MÉTODOS PARA PRODUCIR HIALURONANO EN UNA CÉLULA HUÉSPED RECOMBINANTE.

Método para la producción de un ácido hialurónico, que comprende:

(I) cultivo de una célula huésped de Bacillus bajo condiciones adecuadas para la producción del ácido hialurónico, donde la célula huésped de Bacillus comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende una secuencia codificante de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia codificante de hialuronano sintasa; donde (a) la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii); (b) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II); (c) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II); y (ii) recuperación del ácido hialurónico del medio de cultivo

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2002/041067.

Solicitante: NOVOZYMES BIOPHARMA DK A/S.

Nacionalidad solicitante: Dinamarca.

Dirección: KROGSHOEJVEJ 36 2880 BAGSVAERD DINAMARCA.

Inventor/es: BROWN, STEPHEN, TANG, MARIA, SLOMA,Alan, BEHR,Regine, WIDNER,William, STERNBERG,David.

Fecha de Publicación: 4 de Julio de 2011.

Fecha Solicitud PCT: 20 de Diciembre de 2002.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/52 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican enzimas o proenzimas.
C12N9/10D1A
C12P19/26 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Preparación de hidratos de carbono que contienen nitrógeno.

Clasificación PCT:

C12N1/21 C12N […] › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N9/10 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Transferasas (2.) (ribonucleasas C12N 9/22).
C12P19/26 C12P 19/00 […] › Preparación de hidratos de carbono que contienen nitrógeno.
C12P21/06 C12P […] › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › preparados por hidrólisis de un enlace peptídico, p. ej. hidrolizados.

Clasificación antigua:

C12N1/00 C12N […] › Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

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Fragmento de la descripción:

Antecedentes de la invención Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere a métodos para producir un hialuronano en una célula huésped recombinante.

Descripción de las técnicas relacionadas [0002] Los heteropolisacáridos más abundantes del cuerpo son los glicosaminoglicanos. Los glicosaminoglicanos son polímeros de carbohidrato de cadena recta, que consisten en repetir unidades de disacárido (sólo queratán sulfato se ramifica en la región central del carbohidrato). Las unidades de disacárido generalmente comprenden, como una primera unidad sacárida, uno de dos azúcares modificados - N-acetilgalactosamina (GalNAc) o N-acetilglucosamina (GlcNAc). La segunda unidad es normalmente un ácido urónico, tal como ácido glucurónico (GlcUA) o iduronato.

Los glicosaminoglicanos son moléculas cargadas negativamente, y tienen una conformación extendida que imparte alta viscosidad cuando están en solución. Glicosaminoglicanos se localizan principalmente en la superficie de células o en la matriz extracelular. Glicosaminoglicanos también tienen comprimibilidad baja en solución y, como resultado, son ideales como un fluido de lubrificación fisiológica, por ejemplo, articulaciones. La rigidez de glicosaminoglicanos proporciona integridad estructural a células y proporciona vías de paso entre células, que permiten la migración celular. Los glicosaminoglicanos de mayor importancia fisiológica son hialuronano, sulfato de condroitina, heparina, heparán sulfato, dermatán sulfato, y queratán sulfato. Muchos glicosaminoglicanos se enlazan de manera covalente a una proteína de núcleo de proteoglicano a través de estructuras de oligosacárido específicas. Hialuronano forma agregados grandes con proteoglicanos determinados, pero es una excepción como cadenas de carbohidrato libres de complejos no covalentes con proteoglicanos.

Funciones numerosas de hialuronano en el cuerpo han sido identificadas (véase, Laurent T. C. y Frasen J. R. E., 1992, FASEB J. 6: 2397-2404; y Toole B.P., 1991, "Proteoglycans and hyaluronan in morphogenesis and differentiation." En: Cell Biology of the Extracellular Matrix, pp. 305-341, Hay E. D., ed., Plenum, New York). El hialuronano está presente en el cartílago hialino, líquido sinovial, y tejido de piel, tanto de la dermis como epidermis. Se sospecha también que el hialuronano tiene un papel en numerosas funciones fisiológicas, tal como adhesión, desarrollo, motilidad celular, cáncer, angiogénesis, y cicatrización de una herida. Debido a las únicas propiedades biológicas y físicas del hialuronano, se emplea en la cirugía ocular y de articulaciones y está siendo evaluado en otros procedimientos médicos. Productos de hialuronano también han sido desarrollados para el uso en ortopedia, reumatología, y dermatología.

Crestas de gallo son una fuente comercial significante de hialuronano. Los microorganismos son una fuente alternativa. La patente estadounidense n°. 4,801,539 divulga un método para preparar ácido hialurónico que implica una cepa de Streptococcus zooepidemicus con rendimientos proporcionados de aproximadamente 3,6 g de ácido hialurónico por litro. La patente europea n°. EP0694616 divulga procesos de fermentación que usan una cepa mejorada de Streptococcus zooepidomicus con rendimientos proporcionados de aproximadamente 3.5 g de ácido hialurónico por litro.

Los microorganismos usados para la producción de ácido hialurónico por fermentación son cepas de bacterias patógenas, en primer lugar entre éstas siendo varias Streptococcus spp. Los estreptococos de grupo A y grupo C se rodean ellos mismos con una cápsula no antigénica compuesta por hialuronano, que es idéntica en composición a aquella encontrada en el tejido conjuntivo y articulaciones. Pasteurella multocida, otras bacterias de encapsulación patógenas, también rodean sus células con hialuronano.

