COMPLEJO DE ÁCIDO NUCLEICO Y COMPOSICIÓN DE SUMINISTRO DE ÁCIDO NUCLEICO.

Complejo de ácido nucleico y composición de suministro de ácido nucleico. Campo de la técnica La presente invención se refiere a un complejo de ácido nucleico que puede alojarse de forma continuada en una célula y que presenta una toxicidad baja y una seguridad elevada, y una composición de suministro del ácido nucleico. Antecedentes de la técnica Con los recientes avances en biotecnología, se han descubierto una serie de ácidos nucleicos que presentan funciones fisiológicamente activas en las células. Por ejemplo, se sabe que el ARNsi (ARN de interferencia pequeño) provoca la degradación del ARNm de un gen diana en una célula, e interfiere en la expresión del gen diana (ARN de interferencia). La función inhibidora en la expresión del gen diana debido a este ARN de interferencia es útil para el alivio o el tratamiento de síntomas de enfermedades provocadas por la expresión anómala de unos genes específicos o un grupo de genes, y se espera que se desarrollen unos agentes terapéuticos que utilizan el ARNsi. Sin embargo, como los ácidos nucleicos son macromoléculas solubles en agua que presentan una carga negativa, presentan una eficacia para el suministro de genes extremadamente baja que tiene como resultado unos efectos terapéuticos ineficaces en las terapias génicas incluyendo las terapias con ARNsi. Es sabido que la utilización de un vehículo (vector) suministra eficazmente los genes en las células. Los vectores incluyen vectores víricos y vectores no víricos. Los vectores víricos presentan una eficacia elevada para la introducción del ácido nucleico; sin embargo, existen varios aspectos de seguridad desconocidos incluyendo la patogenicidad, la inmunogenicidad y la citotoxicidad. Por consiguiente, es deseable la utilización de vectores no víricos para las aplicaciones clínicas. Los ejemplos de vectores no víricos incluyen Lipofectamine TM 2000, que ya está disponible comercialmente. Además, se ha descrito un lípido catiónico con una estructura específica (ver, Documento de Patente 1) y una composición (ver, Documento de Patente 2) que contiene un compuesto amfifílico y un policatión. El suministro intracelular del ácido nucleico que utiliza un vector no vírico se realiza mezclando primero el ácido nucleico que se debe suministrar con un vector no vírico para formar un complejo, y después se deja que el complejo se ponga en contacto con la célula diana. Cuando un vector no vírico puede formar un liposoma, el vector se incorpora a la célula con un ácido nucleico envuelto en el liposoma, llevando a cabo de este modo el suministro intracelular del ácido nucleico. Sin embargo, los ácidos nucleicos como el ARNsi presentan unas características específicas de una escasa estabilidad y una elevada carga eléctrica. Por consiguiente, el ácido nucleico presenta una estabilidad problemáticamente reducida cuando se mezcla con un vector no vírico, lo que inhibe la introducción continua del ácido nucleico en la célula. Aunque se conoce un ejemplo en el que el ácido nucleico está atrapado en un liposoma mediante la formación de un complejo entre el ARNsi y el polímero catiónico (ver, Documento no de patente 1), no se puede utilizar en la práctica debido a la citotoxicidad del polímero catiónico. Además, incluso cuando se puede formar un complejo estable que utiliza un vector no vírico conocido y un ácido nucleico, el complejo puede presentar una capacidad de suministro baja o se puede suministrar de forma rápida en la célula. Por consiguiente, estos vectores no víricos conocidos no pueden mantener de forma continuada el ácido nucleico en la célula; lo cual hace que fracase a la hora de mantener los efectos deseados obtenidos por el ácido nucleico. Teniendo en cuenta la técnica anterior, es deseable el desarrollo de técnicas para el suministro eficaz de un ácido nucleico (por ejemplo, ARNsi) en una célula y para el mantenimiento continuado del ácido nucleico con una toxicidad baja y una seguridad elevada. El Documento de Patente 3 describe las composiciones para el uso terapéutico de un ADN de interferencia. Entre estos, están los constructos del ARNi que se formulan como complejos supramoleculares a partir de polímeros como la ß-ciclodextrina que contiene polímeros o polímeros ramificados de ciclodextrina. El documento también describe el suministro del plásmido de ADN que codifica para el ARNsi que es complejo con un polímero ramificado de PEI25khi-CD (polietilenimina que presenta un grado elevado de injertos de ciclodextrina) dentro de las las células. El Documento de Patente 4 describe una dextrina cíclica altamente ramificada y un procedimiento para su producción. Documento de Patente 1: Publicación de Patente japonesa no Examinada nº 2002-529439 Documento de Patente 2: Publicación de Patente japonesa no Examinada nº 2005-508394 Documento de Patente 3: WO 2004/033620 A2 2   Documeto de Patente 4: USA 6248566 B1 Documento que no es de patente 1: Kentaro Kogure et. al., Development of a non-viral-multifuncional-envelope-type nano device by a novel lipid film hydration method, J. Control. Release, 98 (2004) 317-323. Descripción de la invención Problemas que debe resolver la invención Un objetivo de la presente invención es resolver los problemas de la técnica anterior. Específicamente, un objetivo de la presente invención es proporcionar un complejo de un ácido nucleico con una toxicidad baja y una elevada seguridad que puede mantener de forma continuada un ácido nucleico, como un ARNsi o similar, en una célula; y una composición para el suministro de ácido nucleico que puede suministrar eficazmente el complejo de ácido nucleico en la célula. