Compuesto que comprende un resto, seleccionado del grupo que consiste en restos de marcador de poli(aminoácido),

restos de marcador que no son de poli(aminoácido), portadores inmunogénicos de poli(aminoácido), portadores inmunogénicos que no son de poli(aminoácido), restos de poli(aminoácido) 5 que no son marcadores y restos de poli(aminoácidos) portadores que no son inmunogénicos unidos a un compuesto de sirolimus en la posición 26

ANTECEDENTES

La invención se refiere a compuestos, métodos y kits para la determinación de compuestos de sirolimus tales como, por ejemplo, rapamicina o derivados de la misma, en muestras, tales como muestras de pacientes, que se sabe o se sospecha que contienen tales compuestos de sirolimus.

El cuerpo se basa en un complejo sistema de respuestas inmunitarias para distinguir lo propio de lo ajeno. A veces, el sistema inmunitario del cuerpo debe controlarse con el fin de o bien aumentar una respuesta deficiente o bien suprimir una respuesta excesiva. Por ejemplo, cuando se trasplantan órganos tales como el riñón, corazón, corazón-pulmón, médula ósea e hígado en seres humanos, a menudo el cuerpo rechazará el tejido trasplantado mediante un proceso denominado rechazo de aloinjerto.

En el tratamiento del rechazo de aloinjerto, el sistema inmunitario se suprime frecuentemente de manera controlada con terapia farmacológica. Los fármacos inmunosupresores se administran con cuidado a los receptores de trasplantes con el fin de ayudar a prevenir el rechazo de aloinjerto de tejido ajeno. Los dos fármacos inmunosupresores administrados más frecuentemente para prevenir el rechazo de órganos en pacientes con trasplantes son ciclosporina (CSA) y FK-506 (FK). Otro fármaco que encuentra uso como inmunosupresor en los Estados Unidos y otros países es el sirolimus, también conocido como rapamicina. También se dice que los derivados de sirolimus son útiles como inmunosupresores. Tales derivados incluyen, por ejemplo, everolimus, y similares.

La rapamicina es un antibiótico de triona macrocíclico producido por Streptomyces hygroscopicus. La rapamicina está relacionada estructuralmente con el inmunosupresor FK-506 (tacrolimus) pero es diferente desde un punto de vista mecanístico. La rapamicina tiene actividad anti-Cándida, antiproliferativa y antitumoral. La rapamicina también disminuye las reacciones autoinmunitarias (LES, artritis adyuvante, encefalomielitis alérgica). La rapamicina es un potente inmunosupresor que inhibe la activación de células T y B mediante el bloqueo de acontecimientos mediados por citocinas, e inhibe la proliferación celular mediada por el factor de crecimiento.

Los efectos secundarios asociados con la rapamicina pueden controlarse en parte controlando cuidadosamente el nivel del fármaco presente en un paciente. Debido a que la distribución y el metabolismo de la rapamicina pueden variar enormemente entre pacientes y debido a la amplia gama y a la gravedad de las reacciones adversas, es esencial una monitorización precisa del nivel de fármaco.

Se han preparado varios derivados de rapamicina con la esperanza de encontrar un agente que tenga todas las propiedades inmunosupresoras deseadas de la rapamicina, pero cuyo uso dé como resultado menos efectos secundarios. Tales derivados incluyen la preparación de derivados de rapamicina-oxima (patentes estadounidenses n.os 5.672.605; 5.373.014; 5.023.264 y 5.378.836).

El documento US-A-2002/002273 se refiere a derivados 40-O-alquilados de rapamicina. El documento WO98/45333 A se refiere a la unión de divinilsulfona a rapamicina en la posición 42. El documento WO94/25022 A se refiere a conjugados de rapamicina en los que la unión es al O en la posición 42. El documento WO94/24304 A también se refiere a derivados 40-O-alquilados de rapamicina. El documento WO93/25533 A (página 5) da a conocer la conjugación en la posición 27 (32 según la numeración en el presente documento) de la rapamicina. El documento EP A 0 467 606 se refiere a la conjugación de la rapamicina también en la posición 27 de la rapamicina. Asimismo, el documento US-A-5.023.264 da a conocer conjugados de rapamicina en la posición 27. El documento US-B-6.328.970 se refiere a conjugados de rapamicina conjugados a través del O en las posiciones 42 ó 31.

