Una fracción de agua bioactiva obtenible de las hojas de Gomphostemma niveum

CAMPO DE INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una novedosa fracción de agua bioactiva obtenida de las hojas de una hierba de nombre Gomphostemma niveum encontrada comúnmente en la parte Noroeste de India, y la cual es útil para inhibir el crecimiento del parásito malarial de Plasmodium faciparum. La presente invención se refiere también a un método para la extracción de dicha fracción bioactiva. La presente invención también proporciona métodos para el uso de tales fracciones de agua bioactiva en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la malaria.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Y TÉCNICA ANTERIOR

La malaria es la mas común entre las enfermedades transmitidas por insectos representando más de dos millones de muertes de los 400 millones de casos reportados cada año (Greenwood et. al., Nature 9415), 670(2002)) causadas por Plasmodium faciparum. (Depote et al. Trends in parásitology (20), 4, 165-198, (2004)). Más de la mitad de la población mundial vive en áreas donde continuan con riesgo de infección de la malaria (Sachs et al Nature, (415), 686 (2002). La derivación de importante compuesto antimalarial comenzó con el descubrimiento de polvo de corteza de cinchona (quinina)(Brooking, GB 106430, (1917)) en 1820. Posteriormente a la primera Guerra Mundial hubo un periodo de trabajo intenso para mantener tales registros etnobotanicos en los cuales el uso de la quinina ha permanecido como el medicamento de elección de la malaria. En 1940 otro medicamento antimalarial cloroquina (Ringwald et al, Boletín de la Organización Mundial de la Salud, 77(1), 34, (1999)) fue sintetizado y hasta recientemente fue el único medicamento usado para el tratamiento de la malaria. Desafortunadamente, después de un éxito inicial, el parásito malarial especialmente P. faciparum se volvió resistente a la cloroquina. El tratamiento de la malaria resistente a la cloroquina (White et al. Delaying anti-malarial drug resistance with combination chemotherapy Parasitologia, (41), 301-308, (1999)) fue hecho con medicamentos alternativos o combinación de medicamentos (Tulp et. al, Drug Discovery Today (9)450, (2004)) las cuales son bastante costosos y en ocasiones tóxicos. Además, estas combinaciones no siempre dependen del principio farmacocinético debido al conocimiento inadecuado del metabolismo y el mecanismo de acción de la mayoría de los medicamentos antimalariales. En los últimos años una medicamento antimalarial con base de una planta aislada de la planta china Artemisinin annua (Klayman, Science (228),1049,(1985)), Bharel et al. Fitoterapia, (67), 387-399, (1996)) probó ser muy activo contra P. falciparum. Sin embargo, el uso de Artemisinina, una lactona sesquiterpeno endoperóxido está de algun modo limitada a causa de su coste relativamente elevado, limitada producción de normas GMP y registros de toxicidad (Haynes et al. Curr. Opin. Infect. Dis, (14), 719-726, (2001)). La ruta actual para la síntesis total de Artemisinina (Qinghaosu) (US6, 710, 074 (2004) es demasiado compleja para la producción comercial (Schmid et al J. Am. Chem. Soc. (105), 624-625, (1983). Es actualmente preparada por medio de extracción a gran escala de Artenzisia annua (warwood dulce)) y derivado tal como el artemetero, artesunato, arteéter y dihidroartemisinina, y están preparados semi sintéticamente a partir del extracto purificado. Además, se han encontrado dificultades en la producción de material de alta calidad (Haynes et al. Curr. Opin. Infect. Dis., (14), 719-726, (2001)).

De este modo, la resistencia extendida del parásito de la malaria a la mayoría de los medicamentos, necesita el desarrollo de un nuevo medicamento (Wiesner et al. Angew. Chem. Int. Ed. (42), 5274-5293, (2003)) el cual debería ser estructuralmente diferente de los compuestos típicos con mecanismo de acción novedosa para superar el problema de resistencia. Recientemente Ihara et. al revelaron sobre compuestos teniendo actividad antimalarial (US6,710,074 (2002)) provenientes de la sintesis. En el pasado reciente se ha informado también que diferentes clases de compuesto

tienen actividad antimalarial como trioxane sustituido 1, 2, 4 (US 6,737,438(2002)), flavonoides (WO2004000306 (2003)), nafthilisoquinolina (US6,627,641(2003)), indoloquinazolas (US6,531,487(2003)), trioxolanos (US6,486,199(2002)), alcaloides de betacarbolina (US6,143,756(2000)), vocamina (WO 9948501(1999)), derivados de acetilglucosalina (DE3220426(1983)) y así sucesivamente. Recientemente muchas patentes como US6,710,074, WO2004000319, US5,264,726, US2003212098, WO2004000306, EP1076057, WO9948501, US5,290,553, US6,143,756 y US6,627,641 revelaron compuestos teniendo actividad anti Plasmodium falciparum de plantas principalmente de origen natural. De ahí el enfoque etnofarmacológico para la búsqueda de nuevos antimalariales ha probado ser más predictivo.

Como parte de programas de investigación continúos sobre biorecursos, hemos sometido a una investigación de antecedentes a gran número de plantas procedentes de la región noreste para los estudios de inhibición antimalarial. La selección de plantas estuvo principalmente basado en varios criterios tal como los datos quimiotaxonómicos, observación de campo y recolección al azar.

