 27-36). También se menciona la pérdida de peso como componente del síndrome del glucagonoma en el hombre (J. J. Holst (1985) Glucagon-producing tumors, en: Hormone-producing tumors of the gastrointestinal tract New York, Churchill Livingstone. pp 57-84) aunque con un alto grado de variabilidad entre pacientes diferentes (S.J. Bhathena, et al. (1981). Glucagonoma and glucagonoma syndrome, en: Glucagon Physiology, pathophysiology and morphology of the pancreatic A-cells. New York, Elsevier. 413-438).

Glucagón

Se ha mostrado que el glucagón está implicado en la regulación de la cantidad de comida espontánea en ratas, pero el efecto global es mínimo y es ejercido por medio de conexiones vagales al hígado (N. Geary, et al. (1993) Am. J. Physiol.

264: R116-R122). Este efecto se observa sólo por infusión portal hepática de glucagón, mientras que la administración intraperitoneal de dosis farmacológicas no muestra ningún efecto sobre la ingestión de alimentos en ratas en ayunas

(O.D. Madsen, et al. (1993) Endocrinology 133: 2022-2030).

GLP-1

Se ha informado recientemente sobre el papel central del GLP-1 en la regulación de la alimentación (M. D. Turton, et al. (1996) Nature 379: 69-72). La administración intracerebroventricular (ICY) de GLP-1 inhibió la alimentación de las ratas en ayunas. Nuevamente la administración periférica de GLP-1 no tuvo ningún efecto en los hábitos de alimentación

(M.D. Turton, et al. (1996) Nature 379: 69-72; D. Madsen, et al. (1993) Endocrinology 133: 20222030), lo cual sugiere que puede que el GLP- 1 producido por un tumor no contribuya significativamente a la anorexia observada.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Se ha descubierto que el GLP-2 tiene un potente efecto en la inhibición de la ingestión de alimentos cuando se administra periféricamente. Se ha propuesto que el GLP-2 normalmente liberado junto con el GLP-1 de la célula L intestinal desempeña su propio papel distintivo como factor de saciedad periférico.

En consecuencia, el uso de una composición farmacéutica se describe en la presente comprendiendo, junto con un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable, una fracción de HPLC de un extracto de tumor de glucagonoma preparado por extracción de ácido etanol, filtración en gel y HPLC preparatoria, dicha fracción estando mostrada como fracción G4H9 en la Fig. 2 y conteniendo el péptido tipo glucagón 2 (GLP-2) como un componente principal (es decir, más del 40%) o comprendiendo cualquier componente individual de dicha fracción o una combinación de dos o más de los componentes de dicha fracción.

Una composición farmacéutica que comprende péptido tipo glucagon 2 (GLP-2) o una variante u homólogo del mismo para la profilaxis o tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con la regulación del apetito perjudicada está descrita en la presente. Una composición farmacéutica que comprende un péptido con la siguiente secuencia de aminoácidos X1 H X2 D G S F S D E M N T X3 L D X4 L A X5 X6 D F I N W L X7 X8 T K IT D X9 donde X1 es NH2, DFPEEVAIVEELGRR, DEPEEVTIVEELGRR, DFPEEVNIVEELRRR o un fragmento derivado, X2 es Ala o Gly, X3 es Ile o Val, X4 es Asn, Ser o His, X5 es Ala o Thr, X6 es Arg o Lys, X7 es Ile o Leu, X8 es Gln o His, o X9 es OH, Lys, Arg, Arg-Lys, Lys-Arg, Arg-Arg o Lys-Lys para la profilaxis o el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con la mala regulación del apetito está descrita en la presente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

La invención se refiere a un péptido y su composición tal y como se define en las reivindicaciones.

En la presente descripción, el término "péptido" se entiende para incluir el péptido GLP-2 maduro o una forma precursora del mismo así como un fragmento funcional del mismo que esencialmente tenga la actividad del péptido en toda su longitud. Además, el término "péptido" se destina a incluir homólogos de dicho péptido. Tales homólogos comprenden una secuencia de aminoácidos que exhibe un grado de identidad de al menos 50%, tal como al menos 75%, y más particularmente al menos 90% de identidad con la secuencia de aminoácidos de GLP-2 humano. El grado de identidad se puede determinar por métodos convencionales, véase por ejemplo, Altshul et al., Bull. Math. Bio. 48: 603-616, 1986, y Henikoff y Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919, 1992.

Homólogos... [Seguir leyendo]

1. Péptido con la siguiente secuencia de aminoácidos HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, que comprende el péptido según la reivindicación 1.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 2, en forma liofilizada.

5

4. Composición farmacéutica según la reivindicación 2, que comprende:

- un vehículo líquido adecuado, y opcionalmente sustancias auxiliares farmacéucticamente aceptables.

5. Composición farmacéutica según una de las reivindicación 2-4, en forma de dosificación unitaria que comprende 0,5 mg-500mg del péptido junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

6. Secuencia de ADN que codifica el péptido según la reivindicación 1.

7. Célula que comprende la secuencia de ADN según la reivindicación 6.