La rapamicina y sus derivados se están evaluando en varios ensayos clínicos en todo el mundo como agentes inmunosupresores. En los ensayos, se recomienda la monitorización terapéutica de fármacos (TDM, therapeutic drug monitoring) de los niveles plasmáticos de rapamicina para todos los pacientes, y especialmente en pacientes pediátricos y en aquellos con insuficiencia hepática. La TDM también se recomienda cuando se coadministran potentes inductores o inhibidores de la enzima CYP3A4. Además, si se administra de manera concomitante rapamicina o su derivado con ciclosporina, se recomienda la TDM porque se altera la farmacocinética durante la coadministración de fármacos. Por ejemplo, si se administra rapamicina de manera concomitante con ciclosporina en vez de administrarse con cuatro horas de separación, aumentan los niveles valle de rapamicina. Por este motivo, así como para limitar determinados efectos secundarios, la TDM debe permitir mejores resultados clínicos en casos seleccionados.

Se requiere la monitorización terapéutica de concentraciones de rapamicina y fármacos relacionados en sangre para optimizar los regímenes de dosificación para garantizar una inmunosupresión máxima con una toxicidad mínima. Aunque la rapamicina es un agente inmunosupresor sumamente eficaz, su uso debe manejarse cuidadosamente debido a que el intervalo de dosis eficaz es estrecho y una dosificación excesiva puede dar como resultado graves efectos secundarios. Por otra parte, una dosificación demasiado pequeña de rapamicina puede conducir a rechazo de tejidos.

Existe, por tanto, una necesidad continuada de desarrollar métodos de diagnóstico rápido y preciso para medir los niveles de compuestos de sirolimus tales como rapamicina o un derivado del mismo en pacientes.

SUMARIO

Una realización de la presente invención es un compuesto que comprende un resto, seleccionado del grupo que consiste en un poli(aminoácido) (incluyendo restos de marcador de poli(aminoácido) y portadores inmunogénicos de poli(aminoácido)), o resto de marcador que no es de poli(aminoácido), o un portador inmunogénico que no es de poli(aminoácido), unido a un compuesto de sirolimus en la posición 26.

Otra realización de la presente invención es un compuesto de estructura I:

**(Ver fórmula)**

10 en la que A1 es oxo y A2 es un grupo de fórmula:

**(Ver fórmula)**

en la que: n, q, u, v y w son independientemente de 0 a aproximadamente 12, m es 0 ó 1, p es 0 ó 1, t es 0 ó 1, y es de 0 a 5, x es 0 ó 1, z es 0 ó 1, D es O o S, G es O o NR2,

R1 es un resto, seleccionado del grupo que consiste en grupos funcionales, restos de marcador de poli(aminoácido), portadores inmunogénicos de poli(aminoácido), restos de marcador que no son de poli(aminoácido) y portadores inmunogénicos que no son de poli(aminoácido), o

**(Ver fórmula)**

5 R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo C1-10, bencilo, OH, halógeno, alcoxilo C1-6; alquenilo C3-10 y alquinilo C3-10,

R4 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-10, bencilo, alquenilo C3-10, alquinilo C3-10; y

R5 y R6 se seleccionan independientemente de hidrógeno; fenilo; fenilo sustituido en el que los sustituyentes son X, Y y Z; 1- o 2-naftilo; 1-o 2- naftilo sustituido en el que los sustituyentes son X, Y y Z; 10 C(O)alquilo C1-6; alquilo C1-10; cicloalquilo C3-C10; alquilo C1-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6; fenilo, fenilo sustituido en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6; alquenilo C3-10; cicloalquenilo C4-10; alquenilo C3-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6, fenilo, fenilo sustituido en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6; alquinilo C3-10; y alquinilo C3-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6, fenilo, fenilo sustituido, en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6;