La malaria está causada por protozoarios del género Plasmodium. A causa de su predominio, virulencia y resistencia al medicamento, es la enfermedad parasitaria más seria y extendida encontrada por el ser humano. El arsenal inadecuado de medicamentos en uso extendido para el tratamiento de la malaria y la falta de nuevos medicamentos asequibles son los factores limitadores en la lucha contra la malaria, la cual subraya la necesidad continuada de investigación para el desarrollo de nuevos medicamentos.

Por consiguiente existe una necesidad de desarrollar nuevos compuestos activos como una alternativa a la cloroquina y especialmente de la artemisinina, un medicamento antimalarial con base en planta aislado de la planta china Artemisia annua. La necesidad urgente es investigar el origen natural con un nuevo enfoque etnofarmacológico para la búsqueda de nuevos antimalariales especialmente de la parte Noreste de India, lo cual no ha sido investigado hasta el momento. Otra necesidad es desarrollar un método adecuado para la extracción, aislamiento e identificación de principios bioactivos del extracto de planta teniendo propiedades antimalariales. Las nuevas técnicas recientemente desarrolladas de aislamiento y caracterización junto con el desarrollo de nuevas pruebas farmacológicas han llevado al interés en las plantas como una fuente de nuevos medicamentos. Sin embargo, un enfoque prometedor se necesita para usar esos agentes como plantillas para diseñar nuevos derivados con propiedades mejoradas.

OBJETOS DE LA PRESENTE INVENCIÓN

El principal objetivo de la invención es desarrollar un agente novedoso antimalarial inhibiendo el crecimiento del parásito malarial resistente a la cloroquina y sensible a la cloroquina de origen natural.

Otro objetivo de la invención es investigar las propiedades antimalariales de la planta medicinal india procedente de la región Noreste de India para el tratamiento de la malaria (la selección de la planta esta basada en datos quimiotaxonómicos).

Un objetivo más particular es desarrollar un método sencillo y eficaz para la extracción, aislamiento e identificación de los componentes activos procedentes de las plantas medicinales indias.

Otro objetivo más es realizar un bioensayo in vitro de extractos crudos contra el crecimiento del parásito malarial.

Otro objetivo adicional del invento es desarrollar un método HPLC de toma de huella reproducible para la supervisión rutinaria del extracto crudo.

Otro objetivo más de la invención es proporcionar una técnica adecuada para la identificación, evaluación y seguimiento de actividad antimalarial in vitro.

Otro objetivo de la invención es realizar los estudios de estabilidad de temperatura para los diferentes extractos crudos, será útil para el almacenamiento de fracción bioactiva.

Otro objetivo más es evaluar las diferentes rutas de administración y establecer su estabilidad en fluidos del cuerpo, la toxicidad y la capacidad para alcanzar el tejido infectado en una concentración adecuada durante análisis in vivo.

DECLARACIÓN DE INVENCIÓN

La presente invención por lo tanto proporciona una novedosa fracción de agua bioactiva obtenida de las hojas de Gomphostemma niveum.

La presente invención también proporciona un método... [Seguir leyendo]

1. Una fracción de agua bioactiva obtenible de las hojas de Gomphostemma niveum.

2. Un método para la preparación de una fracción bioactiva novedosa de Gomphostemma niveum comprendiendo secar al aire hojas de la planta, pulverizando las hojas secadas al aire y sometiendo el polvo a extracción con agua filtrando el extracto y concentrandolo a sequedad bajo fracción reducida para obtener el extracto de agua bioactiva.

3. Un método como se reivindica en Reivindicación 2 en donde la extracción de agua es llevada a cabo 3 veces.

4. Un método como se reivindica en Reivindicación 2 o 3 en donde cada extracción es llevada a cabo por el método de extracción Soxhlet a una temperatura de reflujo durante 8 horas.

5. Un método como se reveindica en Reivindicación 2 a 3 en donde cada extracción es llevada a cabo usando agua triplemente destilada.

6. Un método como se reivindica en Reivindicación 2 a 5 en donde el extracto filtrado es concentrado a sequedad bajo presión reducida de alrededor de 86 libras por pulgada cuadrada a una temperatura de arededor de 46°C usando un evaporador giratorio.

7. Un método como se reivindica en Reivindicación 6 en donde el extracto acuoso es además fraccionado por extracción líquido-líquido usando disolventes seleccionados del grupo que consta de hexano, éter dietilico, cloroformo y etanol sobre la base de incrementar polaridad, los extractos entonces siendo concentrados a sequedad bajo presión reducida de 150 libras por pulgada cuadrada y a una temperatura de alrededor de 30°C.

8. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la malaria comprendiendo un extracto de agua bioactiva de Gomphostemma niveum y uno o más aditivos admisibles farmacéuticamente.

9. Una composición como se reivindica en Reivindicación 8 en donde los aditivos farmacéuticamente admitisibles son seleccionados del grupo que consta de vehículos, diluyentes, agentes estabilizadores, disolventes, agentes aromatizantes, ligantes, lubricantes y otros similares.

10. Una composición farmacéutica como se reivindica en Reivindicación 8 y 9 en donde la composición es compuesta con miel dispersando los constituyentes en miel.

11. Uso de una composición farmacéutica como se definde en Reivindicación 8 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la malaria.