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprende una composición de suministro de ácido nucleico, y un procedimiento para suministrar el ácido nucleico en la célula mediante el contacto de la composición de suministro de ácido nucleico con la célula. Medios para resover los problemas Los inventores de la presente invención han realizado una exhaustiva investigación para resolver los problemas anteriores, y han descubierto que se puede obtener un complejo de un ácido nucleico con una toxicidad baja y una seguridad elevada que puede mantener de forma continuada un ácido nucleico en una célula mediante la formación de un complejo que utilizan el ácido nucleico que se ha de introducir en la célula y una dextrina cíclica altamente ramificada, en la que la dextrina cíclica altamente ramificada es un glucano con un grado de polimerización de 50 a 5000 que presenta una parte de estructura interna cíclica ramificada formada por unas uniones -1,4-glucósido y por lo menos una unión -1,6-glucósido, y una parte de estructura externa ramificada unida a la parte de estructura interna cíclica ramificada. (1) Los inventores de la presente invención han descubierto que la seguridad, la eficacia del suministro intracelular y la continuidad intracelular de un ácido nucleico se puede mejorar más utilizando, como vehículo de suministro del ácido nucleico para introducir el complejo de ácido nucleico en la célula, un vehículo que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) colesterol y/o un derivado suyo, y (C) una amina primaria alifática. La presente invención se consiguió realizando más investigaciones basadas en estos tres descubrimientos. La presente invención proporciona los siguientes Puntos: Punto 1. Un complejo que comprende un ácido nucleico y una dextrina altamente ramificada, en el que la dextrina altamente ramificada es un glucano con un grado de polmerización de 50 a 5000, una parte de estructura interna cíclica ramificada formada por uniones de -1,4-glucósido y por lo menos una unión -1,6-glucósido, y una parte de estructura externa ramificada unida a la parte de estructura interna cíclica ramificada. Punto 2. El complejo de ácido nucleico según el Punto 1, en el que la cantidad de dextrina cíclica altamente ramificada es de 1 a 4000 partes en peso del ácido nucleico. Punto 3. El complejo de ácido nucleico según el Punto 1 ó 2, en el que el ácido nucleico es un ARNsi. Punto 4. El complejo de ácido nucleico según uno de los Puntos 1 a 3, que es un agregado que se obtiene mezclando un ácido nucleico con una dextrina altamente ramificada en una solución acuosa. Punto 5. Una composición de suministro de ácido nucleico que comprende el complejo de ácido nucleico según uno de los Puntos 1 a 4 y un vehículo de suministro del ácido nucleico. Punto 6. La composición de suministro de ácido nucleico según el Punto 5, en la que el vehículo de suministro del ácido nucleico es una composición que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un Punto seleccionado de entre colesterol y sus derivados, y (C) una amina primaria alifática. Punto 7. La composición de suministro... [Seguir leyendo]

1. Complejo de ácido nucleico que comprende un ácido nucleico y una dextrina cíclica altamente ramificada, en el que la dextrina cíclica altamente ramificada es un glucano con un grado de polimerización de 50 a 5000 que presenta una parte de estructura interna cíclica ramificada formada por uniones de -1,4-glucósido y por lo menos una unión -1,6-glucósido, y una parte de estructura externa ramificada unida a la parte de estructura interna cíclica ramificada. 2. Complejo de ácido nucleico según la reivindicación 1, en el que la cantidad de dextrina cíclica altamente está comprendida entre 1 y 4000 partes en peso por partes en peso del ácido nucleico. 3. Complejo de ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 2, en el que el ácido nucleico es ARNsi. 4. Complejo de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es un agregado que se obtiene mediante la mezcla de un ácido nucleico con una dextrina cíclica altamente ramificada en una solución acuosa. 5. Composición de suministro de ácido nucleico que comprende el complejo de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un vehículo de suministro de ácido nucleico. 6. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 5, en la que el vehículo de suministro de ácido nucleico es una composición que comprende (A) una diacilfosfatidilcolina, (B) por lo menos un elemento seleccionado de entre colesterol y lípidos catiónicos con un esqueleto de colesterol, y (C) un amino alifático primario. 7. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 6, en la que el Componente (A) en el vehículo de suministro de ácido nucleico es una diacilfosfatidilcolina en la que el grupo acilo presenta entre 4 a 23 átomos de carbono. 8. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 6, en la que el Componente (B) en el vehículo de suministro de ácido nucleico es colesterol. 9. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 6, en la que el Componente (C) en el vehículo de suministro de ácido nucleico es una alquilamina que presenta entre 10 y 20 átomos de carbono. 10. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 6, en la que la proparte molar de los Componentes (A): (B): (C) es 5-9: 1-5: 1. 11. Composición de suministro de ácido nucleico según la reivindicación 6, en la que el vehículo de suministro de ácido nucleico es una preparación de liposoma en la que la membrana del liposoma está formada por los Componentes (A) a (C). 12. Composición de suministro de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 5 a 11 de suministro de un ácido nucleico en una célula. 13. Composición farmacéutica que comprende la composición de suministro de ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 11. 14. Utilización de la composición de suministro de ácido nucleico según una de las reivindicaciones 5 a 11 para producir una composición farmacéutica destinada a suministrar un ácido nucleico en una célula.   16   17