X, Y y Z se seleccionan independientemente de: hidrógeno; alquilo C1-7; alquenilo C2-6; halógeno; CN; C(O)H; grupos perhalosustituidos tales como CF3; SR7, en el que R7 es hidrógeno, alquilo C1-6, CF3 o fenilo; SOR7, en el que R7 es tal como se definió anteriormente; SO2R7, en el que R7 es tal como se definió anteriormente; CONR5R6, en el que R5 y R6 son tal como se definieron anteriormente; -(CH2)mOR8, en el que R8 es hidrógeno, alquilo C1-3; hidroxi-alquilo C2-3, y m es 0-2, y m es 0-2; alquilo C1-3; hidroxi-alquilo C2-3; CH(OR9)(OR10), en el que R9 y R10 son alquilo C1-3 o tomados... [Seguir leyendo]

1. Compuesto que comprende un resto, seleccionado del grupo que consiste en restos de marcador de poli(aminoácido), restos de marcador que no son de poli(aminoácido), portadores inmunogénicos de poli(aminoácido), portadores inmunogénicos que no son de poli(aminoácido), restos de poli(aminoácido) que no son marcadores y restos de poli(aminoácidos) portadores que no son inmunogénicos unidos a un compuesto de sirolimus en la posición 26.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto está unido al compuesto de sirolimus en la posición 26 mediante un grupo conector que comprende una funcionalidad oxima.

3. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto es un portador inmunogénico que no es de

10 poli(aminoácido) seleccionado del grupo que consiste en polisacáridos, ácidos nucleicos y partículas o un portador inmunogénico de poli(aminoácido) seleccionado del grupo que consiste en albúminas y globulinas.

4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto es un marcador de poli(aminoácido) que es una enzima o un resto de marcador que no es de poli(aminoácido) seleccionado del grupo que consiste en polinucleótidos que codifican para un catalizador, promotores, colorantes, moléculas fluorescentes, moléculas quimioluminiscentes, coenzimas, sustratos enzimáticos, grupos reactivos, moléculas orgánicas pequeñas, secuencias de polinucleótido amplificables y partículas.

5. Compuesto según la reivindicación 1, 3 ó 4, en el que el compuesto de sirolimus es un compuesto de estructura I:

**(Ver fórmula)**

en la que A1 es oxo y A2 es un grupo de fórmula:

**(Ver fórmula)**

en la que: n, q, u, v y w son independientemente de 0 a 12, m es 0 ó 1, p es 0 ó 1, t es 0 ó 1,

y es de 0 a 5, x es 0 ó 1, z es 0 ó 1, D es O o S, G es O o NR2, R1 es un resto, seleccionado del grupo que consiste en grupos funcionales, restos de marcador de

poli(aminoácido), portadores inmunogénicos de poli(aminoácido), restos de marcador que no son de poli(aminoácido) y portadores inmunogénicos que no son de poli(aminoácido), o

**(Ver fórmula)**

10 R2 y R3 se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo C1-10, bencilo, OH, halógeno, alcoxilo C1-6; alquenilo C3-10 y alquinilo C3-10,

R4 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-10, bencilo, alquenilo C3-10, alquinilo C3-10; y

R5 y R6 se seleccionan independientemente de hidrógeno; fenilo; fenilo sustituido en el que los sustituyentes son X, Y y Z; 1- o 2-naftilo; 1- o 2-naftilo sustituido en el que los sustituyentes son X, Y y Z; 15 C(O)alquilo C1-6; alquilo C1-10; cicloalquilo C3-C10; alquilo C1-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6; fenilo, fenilo sustituido en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6; alquenilo C3-10; cicloalquenilo C4-10; alquenilo C3-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6, fenilo, fenilo sustituido en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6; alquinilo C3-10; y alquinilo C3-10 sustituido en el que uno o más sustituyente(s) se selecciona(n) de hidroxilo, oxo, alcoxilo C1-6, fenilo, fenilo sustituido, en el que los sustituyentes en el fenilo son X, Y y Z y OC(O)alquilo C1-6;