Hialuronano sintasas han sido descritas de vertebrados, patógenos bacterianos, y virus algales (DeAngelis, P.L., 1999 Cell. Mol. Life Sci. 56: 670-682). WO 99/23227 divulga una hialuronato sintasa grupo I de Streptococcus equisimilis. WO 99/51265 y WO 00/27437 describen una hialuronato sintasa de grupo II de Pasturella multocida. Ferretti et al. revelan el operón de hialuronano sintasa de Streptococcus pyogenes, que se compone de tres genes, hasA, hasB, y hasC, que codifican hialuronato sintasa, UDP glucosa deshidrogenasa, y UDP-glucosa pirofosforilasa, respectivamente (Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 4658-4663, 2001). WO 99/51265 describe un segmento de ácido nucleico con una región de codificación para una hialuronano sintasa de Streptococcus equisimilis.

Bacilos son bien establecidos como sistemas de célula huésped para la producción de proteínas recombinantes y nativas. Es un objeto de la presente invención proporcionar métodos para producir un hialuronano en una célula huésped de Bacillus recombinante.

Breve resumen de la invención [0009] La presente invención se refiere a: Un método para la producción de un ácido hialurónico, que comprende: (I) cultivar una célula huésped de Bacillus bajo condiciones adecuadas para la producción del ácido hialurónico, donde la célula huésped de Bacillus comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende una secuencia codificante de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia de codificación de hialuronano sintasa: donde

(a) la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i)

o (II):

(b) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en

(i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii);

(c) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II):

y (ii) recuperación del ácido hialurónico del medio de cultivo.

La presente invención también se refiere a células huéspedes de Bacillus que comprenden: Una célula huésped de Bacillus que comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende un hialuronano: secuencia de codificación de sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia codificante de hialuronano sintasa, donde

o (ii);

(b) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en

(i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 12,... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Método para la producción de un ácido hialurónico, que comprende: (I) cultivo de una célula huésped de Bacillus bajo condiciones adecuadas para la producción del ácido hialurónico, donde la célula huésped de Bacillus comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende una secuencia codificante de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia codificante de hialuronano sintasa; donde

(a) la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii);

(b) la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 70% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II);

2. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

3. Método según la reivindicación 2, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

4. Método según la reivindicación 3, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID

nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

5. Método según la reivindicación 4, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

6. Método según la reivindicación 5, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

7. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II).

8. Método según la reivindicación 7, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

9. Método según la reivindicación 8, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II).

10. Método según la reivindicación 9, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

11. Método según la reivindicación 10, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

12. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

13. Método según la reivindicación 12, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-lucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

14. Método según la reivindicación 13, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

15. Método según la reivindicación 14, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

16. Método según la reivindicación 15, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

17. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 2, SEC ID NO:95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103.

18. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6deshidrogenasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105.

19. Método según la reivindicación 1, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-lucosa pirofosforilasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107.

20. Método según la reivindicación 1, donde el operón artificial además comprende una secuencia de tratamiento/estabilizante de ARNm localizada debajo de la secuencia del promotor y arriba de la secuencia codificante de hialuronano sintasa.

21. Método según la reivindicación 1, donde el operón artificial comprende un gen de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a un promotor corto de "consenso" de amyQ con la secuencia TTGACA para la región "- 35" y TATAAT para la región "-10".

22. Célula huésped de Bacillus que comprende un constructo de ácidos nucleicos que comprende un operón artificial que comprende una secuencia codificante de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a una secuencia del promotor foránea a la secuencia codificante de hialuronano sintasa, donde

23. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (II).

24. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 23, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

25. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 24, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

26. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 25, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC. ID Nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

27. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 26, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 2, SEC ID nº: 95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 1, SEC ID nº: 94, SEC ID nº: 92, o SEC ID nº: 102 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

28. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

29. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 28, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de

astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

30. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 29, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

31. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 30, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

32. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 31, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa deshidrogenasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105 (ii); una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 11, SEC ID nº: 40, SEC ID nº: 96, o SEC ID nº: 104 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

33. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 75% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

34. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 33, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 80% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

35. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 34, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 85% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID

nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia altas con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

36. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 35, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 90% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID Nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

37. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 36, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa es seleccionada del grupo que consiste en (i) una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido con una secuencia de aminoácidos con al menos 95% de identidad a SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107 (ii) una secuencia de ácidos nucleicos que se hibrida bajo condiciones de astringencia alta con SEC ID nº: 21, SEC ID nº: 42 o SEC ID nº: 98, o SEC ID nº: 106 y (iii) una cadena complementaria de (i) o (ii).

38. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia codificante de hialuronano sintasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 2, SEC ID NO:95, SEC ID nº: 93, o SEC ID nº: 103.

39. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 12, SEC ID nº: 41, SEC ID nº: 97, o SEC ID nº: 105.

40. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde la secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa codifica un polipéptido con la secuencia de aminoácidos de SEC ID nº: 22, SEC ID nº: 43, SEC ID nº: 99, o SEC ID nº: 107.

41. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde el operón artificial además comprende una secuencia de tratamiento/estabilizante de ARNm localizada debajo de la secuencia del promotor y arriba de la secuencia codificante de hialuronano sintasa.

42. Célula huésped de Bacillus según la reivindicación 22, donde el operón artificial comprende un gen de hialuronano sintasa, una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa 6-deshidrogenasa, y una secuencia de ácidos nucleicos que codifica UDP-glucosa pirofosforilasa operativamente enlazada a un promotor corto de "consenso" de amyQ que tiene la secuencia TTGACA para la región "- 35" y TATAAT para la región "-10".

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