X, Y y Z se seleccionan independientemente de: hidrógeno; alquilo C1-7; alquenilo C2-6; halógeno; CN; C(O)H; grupos perhalosustituidos; SR7, en el que R7 es hidrógeno, alquilo C1-6, CF3 o fenilo; SOR7, en el que R7 es tal como se definió anteriormente; SO2R7, en el que R7 es tal como se definió anteriormente; CONR5R6, en el que R5 y R6 son tal como se definieron anteriormente; -(CH2)rOR8, en el que R8 es hidrógeno, alquilo C1-3; hidroxi-alquilo C2-3, y r es 0-2; alquilo C1-3; hidroxi-alquilo C2-3; CH(OR9)(OR10), en el que R9 y R10 son alquilo C1-3 o tomados juntos forman un puente de etilo o propilo; -CH2)rOC(O)R8, en el que R8 y r son tal como se definieron anteriormente, y -(CH2)rC(O)OR8, en el que R8 y r son tal como se definieron anteriormente.

30 6. Compuesto según la reivindicación 5, en el que el resto es un portador inmunogénico de poli(aminoácido) seleccionado del grupo que consiste en albúmina sérica bovina, hemocianina de lapa californiana, ovoalbúmina de huevo y gamma-globulina bovina.

7. Compuesto de sirolimus según la reivindicación 5, en el que el compuesto de sirolimus de estructura I está unido a un polisacárido por medio de Ia y en el que el polisacárido está unido además a una partícula.

35 8. Compuesto de sirolimus según la reivindicación 7, en el que la partícula es una partícula de cromo.

9. Compuesto según la reivindicación 5, en el que el grupo Ia tiene la fórmula:

**(Ver fórmula)**

o en el que el grupo Ia tiene la fórmula:

**(Ver fórmula)**

o

**(Ver fórmula)**

incluyendo sales de imina de Ic',

o en el que el grupo Ia tiene la fórmula:

**(Ver fórmula)**

en el que en Id' n es 1, u es 2, y es 2 y v es 1 y en el que R1 se une a través de un resto amina de R1.

10. Anticuerpo producido contra un compuesto según la reivindicación 1 ó 5, en el que el resto es un portador inmunogénico de poli(aminoácido) o un portador inmunogénico que no es de poli(aminoácido) unido en la posición 26.

11. Kit que comprende un anticuerpo para un compuesto de sirolimus y un compuesto según la reivindicación 5, en el que el resto es un marcador de poli(aminoácido) o un marcador que no es de poli(aminoácido).

12. Método para determinar un compuesto de sirolimus en una muestra de la que se sospecha que contiene un compuesto de sirolimus, comprendiendo el método:

(a) proporcionar en combinación en un medio: 20 (i) la muestra, y

o bien (iia) un anticuerpo para el compuesto de sirolimus, y

(iiia) un compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto es un marcador de poli(aminoácido) o un marcador que no es de poli(aminoácido),

o bien (iib) un anticuerpo según la reivindicación 10, y (iiib) un conjugado de marcador de compuesto de sirolimus,

y

(b) examinar el medio para determinar la presencia de un complejo que comprende el compuesto de sirolimus y el anticuerpo para sirolimus, indicando la presencia del mismo la presencia del compuesto de sirolimus en la muestra.

13. Método homogéneo para determinar la presencia o cantidad de un compuesto de sirolimus en un medio que se sospecha que contiene un compuesto de sirolimus, comprendiendo el método:

a) proporcionar en combinación

(1) un medio que se sospecha que contiene el compuesto de sirolimus,

(2) un fotosensibilizador asociado con una primera partícula y que puede generar oxígeno singlete, y

(3) una composición quimioluminiscente que puede activarse mediante oxígeno singlete y puede asociarse con una segunda partícula,

en el que un anticuerpo según la reivindicación 10 se asocia con la primera partícula o la segunda partícula o ambas,

b) someter la combinación a condiciones para la unión del anticuerpo al compuesto de sirolimus, si está presente, e

c) irradiar el fotosensibilizador con luz y detectar la cantidad de luminiscencia generada por la composición quimioluminiscente, estando relacionada la cantidad de la misma con la cantidad de cada uno de los componentes en el medio.

14. Método según la reivindicación 13, en el que el anticuerpo se asocia con la primera partícula en virtud de estar unida a una molécula pequeña y la partícula comprende una pareja de unión para la molécula pequeña y en el que la segunda partícula se recubre con un análogo de rapamicina.